高良姜素对宫颈癌SiHa细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨高良姜素(Galangin)对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡及基因表达的影响。方法从高良姜(Alpinia officinarum Hance)中提取分离高良姜素,(1)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,检测空白对照组、不同浓度高良姜素干预组、顺铂(Cisplatin)组SiHa细胞在24、48、72 h内的细胞存活率、用荧光倒置显微镜观察对细胞形态的影响。(2)采用流式细胞检测法检测高良姜素在24 h内对Siha细胞凋亡的影响。(3)采用荧光定量PCR的方法,分析半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)和CDK4等基因在高良姜素干预前、后的表达水平。结果以高良姜素干预宫颈癌Si Ha细胞后,与空白对照组比较,细胞存活率明显下降并呈剂量和时间依赖性;早期凋亡率明显上升,并呈剂量依赖性;细胞凋亡因子Caspase 3上调表达(P<0.05),呈剂量依赖性,而高良姜素干预前、后细胞周期蛋白激酶CDK4的表达调控无统计学意义(P>0.05)。结论高良姜素能抑制宫颈癌Siha细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机理可能通过提高细胞凋亡执行因子的活性诱导细胞凋亡,从而表现出抗肿瘤活性,但对细胞周期的影响需要进一步研究。

HPV16编码蛋白与宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2表达的关系

目的:研究人乳头瘤病毒16(HPV16)编码蛋白的表达与宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2基因表达水平的关系,探讨依赖于HPV感染的宫颈癌发病机制。方法:设计与合成HPV16编码基因E6和E7序列特异性短发夹RNA(sh RNA)寡聚核苷酸片段,构建表达sh RNA的p RNAi载体,其中携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,以此感染HPV16阳性的Si Ha宫颈癌细胞,采用荧光成像和实时荧光定量PCR(q PCR)分析等方法,评价载体转染效率、抑制效率及候选基因转录表达水平的变化。结果:在激光共聚焦显微镜下,观察到释放绿色荧光的细胞群,转染成功;根据定量q PCR分析,HPV16编码基因E6和E7的m RNA表达水平明显下降,sh RNA表达载体转染产生抑制效率;CDK4和BCL-2 m RNA表达水平明显下降,推测抑制HPV基因转录后,可能抑制宫颈癌细胞生长,引起细胞周期停滞;抑制E7基因表达后,CALCA和TFPI-2 m RNA表达水平明显上升,而抑制E6基因表达后,对上述基因表达水平的影响不明显。结论:HPV16编码蛋白质E7可能引起宫颈癌细胞内CALCA和TFPI-2基因表达下调,此为揭示依赖于HPV感染的宫颈癌发病机制提供了依据。

绝经后女性乳腺癌与体内IGFBP2、FGA表达上调的关系及意义

目的对乳腺癌患者外周血标本进行蛋白质水平筛查分析，明确女性乳腺癌发生及绝经前后与IGFBP-2和FGA表达调控的关系。为建立乳腺癌早期预警及临床治疗疗效评估指标提供依据。方法收集病理确诊为乳腺癌的患者和健康志愿者外周血标本共85例，其中绝经后患者29例，未绝经患者36例，正常对照20例。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，检测外周血（血浆）胰岛素样生长因子结合蛋白2（ insulin-like growth factor binding protein 2, IGFBP2）和纤维蛋白原α链（ fibrinogen alpha chain, FGA）含量。结果绝经后乳腺癌患者体内IGFBP-2含量升高，与未绝经患者和正常对照有显著差异（P〈0．05）。正常对照组患者血浆FGA含量低于未绝经及绝经后乳腺癌患者（P〈0．05）。未绝经乳腺癌与绝经后乳腺癌患者之间，FGA含量也存在显著差异（P〈0．05）。受信者操作特性（ receiver operating characteristic, ROC）曲线分析显示，血浆IGFBP-2和FGA表达水平均有较高的灵敏度和特异性。结论绝经后和未绝经乳腺癌患者伴有血浆IGFBP-2与FGA含量升高，可能与乳腺癌IGFBP-2、FGA蛋白质的表达调控异常存在内在联系，此为进一步揭示乳腺癌发病机制、早期预警和临床治疗疗效评估提供依据。