一个新的白血病相关基因LRP16全长cDNA的克隆、序列分析及表达特征

克隆一个与白血病复发相关基因 (LRP1 6)的全长 c DNA序列 ,对其进行染色体定位、组织表达谱分析 ,并对该基因编码蛋白质进行原核表达 .首先用获得的一段 3kb DNA片段在 NCBI提供的 h ESTs数据库中进行电子杂交并对重叠克隆片段组装 ,再设计引物进行 c DNA末端快速扩增(RACE技术 ) .采用 Northern印迹方法进行组织表达分析 .以高通量基因组序列 (HTGS)数据库为基础进行染色体定位 .对构建的克隆菌用 IPTG诱导重组蛋白表达后进行 SDS- PAGE,同时对重组体测序确证 .钓取了该基因全长 c DNA、推导所编码的氨基酸序列 ,并将该基因定位于染色体1 1 q1 2 .2 .原核表达筛选获得了该基因重组子的一个缺失体 .对 LRP1 6基因全长 c DNA的序列分析提示 ,该基因可能编码两种 N端不同的蛋白质 ,且该基因的转录本可能存在一种丰度较低的剪接体 .

RACE技术在钓取白血病相关基因LRP16全长cDNA中的应用

LRP16是我们应用甲基化敏感的限制性界标基因组扫描 (restrictionlandmarkgenomicscanning ,RLGS)技术时发现的一个与白血病复发相关的新基因。为钓取这一新基因的全长cDNA ,本实验采用了cDNA末端快速扩增法 (rapidamplificationofcDNAend ,RACE)。通过对RACE法若干步骤进行优化 ,克隆得到了LRP16基因cDNA的 5′ 与 3′ 非翻译区 ,进而获得其全长及完整的开放阅读框架 ,并作为新基因被GenBank收录。上述结果表明 ,RACE技术是钓取未知基因全长cDNA敏感而快速的方法 ,尤其是对 5′ 及 3′

流式细胞仪BrdU/DNA双参数分析法测定急性白血病细胞周期及其临床意义

研究白血病细胞的增殖动力学,探讨其与临床的关系。采用流式细胞仪（FCM）BrdU/DNA双参数分析法测定39例急性白血病骨髓细胞周期的各时相细胞比例及S期细胞的时限（Ts）,其中ANLL26例,ALL13例;初治31例,复发8例（ANLL、ALL各4例）。结果显示,急性白血病骨髓细胞S期比例显著低于正常,初治及复发白血病患者骨髓S期细胞比例之间相差不显著;复发白血病患者骨髓细胞的Ts比初治白血病患者及正常骨髓细胞的Ts都短。提示白血病细胞处于较正常低增殖状态;Ts时限短提示白血病细胞再生迅速,与急性白血病复发关系密切;Ts时限短为白血病预后不良因素之一。

一种简便的外周血干细胞冷冻保存法

为了简化传统的细胞冷冻方法 ,即用 10 %二甲基亚砜 (DMSO)作为冷冻保护剂并用程控降温仪 - 196℃液氮保存 ,研究了用 5 %DMSO ,3%羟乙基淀粉 (HES)和 4 %人血白蛋白 (HSA)作为冷冻保护剂 ,而不用程控降温仪直接 - 80℃冰箱冷冻细胞的方法。对比了不同方法冷冻保存外周血干细胞 (PBSCs)的细胞活性、单个核细胞数、CFU GM和CD34+ 细胞回收率。结果发现 ,简便冷冻法可获得更高的单个核细胞 (MNC)和CFU GM回收率 ,无凝集现象 ;并且经长达 2 4个月冷冻保存后仍可获得满意的CFU GM和CD34+ 细胞回收率。 37℃融冻和 2 0℃室温融冻法之间各项指标无明显差别 ,细胞融冻后在室温下暴露于 5 %DMSO中 1小时 ,CFU GM回收率并不降低 ,而细胞活性从 93.2 %降至 84 .5 %。所以 ,这种简便的细胞冷冻保存法简便易行 ,可替代传统的液氮保存法 ,对于没有程控降温仪的单位具有实用价值 ,而且还可减少病人DMSO输入量和毒性。

