血清抗脂阿拉伯甘露糖及38kD抗体检测对涂阴肺结核及肺外结核诊断价值

目的 评估血清抗脂阿拉伯甘露糖及 38kDa抗体 (LAM 38kD IgG)检测对涂阴肺结核和肺外结核的诊断价值。方法 采用斑点免疫金渗滤法 (dotimmunogoldfiltrationassay ,DIGFA)检测5 7例涂阴肺结核 ,5 2例肺外结核 ,32例涂阳肺结核 ,2 9例肺癌患者及 33例正常人血清中LAM 38kD IgG。 结果 涂阴肺结核组LAM 38kD IgG阳性率为 73.7% ,其中痰结核菌涂 (- )培 (+ )组为84 .6 % ,涂 (- )培 (- )组为 70 .5 %。肺外结核组阳性率为 71.2 % ,涂 (+ )肺结核组阳性率 93.8% ,肺癌组假阳性率 31% ,健康组假阳性率 9.1%。结论 血清LAM 38kD

检测糖链抗原CA242对恶性胸液的诊断价值

目的 评价新型肿瘤标记物糖链抗原 (CA2 4 2 ) ,以及联合检测CA2 4 2、组织多肽抗原 (TPA)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)和癌胚抗原 (CEA)对诊断肺癌合并胸腔积液的临床价值。方法 应用ELISA法对 57例肺癌合并胸腔积液及 30例结核性胸膜炎患者血清及胸液进行检测。结果 肺癌患者血清及胸液四项肿瘤标志物平均浓度均高于结核性胸膜炎 (P <0 .0 1 )。血清及胸液CA2 4 2对诊断肺癌胸腔积液敏感性分别为53.6% (31 /57)、61 .4 % (35/57) ,肺腺癌为 65 .7% (2 3/36)、66.7% (2 4 /36) ,特异性 90 .0 % (2 7/30 )。联合检测二项及二项以上阳性者 ,血清及胸液诊断肺癌特异性分别为 96 .7% (2 9/30 )、1 0 0 .0 % (30 /30 ) ,敏感性分别为75.4% (43/57)、77.2 % (44/57)。结论 检测血清及胸液CA2 4 2有助于诊断肺癌合并胸腔积液 ,四项标志物联合检测可以显著提高肺癌合并胸腔积液诊断的敏感性和特异性。

全血γ干扰素释放试验在菌阴肺结核中诊断价值的临床观察

目的探讨基于RD1区抗原的全血γ干扰素释放实验对菌阴肺结核的诊断价值。方法选取健康对照组、菌阴肺结核组、菌阳肺结核组、肺部其他疾病对照组共计182例,抽取肝素抗凝血分别给以抗原ESAT-6、PPD、ESAT-6/CFP10融合抗原刺激,通过ELISA的方法检测抗原刺激后血浆中IFN-γ的数值。结果根据菌阳结核组和健康人群中IFN-γ分泌量绘制ROC曲线,选定ESAT-6为抗原刺激时cut-off值为31 pg/ml;PPD为抗原刺激时所分泌的IFN-γ的cut-off值为2068 pg/ml;ESAT-6/CFP-10融合抗原为抗原刺激时cut-off值为1458 pg/ml。如果选择ESAT-6或ESAT-6/CFP-10融合抗原任一阳性即判定为全血γ干扰素释放实验阳性,则其在菌阴肺结核中的敏感性为83%,特异性为76.8%。结论基于RD1区的全血γ干扰素释放实验在菌阴肺结核的诊断与鉴别诊断中,有较好的敏感性和特异性,可以用于菌阴肺结核的辅助诊断和鉴别诊断。

结核性与非结核炎性和恶性胸腔积液中γ-干扰素水平的比较

目的 检测结核性、非结核炎性及恶性胸腔积液中γ 干扰素的水平 ,探讨结核性与非结核性及恶性胸腔积液的γ 干扰素水平在鉴别诊断中的意义。方法 采用双抗体夹心ELISA法 ,对 5 1例结核性胸膜炎患者、30例恶性胸膜炎患者、2 0例非结核炎性胸膜炎患者胸液中的γ 干扰素水平进行检测。结果 3组γ 干扰素水平 (x±s )结核性胸膜炎组为 5 5 3.33± 70 .89pg ml,恶性胸膜炎组为 5 4.6 4± 36 .37pg ml、非结核炎性胸膜炎组为 5 8.75± 4 7.2 6 pg ml。 3组比较结核性胸膜炎组明显高于其他组 (P <0 .0 1)。结论 γ 干扰素检测可以作为结核性胸膜炎诊断的重要参考指标。

