红花多糖对菌群失调小鼠肠道菌群及细胞因子的影响

目的探究红花多糖对盐酸林可霉素引起的小鼠肠道菌群失调的改善效果。方法选取50只昆明小鼠适应性饲养1周后,随机取10只为对照组,其余40只给予盐酸林可霉素连续灌胃3 d,构建肠道菌群失调模型小鼠,然后随机分为模型组、红花多糖组(150 mg/kg)、丽珠肠乐组(7 mg/kg)、自然恢复组,每组各10只。除模型组外,其他各组第4天起灌胃给药,对照组、自然恢复组灌胃等体积的生理盐水,连续灌胃7 d。灌胃结束后,用酶联免疫吸附法(ELISA)对各组小鼠血清白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)进行检测。无菌收集小鼠回盲部内容物对肠道菌群计数。结果小鼠给予一定剂量的盐酸林可霉素后肠杆菌和肠球菌数量显著增加(P=0.000),双歧杆菌和乳酸杆菌数量明显下降(P=0.000,P=0.003);血清中IL-6和TNF-α水平显著提高(P=0.000)。红花多糖干预后,双歧杆菌和乳酸杆菌数量显著增加(P=0.001),肠杆菌和肠球菌数量显著减少(P=0.037,P=0.002);IL-6和TNF-α水平显著降低(P=0.000)。结论红花多糖对小鼠的肠道菌群失调具有调节作用,并使其恢复正常状态。

熊胆粉对运动性疲劳大鼠的抗疲劳作用研究

目的:分析熊胆粉用于运动性疲劳大鼠抗疲劳作用及其作用机理,旨在为开发缓解疲劳和提高运动能力的系列天然产品提供可靠的实验室依据。方法:将50只wistar大鼠根据随机数字表法分为五组,每组各10只,分别为空白对照组(未给药未运动)、疲劳模型组(未给药的运动大鼠)、高剂量给药组[2.8 g/(kg·d)熊胆粉]、中剂量给药组[1.4 g/(kg·d)熊胆粉]、低剂量给药组[0.7 g/(kg·d)熊胆粉]。空白对照组和疲劳模型组大鼠每日给予相应剂量的蒸馏水。末次灌胃给予熊胆粉溶液后,将各组大鼠分别置于段氏实验跑台,观察其初始时刻状态,记录并对比各组大鼠跑台运动时间;取血,检测并对比各组大鼠血清血乳酸(BLA)、尿素氮(BUN)表达及乳酸脱氢酶(LDH)活力;取血后将大鼠处死,取大鼠肝脏,精密称取100 mg,另取各实验组大鼠后肢大腿内侧肌肉组织100 mg,检测并对比其肝糖原(LG)、肌糖原(MG)含量。结果:五组运动大鼠中,高剂量给药组运动时间>中剂量给药组>低剂量给药组>疲劳模型组,组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。五组大鼠中,空白对照组血清BLA、BUN表达、LDH活力最低,后依次为高剂量给药组、中剂量给药组、低剂量给药组,疲劳模型组最高。血清BLA、BUN表达五组组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05);中剂量给药组与高剂量给药组LDH活力比较,差异无统计学意义(P>0.05),其他组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。五组大鼠中,高剂量给药组大鼠LG、MG表达均最高,后依次为中剂量给药组、低剂量给药组,疲劳模型组表达均最低;各组MG含量组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);中剂量给药组与低剂量给药组LG含量比较差异无统计学意义(P>0.05);其他组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:熊胆粉能够提高运动性疲劳大鼠LDH活力,增加其LG与MG含量,使大鼠BLA含量降低,运动耐力大大增强,药物抗运动性疲劳效果理想。