自体外周血造血干细胞移植和自体骨髓移植治疗急性白血病疗效的比较

为了比较自体外周血干细胞移植 (APBSCT)与自体骨髓移植治疗CR1 期急性白血病的临床疗效 ,用APB SCT治疗 4 1例 ,用非净化自体骨髓移植 (ABMT)治疗 17例 ,用净化自体骨髓移植 (PABMT)治疗 30例。结果表明 :APBSCT组造血重建显著快于其他两组 ;3组全部病例的 3年无病存活率 (DFS) ,复发率 (RR)和移植相关死亡率(TRM)分别为 5 1.7% ,4 1.7%和 6 .8%。对DFS和RR产生显著影响的是白血病类型 (ALL或AML) ,确诊至CR1 的时间和CR1 至移植时间 3个因素 ;APBSCT组的 3年DFS ,RR和TRM分别为 4 8.4 % ,4 3.9%和 4 .9% ,ABMT组的DFS ,RR ,TRM分别为 4 7.1% ,4 5 .6 %和 11.8% ,PABMT组的DFS ,RR和TRM分别为 6 6 .5 % ,2 9 6 %和 6 .7% ,3组的疗效无显著差异。结论 :APBSCT治疗CR1 期急性白血病的疗效与ABMT和PABMT相当 ,但前者具有造血重建快、采集方便等优势 ,值得临床广泛推广。

细胞因子在体外对骨髓单个核细胞形态和免疫表型的影响

通过加入不同细胞因子 ,将骨髓单个核细胞分为对照组、IL 2组、CD3 AK组和CIK组进行体外培养。在培养过程中观察各组细胞体积、细胞核、细胞浆和细胞化学染色 (PAS ,POX)等细胞形态学的变化 ;培养前后各组取样以检测细胞免疫表型CD3,CD5 6,CD34和CD38;用改良的MTT法检测各组培养后对新鲜急性白血病细胞的杀伤情况。研究发现 :在培养过程中IL 2组、CD3 AK组和CIK组细胞体积、胞核增大 ,胞浆增多 ,胞浆中出现PAS阳性颗粒 ,培养后在CD3 AK组和CIK组大颗粒样幼稚淋巴细胞明显增加 ,且还可见较多PAS和POX阳性的单核 巨噬样大细胞 ;CD3 AK和CIK组CD3+ ,CD5 6+ ,CD38+ 细胞较培养前明显增加 (P <0 .0 5 ) ,但两组间无明显差别 ;IL 2组在培养后CD5 6+ 细胞也有增加 ,但CD3+ 和CD38+ 细胞无明显增加 ;各组培养后CD34+ 细胞比例均下降 (P <0 .0 5 ) ,但各组间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;IL 2组、CD3 AK组和CIK组对新鲜急性白血病细胞的杀伤作用显著强于对照组 (P <0 .0 5 ) ,CD3 AK组、CIK组显著强于IL 2组 (P <0 .0 5 ) ,CD3 AK组与CIK组间无明显差异 (P >0 .0 5 )。本实验提示不同细胞因子组合对骨髓细胞的作用效果不同 ,CD3 AK组和CIK组的细胞因子组合既能刺激骨髓免疫细胞增殖和细胞毒增加 ,又能保留一定量?

急性白血病患者MRP、p170与多药耐药关系的分析

目的 :评价 p糖蛋白 ( p170 )和多药耐药相关蛋白 ( m ultidrug resistance- associated protein,MRP)表达与急性白血病患者多药耐药的关系。方法 :将急性白血病患者按治疗效果分为初治敏感组、完全缓解组和复发难治组三组 ,用免疫细胞化学结合流式细胞仪测定 p170和 MRP。结果 :p170在各型白血病中完全缓解组均低于初治和复发难治组 ,MRP在 AML 中复发难治组明显高于完全缓解组 ;复发难治组 3 5人中 2 7例有上述两或一种蛋白表达增高 ,两者均与临床耐药相关。综合分析敏感性、特异性和准确性 ,以 p170和 MRP联合评价效果最佳。结论 :急性白血病多药耐药的发生是多因素的 ,p170和

