多肽UNAM的生物合成及其在DC-CIK细胞培养中的应用

目的制备尿苷二磷酸-N-乙酰胞壁酸(UNAM),并研究其提升DC-CIK细胞识别及杀伤肿瘤细胞的作用。方法通过设计体外酶促反应合成多肽UNAM的路线,构建体外酶促反应体系,按照UNAM的路线图合成多肽产物,并采用制备液相纯化和收集最终产物。使用常规培养方法和添加UNAM的方法分别对DC-CIK细胞进行诱导培养,观察培养后的DC-CIK细胞对荷瘤小鼠的治疗效果。结果利用大肠杆菌异源表达系统,获得了UNAM生物合成途径中的NahK、GlmU、MurA和MurB 4个酶,并成功合成了分枝杆菌细胞壁肽聚糖生物合成中的中间产物UNAM。在动物实验中,UNAM-DC-CIK细胞对荷瘤小鼠的治疗效果比常规方法的DC-CIK细胞更好,其带瘤生存期更长(43 d),优于DC-CIK治疗组(38 d)和对照组(25 d)。结论UNAM可以提升DC-CIK细胞的增殖能力和对肿瘤的杀伤能力。

人类线粒体肌酸激酶的固定化及酶学性质研究

目的人源肌酸激酶uMtCK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,开发固定化uMtCK酶法生成磷酸肌酸,实现其工业化应用价值。方法将异源表达的uMtCK固定在纳米磁性材料Fe3O4@Histidine-Ni上,制备固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK,并进行催化反应。与游离酶uMtCK比对酶学性质和动力学参数,测定固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的重复使用次数。结果与游离酶uMtCK相比,固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的最适反应温度提高5℃,最适pH降低0.5个单位,在50℃、pH7.5下孵育2h,残余酶活为51%,而游离酶仅为27%;uMtCK的KmCr为10.7mmol/L,为Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的1.1倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的kcat/KmCr值是5.3L/(mmols),是uMtCK的1.3倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK在经历9次循环使用后,活力还能保持50%以上,显示了良好的稳定性和重复使用性。结论与uMtCK相比,Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK具有良好的热稳定性和重复使用性,具有一定的工业化价值。