虾夷扇贝热休克蛋白60基因克隆及表达特性研究

旨在探讨虾夷扇贝高温应激的分子机理并为解决该种夏季死亡问题打下基础。基于HSP60的转录组序列设计特异引物,采用RACE技术成功克隆获得虾夷扇贝热休克蛋白60(My HSP60)c DNA全序列。其c DNA序列全长3 368 bp,包括68 bp的5'UTR,1 569 bp的3'UTR和1 731 bp的开放阅读框,共编码576个氨基酸。利用基因步移技术扩增My HSP60基因启动子区域序列并测序,获得My HSP60基因启动子区域序列1 236 bp,该区域包含2个TATA盒,4个CCAAT盒,3个热激元件。基于氨基酸序列构建的系统进化树与传统物种进化规律基本吻合。通过实时PCR检测发现HSP60在虾夷扇贝各组织中均有表达,升温后肾脏中该基因的转录量升高极显著,而肝胰腺、外套膜、血淋巴和闭壳肌中的转录量升高显著(P<0.05),说明该基因在热应激过程中发挥一定作用。

虾夷扇贝酚氧化酶基因克隆及表达特性研究

酚氧化酶是一种含铜的金属酶，广泛分布于微生物、动植物及人体中。该酶在无脊椎动物先天免疫防御中起着重要的作用。用分子克隆技术得到了虾夷扇贝酚氧化酶cDNA基因全序列，并利用Real‐TimePCR方法分析了酚氧化酶基因在虾夷扇贝不同组织中表达概况以及鳗弧菌注射后不同时段的相对表达量。试验得到的酚氧化酶基因全长1850bp，其包括长为1470bp的开放阅读框，编码489个氨基酸，5’UTR和3’UTR分别为37bp和343bp。实时定量分析研究显示，酚氧化酶基因在肝胰腺、外套膜、肾、闭壳肌、鳃和血中均有表达，其中外套膜表达最高。鳗弧菌注射后6h，酚氧化酶基因表达量显著低于对照组，而注射后12～36h，酚氧化酶基因表达量显著高于对照组，表明该基因可能在免疫过程中发挥重要作用。

甲壳动物蜕皮相关基因的研究进展

世界上甲壳动物的种类多达约2.6万种,其中虾、蟹等甲壳动物营养丰富,味道鲜美,具有很高的经济价值。甲壳动物通过退去旧的外骨骼,长出新的外骨骼来完成自身的生长。甲壳动物的蜕皮由神经、内分泌系统间的协调作用[1],及外源因子的干扰作用等共同决定蜕皮周期的长短,影响生长发育。