CDK1、CENPT和P53在乳腺癌中的表达及意义

目的:研究CDK1、CENPT和P53在乳腺癌中的表达情况,探讨基因表达与乳腺癌患者生存率及病理阶段分型的关联性和调控关系。方法:GEPIA数据库分析乳腺癌和正常样本中的表达与总体生存率,乳腺癌患者基因表达与病理分期影响,CENPT与CDK1、BAX、BCL2、CASP3、P53的相关性分析,UALCAN数据库验证结果。敲减CENPT后,半定量PCR检测CDK1、BAX、BCL2、CASP3、P53在MCF7细胞系中的表达。结果:CDK1、CENPT在乳腺癌及正常组织表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05);CDK1、BCL2表达与不同病理分期比较,差异有统计学意义(P<0.05);P53不同表达乳腺癌患者总体生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌MCF7细胞系敲减CENPT后P53、BAX、CASP3表达量均减少(P<0.05)。结论:与正常组织比较,在乳腺癌中CENPT表达水平降低,CDK1表达水平升高;P53表达水平与生存率成反比。乳腺癌中CENPT、P53、Bax、CASP3信号通路调节细胞凋亡参与乳腺癌的进展。

生物工程技术在SPF级大小鼠生物净化上的应用及其临床价值

目的:探究在大小鼠生物净化中应用生物工程技术的效果。方法:自2016年1月开始,本研究中心选择常用的C57BL/6J品系小鼠作为研究A组、选择SD大鼠作为研究B组,在繁殖中应用生物工程技术;另选择一部分小鼠与大鼠作为对照A、B组,在其繁殖过程中不做任何干涉随机。每组研究对象15只。实验开始前,对所有鼠的病原微生物进行检测。应用体外受精与胚胎移植的生物工程技术,在HTF培养液中完成受精并发育至2-细胞时期,将胚胎移植入购买来并激素处理过的代孕SPF级ICR雌鼠的输卵管中。代孕ICR雌鼠生下子代,子代3周离乳后,对代孕ICR雌鼠和随机挑选的子代一只进行检测。统计研究A、B组的采集卵子数、2-细胞数与移植胚胎数。统计四组研究对象的平均每胎产仔数、存活率。统计净化前后四组研究对象的病原微生物检出率及净化率。结果:研究A、B组生物工程技术指标(采集卵子数、2-细胞数与移植胚胎数)比较,差异均无统计学意义(P>0.05);四组研究对象平均每胎产仔数与存活率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);四组研究对象在合笼与体外受精前,均尾静脉取血进行血霉菌培养。仔鼠出生3周离乳后,每胎随机选一只与其代孕ICR母鼠一起进行尾静脉取血,进行血霉菌培养,对照A、B组的净化率均显著低于研究A、B组(P<0.05)。结论:在小鼠大鼠的生物净化中应用体外受精与胚胎移植的生物工程技术,在不影响代孕母鼠的生殖能力与子代存活率的情况下,显著地提升了净化率,达到了研究的目的,从而能为临床动物实验提供更多优质可用的实验动物。

基于创新型人才培养的基因工程课程教学实践与思考

培养创新型人才顺应我国当前科学研究和创新发展的趋势,是我国当前社会进步和经济发展的必然要求。在当前时代背景下,普通高等院校基因工程课程也要进行教学内容更新与教学方法改革,以达到创新型人才的培养目标。本文对基于创新型人才培养的基因工程课程进行教学实践与思考。

胱硫醚β-合成酶基因多态性与牡丹江地区汉族朝鲜族原发性高血压的相关性

目的探讨胱硫醚β-合成酶(CBS 844ins68)基因多态性与牡丹江地区汉族朝鲜族原发性高血压的相关性研究。方法运用PCR的方法检测牡丹江地区汉族高血压患者107人,汉族正常对照组101人,朝鲜族高血压患者105人,朝鲜族正常对照组96人的血浆Hcy水平及其CBS 844ins68基因型,并进行测序验证。结果未发现CBS 844ins68基因杂合突变型和纯合突变型。结论 CBS 844ins68多态性与本地区汉族、朝鲜族原发性高血压的发生无相关性。

Hcy及MTHFR C677T多态与牡丹江汉族高血压相关性研究

探讨了同型半胱氨酸(Hcy)及5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与牡丹江地区汉族原发性高血压(essential hypertension,EH)的相关性。采用PCR-RLFP的方法检测牡丹江地区汉族208例MTHFR C677T基因型,同时检测血浆Hcy水平。结果显示血浆Hcy水平与原发性高血压和正常对照组差异有统计学意义(OR=1.06795%CI 1.003~1.135,P<0.05)。基因多态与汉族原发性高血压不具有相关性(P>0.05),汉族MTHFR C677T TT基因型Hcy水平高于其他两基因型人群,差异具有统计学意义(P<0.05)。结果表明Hcy水平与原发性高血压的具有正相关性,MTHFR C677T基因多态性与原发性高血压的发生不相关,但TT基因型与Hcy水平正相关。

