调控SUV39H1/2对水牛乳腺细胞增殖及STAT5a表达的影响

为了解SUV39H1/2基因对水牛STAT5a基因表达的调控作用,首先克隆不同长度水牛STAT5a启动子区,采用双荧光素酶方法检测启动子活性.利用SUV39H1/2-shRNA慢病毒感染水牛乳腺上皮细胞,检测细胞增殖及相关基因表达变化,并分析DNA甲基化水平.结果显示:克隆获得的2190 bp,355 bp,417 bp STAT5a启动子片段均具有活性,2190 bp片段活性显著高于其他两个片段(p<0.05),2190 bp启动子区存在sp1,p300,p53,NF-kB等转录结合位点.下调SUV39H1/2基因表达后,乳腺上皮细胞周期阻滞在S期,G0/G1期细胞比例无显著差异,G2期比例显著减少(p<0.05).qRT-PCR结果显示,抑制SUV39H1/2基因表达使乳腺上皮细胞分化及乳蛋白合成相关基因STAT5a,mTOR,且乳脂合成相关基因srebp1,fabp3表达水平均显著降低(p<0.05);STAT5a启动子区甲基化程度为31.5%,高于对照组15.5%.结果表明:抑制SUV39H1/2基因表达能够促进水牛乳腺上皮细胞增殖;SUV39H1/2基因可能通过调控STAT5a启动子甲基化水平,进而调控乳腺上皮细胞增殖分化、乳汁和乳蛋白合成相关基因表达.

水牛泌乳期与非泌乳期乳腺组织miRNAs表达谱鉴定及差异表达分析

旨在鉴定分析水牛乳腺泌乳期和非泌乳期miRNA的表达谱和差异作用机制。采集水牛泌乳期和非泌乳期乳腺组织,利用Solexa测序技术构建2个时期miRNAs表达谱,鉴定前体miRNAs、成熟miRNAs和新miRNAs,分析miRNAs的第一偏好性核苷酸和染色体分布,发掘水牛泌乳期和非泌乳期高表达及差异表达miRNAs。结果显示,本研究构建了水牛泌乳期和非泌乳期乳腺组织2个miRNA表达谱,分别获得12 768 110和12 569 467条18~31nt的高质量序列。测序确认了归属259个miRNAs家族的359个成熟miRNAs和363个pre-miRNAs及5个水牛特有的miRNAs。U是19和25nt miRNAs的5′端最普遍的核苷酸。bbu-let-7b、bbu-let-7a、miR-26a和miR-21等miRNAs在2个时期均呈现高表达;bbu-miR-148a、143、200c、200a和bbu-let-7f等miRNAs在非泌乳期特异性高表达。bbu-miR-125b、29a和bbu-let-7c等miRNAs在泌乳期特异性高表达。bbu-miR-148a、143、200a、141和30a-5p等miRNAs在泌乳期的表达量下降为非泌乳期的1/2以下。而bbu-miR-26a、29a、125b、99a和bbulet-7c等miRNAs在泌乳期表达量大于或等于2倍非泌乳期丰度。本研究构建了水牛泌乳期以及非泌乳期乳腺组织2个miRNAs表达谱,测序确认了259个水牛miRNAs家族的359个成熟miRNAs和363个前体miRNAs,5个水牛特有miRNAs和10个高差异表达miRNAs,为进一步阐明奶水牛泌乳关键miRNAs作用机制奠定了基础。