刺山柑凝胶治疗类风湿关节炎作用及机理研究

为了证实刺山柑凝胶对类风湿性关节炎大鼠模型的治疗作用及机理,本研究建立了弗氏完全佐剂关节炎大鼠模型,经关节炎评分标准评价将造模成功大鼠随机分为刺山柑凝胶(高、中、低剂量)组、模型组、阳性药组,并给予1次/d,连续30d的药物干预。过程中记录大鼠体征状态、体重及足趾肿胀度;疗程结束后测量免疫器官指数,制作切片,分别HE(苏木精-伊红染色法)、甲苯胺蓝染色观察大鼠踝关节病理组织形态学变化;测定血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-17、IL-10表达水平。经各项观察指标组间比较结果证实,与模型组比较,刺山柑凝胶高、中、低剂量组明显抑制足趾肿胀度,促进免疫器官发育、增强机体免疫,发挥免疫调节作用;减少关节组织的炎细胞浸润、改善组织病理形态;下调TNF-α、IL-1β、IL-17,上调IL-10表达水平,差异均具有统计学意义(P<0.01)。综上,刺山柑凝胶经局部病灶部位皮肤给药后,能通过下调促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-17和上调抑炎因子IL-10表达水平作用机理,达到缓解类风湿性关节炎症状、缩短病程及治疗疾病的作用。

熵权模糊综合评判模型评价不同促透剂对刺山柑凝胶剂渗透性的影响

采用改良型Franz立式扩散池进行体外透皮实验,通过HPLC法测定刺山柑凝胶剂中有效成分芦丁含量,以稳态流量、渗透系数、滞后时间、增渗倍数、皮肤残留量为评价指标,基于熵权模糊综合评判模型研究不同促透剂及其用量对刺山柑凝胶剂中芦丁透皮吸收特征的影响,优化刺山柑凝胶剂处方。结果表明,刺山柑凝胶剂体外释药规律符合Higuchi方程,透皮速率恒定;熵权模糊综合评价显示3%氮酮的促透能力最佳,其评语为优的最大隶属度为0.7164。3%氮酮能有效促进刺山柑凝胶剂中芦丁的体外透皮吸收,可作为刺山柑凝胶剂的促透剂。

没食子温敏原位凝胶质量标准研究

目的建立没食子温敏原位凝胶质量控制标准。方法采用目测法观察没食子温敏原位凝胶外观,pH计测定pH值,离心法考察均一性,流变仪测定黏度、胶凝温度(Tsol-gel),恒温水浴测定胶凝时间,2020版《中华人民共和国药典》附录方法测定粒度。薄层色谱法(TLC)定性分析、高效液相色谱法(HPLC)定量测定制剂中没食子酸、没食子酸甲酯、鞣花酸,薄层生物自显影技术(TLC-Bio)确定抗氧化活性。结果没食子温敏原位凝胶为黄棕色均一透明溶液,pH值4.27±0.20,匀一性良好,Tsol-gel(33.2±1.2)℃、胶凝时黏度103 Pa·s,胶凝时间(130±15)s,粒度符合要求,TLC斑点清晰、分离度良好、专属性强,HPLC定量检测出没食子酸、没食子酸甲酯、鞣花酸分别在4.039~517(r=0.9997)、1.656~106(r=0.9997)、1.609~103(r=0.9995)μg·mL^(-1)范围内线性良好,TLC-Bio表明3种成分均具有抗氧化活性。结论确定了较全面控制没食子温敏原位凝胶质量的指标项目,各项测定指标结果均符合要求,建立了简便、可行、准确的测定方法。

基于JAK/STAT通路研究没食子酸抗结肠癌作用机制

目的:探讨没食子酸(GA)对人结肠癌细胞HCT-116和Caco-2活性和细胞内Janus激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路,抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)表达的影响讨论其作用机制。方法:设立GA组、空白组及5-氟尿嘧啶(5-FU,0.05 g·L^(-1))组,通过细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测GA(0.02,0.05,0.1,0.15,0.2 g·L^(-1))处理HCT-116和Caco-2细胞12,24,48,72 h增殖抑制率,选取有效抑制增殖的GA浓度;结晶紫染色法检测细胞集落形成能力;划痕实验检测细胞迁移;荧光探针法(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JAK2,磷酸化(p)-JAK2,STAT3,p-STAT3,Bcl-2和Bax的表达变化。结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,GA(0.02,0.05,0.1,0.15,0.2 g·L^(-1))组2种细胞在12,24,48,72 h后细胞增殖抑制率升高(P<0.05,P<0.01),并呈现浓度与时间依赖效应;与5-FU组比较,GA(0.2 g·L^(-1))组2种细胞在12,24,48,72 h后细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01),呈现时间依赖效应。与空白组比较,两种细胞GA(0.1,0.15,0.2 g·L^(-1))组细胞集落形成数显著降低(P<0.01),细胞集落形成抑制率显著升高(P<0.01),划痕愈合率显著降低(P<0.01),细胞内ROS荧光强度显著升高(P<0.01),上清液中IL-6,TNF-α表达降低(P<0.05,P<0.01),以上均呈现浓度依赖效应;与5-FU组比较,GA(0.2 g·L^(-1))组细胞划痕愈合率显著降低(P<0.01),细胞内ROS荧光强度显著升高(P<0.01),细胞上清液中IL-6,TNF-α表达降低(P<0.05,P<0.01)。Western blot显示,与空白组比较,GA(0.1,0.15,0.2 g·L^(-1))组2种细胞内p-JAK2,p-STAT3,Bcl-2表达明显降低(P<0.01),而Bax蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),p-JAK2/JAK2,p-STAT3/STAT3,Bcl-2/Bax显著降低(P<0.01),以上均呈现浓度依赖效应;与5-FU组比较,GA(0.2 g·L^(-1))组2种细胞内p-JAK2,p-STAT3,Bcl-2表达降低(P<0.05,P<0.01),而Bax蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),p-JAK2/JAK2,p-STAT3/STAT3,Bcl-2/Bax降低(P<0.05,P<0.01)。结论:GA可抑制结肠癌HCT-116和Caco-2细胞活性,其机制可能与增加细胞内ROS的积累,下调肿瘤微环境中的炎症因子IL-6,TNF-α的表达和JAK/STAT信号通路中p-JAK2,p-STAT3蛋白表达,进而下调Bcl-2,上调Bax有关。