人类外周血基因组DNA提取方法的比较分析

目的:对2种提取外周血基因组DNA的实验方法进行了比较,建立一种本实验室有效的外周血基因组DNA的提取方法。方法:采用常规试剂盒和本实验室设计的2种外周血液DNA提取法。结果:本实验室使用的外周血基因组DNA提取方法与试剂盒提取外周血基因组DNA的纯度比较无明显差异。结论:本实验室使用的外周血液DNA提取方法简便、有效、经济,满足于基因组的研究。

心肌纤维化的发生机制及治疗研究进展

心肌纤维化以心脏中非收缩性细胞外基质异常沉积在心肌中为主要特征,并且在各种病理生理条件下,心肌纤维化可以造成心脏收缩和舒张功能障碍,是多种心血管疾病发生发展到某一阶段的主要病理表现,它破坏心肌结构,扰乱心肌兴奋收缩耦联,并损害其收缩和舒张功能,导致并加重心律失常和心功能障碍,从而使心脏疾病进一步发展,最终导致心力衰竭,并且影响心力衰竭患者的临床进程和结局。目前多项研究表明,心肌纤维化的致病因素很多,但其发生发展的具体病理机制尚未明确,需要进一步的研究探索。研究表明炎症细胞因子和趋化因子、活性氧、肾素-血管紧张素-醛固酮系统、基质蛋白和生长因子等与心肌纤维化密切相关。本文就心肌纤维化的发生中涉及的分子机制及其治疗选择的研究进展进行综述。

桦褐孔菌固体发酵菌质水提物抗糖尿病活性研究进展

糖尿病是临床上常见的慢性疾病,是一种以高血糖为主要特征的代谢性疾病。糖尿病病因复杂,普遍认为是由于胰岛素分泌缺陷、生物作用受损或由两者共同作用引起,持续的高血糖将会引起心、血管、神经等发生慢性功能障碍或损害,影响患者健康和生活。目前,临床上对于糖尿病以双胍类、INS、格列奈类等降糖药物为主,虽然能降低患者血糖水平,但是长期用药容易增加低血糖、胃肠道不良反应发生率,影响患者健康和生活。桦褐孔菌属于是一种白腐真菌,多存在于亚洲、欧洲及北美洲等,含有多糖成分,具有降血脂、免疫调节、抗氧化等作用,而在糖尿病中的应用研究较少。因此,本文将以糖尿病为起点,分析桦褐孔菌固体发酵菌质水提物在糖尿病中的应用及作用机制,为糖尿病治疗提供依据和参考。

X染色体上2个InDels位点在牡丹江地区汉族、朝鲜族群体遗传学研究

目的研究牡丹江地区汉族、朝鲜族人群X染色体rs3048996和rs3215490插入缺失基因位点的基因型及基因频率分布,获得两基因位点群体遗传学数据。方法应用PCR扩增技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对牡丹江地区汉族和朝鲜族各120名无关个体进行外周血DNA分型检测,获得两个基因位点的基因型及基因频率分布数据;采用Arlequin v3.5.1.2软件计算分析,获得两基因位点群体遗传多态信息。结果牡丹江地区汉族人群rs3048996和rs3215490基因位点插入等位基因频率分别为0.7375、0.6333,缺失等位基因频率分别为0.2625、0.3667;PIC分别为0.3122、0.3566,DPF分别为0.4728、0.3994,DPM分别为0.3394、0.4550。朝鲜族人群中rs3048996和rs3215490基因位点插入等位基因频率分别为0.7292、0.8000,缺失等位基因频率分别为0.2708、0.2000;PIC分别为0.3169、0.2688,DPF分别为0.4550、0.5000,DPM分别为0.3394、0.2550。经统计分析两民族间rs3215490基因位点等位基因频率的差异有统计学意义。2个X-In Del基因位点在牡丹江地区汉族和朝鲜族人群不存在连锁不平衡现象,且符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。结论本研究中2个X染色体插入缺失基因位点具有良好的遗传多态性,所获得的遗传学数据可为牡丹江地区汉族、朝鲜族的群体遗传学资料和本地区法医学鉴定提供一定的遗传学信息。

