血清中不同甘露(聚)糖结合凝集素浓度的绵羊感染绵羊肺炎支原体后免疫因子表达的变化

为研究中国美利奴羊不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)浓度感染绵羊肺炎支原体(MO)的免疫因子水平变化,本研究选择血清中MBL高、低浓度的绵羊各6只(感染组和对照组各3只),感染组人工感染MO,分别在人工感染前和感染后不同时间,采用荧光定量PCR法检测血液中血清因子及补体表达水平。结果显示,不同MBL浓度的绵羊人工感染后MBL m RNA水平呈下降趋势,MBL高浓度促炎因子IL-2和IFN-γ的m RNA表达水平较高,抗炎因子IL-4的m RNA表达水平在感染后1 d升高,此后开始下降,而IL-4的m RNA水平在14 d后有所升高;MBL低浓度羊感染后其TNF-α的m RNA水平显著升高,随炎症的缓解,逐渐降低;补体C1和C3的m RNA在感染后表现出不同的变化,MO感染可以激活补体途径。本研究结果表明,低血清MBL浓度与绵羊支原体肺炎具有一定的相关性,MBL不同浓度组之间其IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ、补体C1、C3水平存在差异,低浓度MBL的绵羊更易发生比较严重的炎症反应。

人工感染绵羊肺炎支原体后绵羊甘露聚糖结合凝集素变化及组织病理学

为探讨绵羊甘露聚糖结合凝集素(Mannose-binding lectin,MBL)对绵羊肺炎支原体抗性的研究,选取17只2月龄健康的中国美利奴羊,14只为试验组,3只为对照组。相同饲养条件下人工感染绵羊肺炎支原体,于攻毒前1周、攻毒后3周观察临床症状,并通过ELISA检测羔羊血清MBL水平,结果显示,试验组攻毒后不同个体MBL含量水平整体下降。宰杀后进行组织病理学评分,重度、中度、轻度病理变化的评分分别为18分以上、12分左右、9分左右,该评分结果与临床观察结果一致,可知攻毒前血清MBL水平越高评分越低。表明MBL对绵羊肺炎支原体有抗性。

绵羊卵巢组织消减文库构建及基因的定量研究

对成功构建的非繁殖季节湖羊、繁殖季节中国美利奴羊和繁殖季节湖羊卵巢消减文库进行文库间差异基因的比较。结果发现:铁蛋白重链多肽1(Fth1)、翻译调节肿瘤蛋白1(Tpt1)、核糖体蛋白11(Rpl11)和核糖体蛋白27a(Rps27a)在所构建的3个卵巢消减cDNA文库中均有表达。利用实时定量PCR对Fth1、Tpt1、Rpl11和Rps27a在卵巢组织中的表达进行验证,从而表明这些基因在上述发情期绵羊卵巢组织中的表达量显著高于乏情期。

绵羊颗粒细胞抑制素βA基因RNAi载体的构建

抑制素βA基因(Inhibin-βA,INHβA)的表达与绵羊(Ovisaries)的产羔数有一定关系。利用RNAi技术构建载体用来干扰INHβA的表达。根据GenBank上绵羊INHβA(GenBank:NW_004080167.1)mRNA的序列设计干扰片段4个PLLU2G-shINHβA-1(I-1)、PLLU2G--shINHβA-2(I-2)、PLLU2G-shINHβA-3(I-3)、PLLU2G-INHβA-4(I-4),其中I-2对INHβA表达的沉默效果最好。实验研究结果为绵羊繁殖性状和发情性状的研究奠定了良好的理论基础,构建的干扰载体有望进一步应用于提高绵羊繁殖性能的生产实践中。

MBL在绵羊呼吸道上皮细胞抗肺炎支原体感染过程中的机制探讨

为了探究甘露糖结合凝集素(MBL)对绵羊呼吸道黏膜上皮细胞抵御绵羊肺炎支原体(MO)感染的作用,本研究从绵羊血清中提取天然MBL蛋白,将绵羊呼吸道黏膜上皮细胞分4组,分别处理为:接种MO前细胞培养基中添加MBL蛋白;接种MO后细胞培养基中添加MBL蛋白;接种MO后继续细胞培养;正常培养。采用荧光定量PCR的方法,对各组细胞MBL、C3、ICAM-1、IL-6、SBD-1基因的表达量进行研究。结果显示:与对照组相比,其他组细胞密度均减少,且MBL、C3基因的表达量显著下降(P<0.05),同时ICAM-1、IL-6基因的表达量显著升高(P<0.05);接种MO前加入MBL的细胞ICAM-1基因的表达量相对其他组显著升高(P<0.05),且其SBD-1基因表达量极显著升高(P<0.01)。被MO感染的各组细胞均产生免疫应答,在感染前加入MBL组细胞的免疫应答更强烈,该过程或有ICAM-1和SBD-1参与。