刺激植物响应蛋白基因Epl1的载体构建及酵母转化

[目的]构建刺激植物响应蛋白Epl1基因的真核表达载体,筛选多拷贝酵母转化子。[方法]以深绿木霉(Trichoderma atroviride)ACCC30153的cDNA为模板进行PCR获得Epl1基因片段,并将目的片段插入表达载体pPIC9K的相应位置,获得重组表达载体,并将pPIC9K-Epl1转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,并用不同中终浓度的遗传霉素G418筛选多拷贝重组酵母菌株。[结果]对重组载体进行PCR及双酶切检测为阳性;在含有终浓度为2 mg/ml遗传霉素G418的YPD平板上筛选得到7株多拷贝的转化子GS115-Epl1,经PCR鉴定1株转化子呈阳性。[结论]Epl1基因的载体构建及多拷贝酵母转化子筛选为以后大量分离纯化Epl1蛋白并研究其功能奠定基础。

木霉菌的生物防治分子机理

木霉菌是重要的植物病害生物防治菌,该文在简要介绍木霉菌及其生防机制的基础上,综述了木霉与病原菌的互作关系,通过对营养和空间的竞争来抑制病原真菌的生长和繁殖,木霉菌对病原真菌的重寄生机制、木霉菌产生抗生素抑制或杀死病原真菌的抗生机制、以及木霉菌促进植物生长诱导植物系统抗病性机制等几方面阐述了木霉的生物防治机制,以期为全面了解木霉对植物真菌病害生物防治机制提供理论指导。

棘孢木霉T4小分子疏水蛋白基因hyb2克隆及序列分析

为了深入研究生物防治菌棘孢木霉T4菌株小分子疏水蛋白hyb2的功能,基于已知小分子疏水蛋白基因hyb2部分cDNA序列设计引物,分别以棘孢木霉T4菌株菌丝体总mRNA和基因组DNA为模板,进行PCR扩增,克隆获得hyb2的全长cDNA和DNA序列,其GenBank接受号分别为JX014433和JX185070,cDNA序列编码区长度为321bp,编码106个氨基酸。BlastP相似性分析表明该基因与深绿木霉的Tahyd5a(ABS59366)基因同源性最高为87%,SignalP信号肽分析表明N端第16和17个氨基酸中间有一个信号肽剪切位点(AFA||AP)。Pfam蛋白家族分析表明它属于hydrophobin_2 superfamily家族。将棘孢木霉T4菌株小分子疏水蛋白基因hyb2对深绿木霉ATCC74058基因组和绿色木霉Gv29-8基因组进行同源性搜索,在2个近缘种的基因组上分别获得9个和8个同源序列。其中,深绿木霉ATCC74058的hyb-a-7和绿色木霉Gv29-8的hyb-v-5疏水蛋白与棘孢木霉hyb2相似性最高分别为87%和70%,2个序列分别位于深绿木霉ATCC74058染色体骨架5和绿色木霉Gv29-8染色体骨架22上。

几种杀虫剂对分月扇舟蛾离体酶活性的影响

以分月扇舟蛾(Clostera anastomosis)3龄幼虫为研究对象,比较了几种杀虫剂对其离体保护酶(SOD和CAT)和解毒酶(Car E和GST)活性的影响。结果表明:0.100 mg·L-1高效氯氟氰菊酯、0.010 mg·L-1吡虫啉、0.001 mg·L-1灭幼脲对CAT活性的抑制作用较强,抑制率分别为63.50%、68.89%和62.11%,而敌敌畏、氧化乐果对CAT活性的抑制作用较小。0.100 mg·L-1高效氯氟氰菊酯对SOD活性的抑制作用最强,抑制率为60.82%,氧化乐果对SOD活性有较强的促进作用,激活率可达168.72%(10.000 mg·L-1)。10.000 mg·L-1敌敌畏对Car E的抑制作用最强,抑制率为52.63%,1.000 mg·L-1高效氯氟氰菊酯对Car E的激活作用最强,激活率为43.06%。供试杀虫剂对GST活性均有抑制作用,1.000 mg·L-1灭幼脲对GST抑制率可达51.75%。由此可见,离体保护酶和解毒酶的活性与杀虫剂的类型有直接关系,并且同一类型不同化学结构的杀虫剂对离体酶活性的影响存在显著差异。