肝纤维化中TGF-β/Smad信号通路研究进展

肝纤维化是多种病因导致的肝内结缔组织异常增生的一种疾病,主要由于细胞外基质增生速度超过降解速度并异常沉积,使肝脏结构和功能出现异常。肝纤维化的病变过程中,肝星状细胞的活化是关键环节,而转化生长因子β可以上调它合成细胞外基质。在多条细胞信号转导通路中,TGF-β/Smad信号转导通路是促进肝星状细胞活化合成细胞外基质的关键通路。本文针对在肝纤维化发生发展过程中TGF-β/Smad信号通路的相关研究动态进行综述。

BthC2c1系统剪切基因的初步研究

目的评估热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans C2c1,BthC2c1)系统的基因编辑能力。方法分别将BthC2c1、SpCas9与相应的sgRNA表达质粒转染人肾上皮细胞293T和鸡成纤维细胞DF-1;显微注射技术将制备的BthC2c1-sgRNA、SpyCas9-sgRNA复合物注射入小鼠胚胎内;T7E1实验检测基因剪切效率。结果293T和DF-1细胞中SpCas9可以剪切底物,BthC2c1剪切底物不明显;为小鼠胚胎设计的SpyCas9-sgRNA和BthC2c1-sgRNA在体外均可以剪切底物,在体内SpyCas9系统可以检测到剪切,BthC2c1剪切底物不明显。结论Cas9系统可以在293T和DF-1细胞和小鼠胚胎中剪切基因,BthC2c1的剪切能力较弱。

截短型潜态相关肽对TGF-β诱导HSC-T6细胞增殖的影响

目的原核表达并纯化重组截短型TGF-β潜态相关肽(latency associated peptide,LAP),观察其对转化生长因子TGF-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)诱导的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖的影响。方法LAP各个片段重组蛋白小量培养经IPTG诱导表达,并通过Ni^2+亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE电泳检测。通过MTT法检测浓度分别为2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL LAP-B对TGF-β诱导的HSC-T6细胞增殖作用的影响。结果成功诱导表达可溶性截短型重组蛋白LAP-B,大量培养后经镍柱亲和纯化获得目的蛋白,经SDS-PAGE检测为LAP截短型重组蛋白。MTT检测LAP-B在2~64μg/mL浓度范围内能抑制TGF-β诱导的HSC-T6细胞的增殖,并随着LAP-B蛋白浓度增加HSC-T6细胞增殖抑制越显著。结论成功诱导表达及纯化截短型重组蛋白LAP-B,LAP-B抑制了TGF-β诱导的HSC-T6细胞的增殖,为后续研究LAP的抗肝纤维作用提供实验基础。

SLC12A3和SCNN1B基因多态性与朝鲜族原发性高血压的相关性研究

目的探讨Na—Cl协同转运蛋白基因SLC12A3 rs11643718位点和上皮细胞钠通道基因SCNN1Brs12447134位点的多态性与朝鲜族原发性高血压的相关性。方法对204例原发性高血压患者和186名健康对照进行研究，运用改进的多重连接酶检测反应（improved multiplex ligation detection reaction, iMLDR ）技术检测rs11643718、rs12447134位点的多态性。结果患者组和对照组在sLC12A3rs11643718位点的基因型和等位基因频率差异有统计学意义（P值均〈0．05），且与收缩压相关（P％0．01，隐性模型）；SCNN1Brs12447134位点的基因型与等位基因频率在两组间的差异无统计学意义（P值均〉0．05），但与舒张压存在相关性（P〈0．05，隐性模型）。结论SLC12A3基因rs11643718位点的多态件与中国朝鲜族人群原发性高血压易感性相关，可作为预测发病的分子标记物。

同型半胱氨酸及5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶C677T多态性与朝鲜族原发性高血压相关性研究