RASSF1A基因甲基化与非小细胞肺癌预后的相关性研究

背景与目的研究发现在很多肿瘤中均存在RASSF1A基因启动子区域高甲基化状态导致基因表达失活的现象,本研究就RASSF1A基因启动子的甲基化状态与非小细胞肺癌预后的关系进行探讨。方法采用甲基化特异的PCR检测150例非小细胞肺癌和20例肺部良性病变RASSF1A启动子甲基化状态。结果150例非小细胞肺癌中58例发现RASSF1A启动子存在甲基化(58/158,38.7%),20例肺部良性病变中无一例发现RASSF1A启动子甲基化。存在RASSF1A启动子高甲基化的病例预后较未发现RASSF1A甲基化的病例差(P=0.004),Cox回归分析显示RASSF1A启动子的甲基化状态是非小细胞肺癌术后的一个预后相关因素(RR=1.584,95%CI:1.040-2.411,P=0.032)。结论MSP法检测RASSF1A启动子甲基化状态可以作为非小细胞肺癌术后的一个预后评价指标。

脊柱结核脓液中结核杆菌的复苏培养

目的:探讨结核杆菌复苏因子(rpf)对脊柱结核脓液中结核杆菌生长的影响。方法:由宁夏医学院第一附属医院骨科提供的临床诊断为脊柱结核的住院患者手术获取的脓液标本25份,氢氧化钠溶液常规处理后,每份标本分为低浓度培养组、高浓度培养组和对照组。高浓度和低浓度组各设6管,分别含高、低两种浓度的rpfA、B、C、D、E及各种复苏因子组合,每管中加入7ml7H9液体培养基,并加入处理后的标本和相应的rpf;对照组1管,不加rpf。37℃培养,分别在第6天、第11天、第16天、第30天检测培养物600nm处的吸光度(OD值),同时于上述各时间点每管取10!l培养物涂7H11平板培养,取第30天培养物行抗酸染色检查,以证实培养物为结核杆菌。同时将处理后的脓液标本进行集菌法涂片抗酸染色和改良罗氏培养检测结核杆菌。结果:结核杆菌复苏培养阳性率(84%)显著高于涂片阳性率(60%)和改良罗氏培养阳性率(44%)(P<0.05或0.01)。复苏培养低浓度各组与高浓度各组在培养第11天、第16天和第30天时培养物OD值均显著高于对照组(P<0.05);复苏培养同一组内第11天、第16天和第30天时培养物OD值均显著高于第6天(P<0.01),而第16天和第30天与第11天比较无显著性差异(P>0.05);对照组第11天、第16天和第30天培养物OD值与第6天比较均无显著性差异(P>0.05);同一时间、同一浓度时,5种复苏因子单独应用与联合应用之间两两比较,除高浓度rpfA、B在培养第30天时分别与同一浓度、同一时间的rpfC、D、E和组合组之间及rpfA与B之间比较有显著性差异(P<0.05)外,其余均无显著性差异;同一种复苏培养,在同一时间高、低浓度比较,第30天时高浓度rpfA、B的OD值高于低浓度rpfA、B(P<0.05),低浓度rpfD高于高浓度rpfD(P<0.05),其余均无显著性差异。11例改良罗氏培养阳性和21例复苏培养阳性者的培养生长物抗酸染色检查均为抗酸杆菌,复苏培养生长物7H11平板培养第20d时可见淡黄色菜花状菌落,证实为结核杆菌。结论:结核杆菌复苏因子能有效促进脊柱结核脓液中结核杆菌的迅速生长,复苏培养法能提高脊柱结核脓液中结核杆菌的检出率。

胸液γ-干扰素和α-肿瘤坏死因子检测对结核性胸膜炎诊断价值的探讨

目的检测结核性胸膜炎及恶性胸膜炎患者血清与胸液的γ干扰素和α肿瘤坏死因子水平，探讨对结核性胸膜炎诊断的临床价值。方法采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测４１例结核性胸膜炎、４０例恶性胸膜炎患者血清及胸液和４１例健康对照组血清的γ干扰素和α肿瘤坏死因子水平。结果结核性胸膜炎患者两者含量（４２７３±５６８、１８４７±６４７ｐｇ／ｍｌ）明显高于恶性胸膜炎组（４５６±２０３、５０５±１８７）（Ｐ＜００１），且重叠性很小；而两组血清含量很低并相近，与健康对照组比较无显著差异（Ｐ＞００５）。γ干拢素和α肿瘤坏死因子作为诊断结核性胸膜炎的敏感性、特异性、准确性分别为１０００％、９７５％、９８８％及８７８％、９００％、８８９％。结论检测胸液γ干扰素和α肿瘤坏死因子对诊断结核性胸膜炎有较大的辅助意义。