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)及5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与朝鲜族原发性高血压的相关性。方法PCR-RLFP的方法检测牡丹江地区朝鲜族189例MTHFR C677T基因型和血浆Hcy水平。结果血浆Hcy水平与原发性高血压和正常对照组差异无统计学意义(P>0.05);MTHFR C677T CC、CT、TT基因型分布差异有统计学意义(P<0.05),基因多态性与原发性高血压发病无相关性(P>0.05),朝鲜族MTHFR C677T TT基因型Hcy水平高于其他2个基因型,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MTHFR C677T基因多态性与原发性高血压的发生无相关性,但TT基因型与Hcy水平呈正相关。

典型AD型高血压家系的临床及遗传学特征分析

目的通过对1个33人的原发性高血压家系进行临床、遗传和分子特征分析,探讨高血压发生的遗传特征以及ACE基因在遗传原发性高血压发生发展中的作用。方法 PCR扩增10例原发性高血压患者和8例正常对照者的ACE等4个基因,进行家系及基因变异相关分析。结果发现10例患者全部为ACE第16内含子插入287 bp携带者。结论 ACE(D/I)携带者的原发性高血压家系常染色体显性遗传特征明显,ACE基因的改变可能是这个原发性高血压家系发病的主要分子基础。

红花多糖对肠道微生态失调小鼠肠黏膜sIgA、血浆内毒素和肠道菌群的影响

目的研究红花多糖对肠道微生态失调小鼠的调节作用,探讨红花多糖改善微生态失调与肠黏膜免疫、血浆内毒素及肠道菌群的关系。方法应用盐酸林可霉素灌胃建立肠道微生态失调小鼠模型,然后用红花多糖进行治疗,同时设正常对照组(n=5)、自然恢复组(n=5)和丽珠肠乐组(n=5)。于给药7 d后处死小鼠,进行肠黏膜sIgA、血浆内毒素的检测,以及采用16S rRNA测序技术,对肠道菌群进行群落结构和多样性分析。结果给药治疗后,小鼠肠黏膜sIgA水平升高(F=3.9900,P=0.0090),血浆内毒素水平降低(F=3.8660,P=0.0100);基因测序结果显示红花多糖组和丽珠肠乐组菌群丰度与多样性均有提升,并能显著增加小鼠肠道菌群中毛螺菌属(t=2.6028,P=0.0092)、粪球菌属(t=4.5510,P<0.0001)、真杆菌属(t=2.3786,P=0.0173)、萨特菌属(t=6.2449,P<0.0001)等的相对比例,减少副拟杆菌属的含量(t=-4.6351,P<0.0001)。结论红花多糖可能通过提高小鼠肠黏膜sIgA含量,抑制血浆内毒素含量并通过增加肠道有益菌、降低致病菌、部分恢复和改善肠道菌群而发挥对微生态失调小鼠肠道菌群结构的调整作用。

幼儿性发育疾病的细胞分子遗传学分析一例

Y染色体和SRY基因是控制调节人胚胎早期发育和睾丸发育一个重要相关因子。本研究对一例性发育异常患者进行细胞遗传学染色体分析和对SRY基因进行分析,发现其细胞染色体为女性核型且无SRY基因;从而为患儿的性别确定及治疗提供依据。

TGF-β潜态相关肽编码序列的原核表达载体构建及表达产物的纯化与鉴定

转化生长因子β(TGF-β)是促肝纤维的细胞因子,TGF-β潜态相关肽(LAP)和TGF-β的活化有关。本研究提取人血液中总RNA,逆转录转为c DNA,以此为模板PCR目的片段,构建原核表达载体pET28a-LAP-B、pET28a-LAP-F,并在不同诱导温度、IPTG浓度、诱导时机下进行诱导表达,筛选最佳诱导条件,通过镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,获得的蛋白通过SDS-PAGE及Western blot鉴定,并检测重组蛋白的浓度。结果表明,LAP全长及截短型原核表达载体构建成功,筛选最佳诱导条件为37℃培养4 h,OD_(600)值为0.8时降温至16℃,加入0.3 mmol/L(LAP-B)/0.45 mmol/L(LAP-F)IPTG诱导16 h,大量培养后通过镍柱纯化和透析得到重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot鉴定为LAP全长及截短型重组蛋白,并测得LAP-B、LAP-F重组蛋白浓度分别为637.6μg/mL、126.6μg/m L。本实验成功得到LAP全长及截短型重组蛋白,为研究LAP对TGF-β促纤维化作用的影响提供了实验基础。