活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4＋和CD8＋T淋巴细胞的特征研究

目的研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征。方法利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4^+Th1和CD8^+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况。结果与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α^+的CD4^+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ^+和IFN-γ^+TNF-α^+IL-2^+的CD4^+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ^+TNF-α^+IL-2^+的CD8^+Tc细胞。结论实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ^+TNF-α^+IL-2^+的多能CD4^+Th1及CD8^+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值。

N-乙酰半胱氨酸辅助治疗肺结核患者氧化/抗氧化失衡的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)辅助治疗对肺结核患者氧化抗氧化失衡的影响。方法测定20例肺结核患者在予以N-乙酰半胱氨酸治疗前后血清的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果在应用N-乙酰半胱氨酸后,患者的SOD、GPX增高(P<0.05),而MDA没有统计学变化。结论 N-乙酰半胱氨酸与抗结核药物联合应用,可改善肺结核患者的氧化/抗氧化失衡。

肺癌组织中抗氧化酶及氧化代谢物变化的定量分析

背景与目的抗氧化酶与肿瘤的关系逐渐受到重视。通过对113例原发性肺癌患者手术切除肿瘤组织和肿瘤远端正常肺组织的抗氧化酶和氧化代谢物及SOD mRNA及其蛋白表达量的测定,观察肺癌组织氧化/抗氧化状态的特点,为补充或完善肺癌发生和发展机制提供一定的依据。方法应用比色法测定肺癌组织抗氧化酶活性和氧化代谢物[包括:总超氧化物歧化酶(TSOD)(包括MnSOD和CuZnSOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)]的含量,采用半定量PCR和WesternBlot法测定患者组织中MnSOD和CuZnSOD的mRNA和蛋白表达量。结果①与肿瘤远端正常肺组织相比,肺癌组织中的TSOD、CuZnSOD、GPx活性增高,H2O2、MDA降低(P<0.05或P<0.01);②肺腺癌组织中的氧化代谢物H2O2、MDA高于肺鳞癌组织(P<0.05或P<0.01);③与肿瘤远端正常肺组织相比,肺癌组织中MnSOD mRNA和蛋白表达量降低,CuZnSOD mRNA和蛋白表达量增高(P<0.01)。结论肺癌组织存在着氧化/抗氧化失衡。SOD的异常表达水平均出现细胞异常生长,提示氧化/抗氧化失衡与肺癌的发生和发展存在一定的关系。

复苏因子E-DNA疫苗对BALB/C小鼠免疫效应的研究

目的:探索复苏因子E(RpfE)-DNA疫苗的小鼠免疫效果。方法:利用真核表达载体PCDNA3.1构建PCDNA3.1-RpfE重组质粒。将SPF级BALB/C小鼠随机分为5组,即空质粒组、RpfE质粒组、BCG组、生理盐水组、空白对照组,于0、3、6周先后3次免疫小鼠,在第3次免疫后3周,心脏取血ELISA方法检测血清RpfE IgG抗体效价、干扰素γ(IFNγ)水平;并行脾淋巴细胞培养,以RpfE蛋白刺激淋巴细胞,CCK-8法检测淋巴细胞增殖指数、ELISA方法检测上清诱导IFNγ和白介素12(IL-12)产生水平,乳酸脱氢酶试验检测小鼠脾细胞毒性T淋巴(CTL)杀伤效应。结果:(1)RpfE质粒组小鼠血清中RpfE抗体水平明显高于其他各组(P<0.001);RpfE质粒组IFNγ水平明显高于空质粒组、生理盐水组、空白对照组和BCG组(P<0.01或P<0.05)。(2)RpfE质粒组具有较强的刺激淋巴细胞增殖作用,CCK-8实验表明其增殖指数高于其他各组(P<0.05);上清ELISA检测表明IFNγ和IL-12产生水平也高于其他各组(P<0.05)。(3)RpfE质粒组脾淋巴细胞特异性CTL杀伤性与其他各组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:RpfE-DNA疫苗可诱导小鼠的免疫应答,具有良好的体液和细胞免疫原性。

不同抗原酶联免疫斑点检测技术对结核性胸膜炎辅助诊断价值的比较

目的探讨结核分枝杆菌不同抗原的酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)对结核性胸膜炎的辅助诊断价值。方法分离55例结核性胸膜炎患者和43例恶性胸腔积液患者的胸腔积液单个核细胞(PEMCs),经早期分泌抗原靶6kD(ESAT-6)、培养滤液蛋白10kD(CFP-10)、ESAT-6/CFP-10融合蛋白(E/C)、Rv3873和Rv3879c5个蛋白抗原共同孵育,进行ELISPOT试验,检测经抗原刺激后分泌干扰素-γ(IFN-γ)的效应T淋巴细胞(即斑点形成细胞,SFC)的数量,以中位数(四分位间距)表示。结果结核性胸膜炎组ESAT-6-ELISPOT、E/C-ELISPOT、CFP-10-ELISPOT、Rv3873-ELISPOT和Rv3879c-ELISPOT每孔的SFC数量分别为27(13～65)/5×104,26(12～52)/5×104,34(18～79)/5×104,26(8～50)/5×104和11(1～24)/5×104,均显著高于恶性胸膜积液组[1(0～2)/5×104,2(0～4)/5×104,2(1～4)/5×104,3(1～6)/5×104和1(0～3)/5×104,P均<0.01]。5个抗原中E/C的敏感性最高(92.7%),ESAT-6和Rv3879c的特异性最高(均为93.0%),ESAT-6的诊断准确性最高(91.8%)。结论 ESAT-6联合新抗原Rv3879c的ELISPOT能够辅助诊断结核性胸膜炎,但其特异性易受结核分枝杆菌潜伏感染的影响。

结核分枝杆菌复苏因子对结核性胸腔积液中结核分枝杆菌生长促进作用的探索

目的探讨结核分枝杆菌复苏因子（resuscitationpromotingfactor，Rpf）对结核性胸腔积液中病原菌生长的促进作用，以期提高临床标本体外培养阳性率，缩短培养时间。方法选择2012年10月至2013年10月期间北京胸科医院62例结核性胸膜炎患者，抽取胸腔积液经过离心处理后分别接种于改良罗氏培养基，以及含高、低浓度Rpf的MiddleBrook7H11固体培养基（简称“7H11培养基”）和生理盐水7H11培养基（生理盐水阴性对照组）中，每隔3d观察菌落形成情况，阳性者行抗酸染色（AFB）、PCR扩增试验及DNA测序进行菌种鉴定，观察比较高、低浓度Rpf对Mtb的促进生长作用。利用统计软件SPSS17．0进行统计学分析。Rpf培养组与改良罗氏培养组，以及Rpf培养组与生理盐水阴性对照组Mtb培养阳性率比较采用配对计数资料的x2检验；不同浓度Rpf培养组与生理盐水阴性对照组可视菌落平均时间（d）和阳性菌落数量比较采用配对样本t检验。以P〈0．05为差异有统计学意义。结果（1）结核性胸腔积液改良罗氏培养组中的Mtb培养阳性率为16．1％（10／62），含Rpf的7H11培养基中的Mtb培养阳性率为43．5％（27／62），两者比较差异具有统计学意义（x2=12．84，P〈0．01）；（2）含高、低浓度Rpf7H11培养基的可视菌落形成时间各为（20．92±0．58）d和（21．69±0．50）d，两组间差异无统计学意义（t=0．085，P〉0．05），但显著快于生理盐水对照组（不含Rpf）的（38．08±0．94）d（t值分别为10．19、9．91，P值均GO．001）；（3）含高、低浓度Rpf的7H11培养基菌落形成单位数各为（34．12±4．06）×10^2和（37．27±5．63）×10^2，两组间差异无统计学意义（t=0．45，P〉0．05），但显著多于生理盐水对照组（3．77±0．88）×10^2（t值分别为5．88、7．30，P值均〈0．001）。结论接种结核性胸腔积液后，含Rpf的7H11培养基较改良罗氏培养基可提高Mtb的培养阳性率，并缩短培养时间。

结核分枝杆菌Rv2352c基因的克隆表达及其抗原活性鉴定

目的构建含结核分枝杆菌(M.tb)rv2352c基因原核表达载体,经转化E.coli以表达Rv2352c融合蛋白,并研究其抗原性。方法用PCR扩增M.tb rv2352c基因,克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv2352c重组质粒,阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导Rv2352c蛋白表达。经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE和结核患者血清Western blot进行鉴定。将纯化的重组蛋白分别免疫家兔,制备抗Rv2352c抗血清,抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),取兔抗血清与纯化蛋白Rv2352c通过Western blot方法,检测抗体特异性。结果经酶切鉴定和测序分析证实rv2352c原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示,在45 kD处呈现单一蛋白条带。用重组蛋白Rv2352c免疫接种后可诱导出高滴度的特异性抗体。纯化蛋白通过Western blot鉴定证实为目的蛋白,有较强的免疫原性。结论成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv2352c,制备和纯化的Rv2352c融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,为进一步研究结核病的潜在分子标志物奠定基础。

血管内皮细胞生长因子水平对肺癌预后的影响

目的 探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)水平对肺癌预后的作用。方法 采用ELISA方法对肺癌组 (112例 )、对照组 (4 8例 )、健康组 (31例 )的血清、尿液及恶性胸腔积液 (4 6例 )和结核性胸腔积液 (31例 )中VEGF水平进行检测 ,并对其进行分析。结果 肺癌组血清VEGF含量 [(5 0 6 .2 2± 36 5 .0 6 ) μg/ml]明显高于对照组 [(2 37.16± 16 8.0 9) μg/ml]和健康组 [(131.32± 99.76 ) μg/ml](P <0 .0 0 1) ;血清VEGF的水平与病变侵袭程度、淋巴结转移、远处转移、生存时间密切相关 ;而与性别、组织学类型无关 ;恶性胸腔积液中VEGF含量 [(937.2 3±4 0 0 .92 ) μg/ml]明显高于结核性胸腔积液组 [(2 5 7.4 1± 36 1.4 7) μg/ml](P <0 .0 0 1) ;肺癌组尿液VEGF水平也明显增高 [(16 7.4 0± 186 .89) μg/ml]。 结论 血清VEGF检测可作为临床预测肺癌患者预后的重要指标之一。

新菌抗癌剂-Ⅰ号对肺癌的免疫增效作用

33例肺癌及20例癌性脑水患者经治疗后，化疗药物与NBAC－Ⅰ联合治疗组，外周血T细胞总数和T4+亚群以及NK细胞的细胞毒指数均明显提高，腺癌患者尤为突出；而单纯化疗组及单纯NBAC－Ⅰ治疗组的癌性脑水患者，外周血T细胞各亚群及NK细胞活性则无明显提高。联合治疗组较对照组疗效亦有明显提高，腺癌尤为显著，单独NBAC－Ⅰ治疗胸水疗效优异，有效率达95％。NBAC－Ⅰ可与化疗药物协同作用提高机体的细胞免疫功能及临床疗效。

结核分枝杆菌休眠菌的复苏培养与初始菌量的关系

目的探讨复苏因子对结核分枝杆菌休眠菌复苏作用与初始菌量的关系。方法取培养100d的陈旧结核分枝杆菌(休眠菌),用7H9稀释成麦氏比浊1mg/ml,之后倍比稀释成0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/ml。取12支无菌培养管,加入5ml7H9培养基并分为2组,每组依次加入上述各浓度结核分枝杆菌,第1组加入复苏因子蛋白质,第2组作为对照加入等体积7H9,37℃培养,分别在15、25、30、35d检测光密度值,并取1μl培养液涂7H11平板培养,进行菌落计数。重复上述实验。结果0、15、25、30、35d分光光度计检测光密度(OD)值结果显示:各浓度组间细菌增殖呈直线正相关性(P<0.05,P<0.01),即复苏因子对不同稀释浓度的复苏作用相同。7H11培养结果和OD值检测结果显示:各组两种方法检测结果呈直线相关性(P<0.05,P<0.01),即两种方法检测结果有一致性。结论复苏因子对结核分枝杆菌休眠菌的复苏作用与初始菌量无关。

结核分枝杆菌休眠菌复苏初期与活跃期的差异表达基因分析

目的 寻找休眠结核分枝杆菌复苏的关键基因，探讨结核分枝杆菌复苏的机制。方法 取7H9培养20天的H37Rv作为对数生长期的活跃结核分枝杆菌，并提取RNA。取一部份对数生长期的H37Rv加入亚甲兰作为无氧标志，37℃密封培养，无氧状态下生长的H37Rv会随着培养基中的氧气耗尽而进入休眠状态，继续无氧培养1个月的陈旧菌即为休眠菌，取休眠菌，加入适量5个复苏因子蛋白质组合，37℃有氧培养三天，提取RNA。用mRNA纯化试剂盒纯化RNA。利用抑制性消减杂交（SSH）技术分析复苏因子蛋白刺激三天的休眠结核分枝杆菌和对数生长期结核分枝杆菌的基因组mRNA的表达差异。并通过基因克隆技术、基因测序和序列分析，寻找差异表达基因。结果我们通过SSH杂交，以活跃结核分枝杆菌cDNA为Tester的正相杂交和以复苏因子蛋白刺激三天的休眠结核分枝杆菌cDNA为Tester的反相杂交的各自Tester高表达或特异性表达的片段都得到了选择性扩增，杂交产物经连接pTA2载体、转化DH5α、蓝白斑筛选，正相获得78个阳性菌落，反相获得46个阳隆菌落。阳性单个菌落经液体LB培养基培养，以菌液为模板，T7、M13为引物，扩增插入片段，能扩增到明显的带，且带大于350pb的为阳性。则正相得到66个阳性扩增带，反相得到39个阳性扩增带。这105个阳性扩增带的菌液经测序分析，将序列完全相同的特异性序列筛选合并，正相获得41个不同的特异性序列，反相获得32个不同的特异性序列。再去掉因消减杂交不完全而使正、反相中都获得的相同序列，则正相有30个特异性序列，反相有21个特异性序列。51个序列通过Genbank检索，因有不同序列检索得到对应同一基因的情况，因此，正相30个特异性序列经检索后对应22个不同的基因，反相21个特异性序列经检索后对应9个不同的基因。在我们的实验中有2个基因是正、反相共有的（ribosomal RNA 23S rrl和Rv3661）。最后正相获得了20个活跃结核分枝杆菌特异性表达或高表达的功能基因，反相获得了7个休眠结核分枝杆菌特异性表达或高表达的功能基因，根据其功能不同分为8大类。结论利用SSH杂交技术可以筛选到复苏因子蛋白刺激三天的休眠结核分枝杆菌和活跃结核分枝杆菌的差异表达基因。为寻找休眠结核分枝杆菌复苏的关键基因奠定了基础。

对氨基水杨酸（PAS）耐药与结核分枝杆菌thyA基因突变的研究

目的 检测结核分枝杆菌临床分离株对氨基水杨酸（PAS）耐药和胸苷酸合成酶基因（thyA）突变的关系，以探讨结核分枝杆菌PAS耐药的分子机制。方法95株结核分枝杆菌临床分离株中的51株PAS敏感株和44株PAS耐药株的PAS耐药相关基因thyA基因进行PCR扩增，扩增产物纯化后进行序列测定，与结核分枝杆菌标准株H37Rv的野生型岫，A基因序列进行对比，判断这些临床分离株的thyA基因有无突变。结果51株PAS敏感株thyA基因未检出突变。44株PAS耐药株中有16个临床分离株的thyA基因检测到突变，突变检出率为36．4％（16／44）。突变类型包括置换、颠换、插入、缺失，均为单碱基改变或单碱基缺失，其中2株为thyA基因2个位点联合突变。结论结核分枝杆菌tyA基因突变是其产生PAS耐药的重要原因之一。结核分枝杆菌胸苷酸合成酶是PAS作用的重要靶位。

肺癌患者血清氧化／抗氧化状态的初步研究

目的通过对141例原发性肺癌患者血清中抗氧化酶和氧化代谢产物的测定，观察肺癌患者氧化／抗氧化状态的特点，为补充或完善肺癌发生和发展机制提供依据。方法用比色法测定患者的氧化／抗氧化酶的活性、含量，包括：总抗氧化能力（total antioxidant capacity，TAOC）、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，TSOD）（包括MnSOD和CuZnSOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GPx）、过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）、丙二醛（malonaldehyde，MDA）。结果（1）肺癌患者氧化／抗氧化状态的特点：与对照组相比，肺癌患者血清中TAOC、MnSOD和GPx明显降低，CuZnSOD、H2O2、MDA明显增高（P〈0．01）。（2）肺癌患者氧化／抗氧化的影响因素：①肺腺癌、小细胞癌组血清H2O2高于肺鳞癌组（P〈0．05）。②不同分化程度组间无显著性差异（P〉0．05）。③Ⅳ期TSOD较I期患者增高（P〈0．01）。结论肺癌患者存在着氧化，抗氧化失衡，其特点为血清中，除CuZnSOD外，抗氧化酶活性降低，氧化代谢产物增高。不同组织学类型及TNM分期对肺癌患者氧似抗氧化失衡有一定的作用。