化疗+G-CSF与化疗+G-CSF+GM-CSF动员外周血干细胞效果和造血功能重建的对比观察

目的 :比较化疗 +G CSF与化疗 +G CSF +GM CSF二种动员方案动员外周血干细胞 (PBSC)和造血重建的效果。方法 :将 33例患者 (急性白血病 2 3例 ,恶性淋巴瘤 9例 ,乳腺癌 1例 )分为化疗 +G CSF与化疗 +G CSF +GM CSF二组 ,化疗后WBC最低时开始分别应用G CSF 15 0 μg皮下注射 ,2 /d及G CSF15 0 μg、GM CSF 15 0μg ,皮下注射 ,上、下午各 1次。动员 3d后行PBSC采集。 结果 :二种动员方案比较 ,MNC、NC、CD34+细胞、GM CFU培养及造血功能重建均无明显差别。动员过程中 ,GM CSF组骨痛及发热明显患者难以耐受。结论 :化疗 +G CSF +GM CSF的动员方案 ,动员效果及造血功能重建并未优于化疗 +G CSF组 。

造血干细胞移植后患者性功能状况调研

目的：探讨造血干细胞移植（HSCT）后患者性功能状况及对婚姻和生育能力的影响。方法：通过对 HSCT 后患者发放随访调查表，对生育、性功能改变、婚姻及女性月经情况等进行综合分析研究。结果：在资料完整的 50 例患者中，性欲及性功能正常者分别为 66.6％ 和 80％；性功能改变与 TBI 剂量关系不密切；移植前后 FSH、LH、PRL、睾酮及雌二醇测定结果对比表明差异不明显（P＞0.05）；18 例女性患者，14 例闭经（77.8％），4 例月经恢复（22.2％）；32 例已婚者中，无 1 例怀孕。结论：HSCT 后生育能力及女性月经均有明显影响，对性功能影响不明显，对性激素水平的影响有待继续观察。

白血病细胞多巴胺受体基因甲基化研究

目的 :探讨多巴胺受体 ( DRD4 )基因第一外显子中 Not 酶切位点甲基化与急性非淋巴细胞白血病( AML)的关系。方法 :应用 Southern印记杂交及 DNA序列分析技术对 AML 患者骨髓标本进行分析。结果 :在 2 7例白血病患者骨髓标本中 16例 DRD4基因甲基化 ( 5 9% ) ,其中初治化疗敏感患者 DRD4基因甲基化发生率为5 0 % ( 9/18) ,复发及难治患者甲基化发生率为 78% ( 7/9) ,而 9例正常人骨髓标本 DRD4基因均无甲基化。结论 :DRD4基因甲基化在白血病患者发生率明显高于正常人 ( P<0 .0 5 ) ,而在复发及难治患者其发生率略高于初治化疗敏感患者 ,DRD4基因甲基化可能与白血病的发生。

原发性阿米巴脑炎(附1例报告并文献复习)

阿米巴原虫可分为自由生活的阿米巴和溶组织阿米巴，某些自由生活的阿米巴可以引起具有致死性的原发性阿米巴脑炎。它分为两类：由纳格勒届阿米巴引起的原发性阿米巴脑膜脑炎和棘属阿米巴引起的肉芽肿性阿米巴脑炎。我们报告一例由自由生活的阿米巴引起的肉芽肿性阿米巴脑炎，并就此类疾病的病因，临床表现，病理改变，诊断，鉴别诊断和治疗等进行文献复习。

电厂电气设备检修技术要点探析

在电气运转的过程中,由于长期的使用和保护不当,容易产生故障,所以如何对电厂电气设备进行检修成了电厂发展面临的主要问题。文章对于电厂运行中对电气设备进行的检修技术进行了要点分析,为电气设备的稳定运行提供了借鉴。

流式细胞仪三色荧光标记技术在白血病免疫分型中的应用

目的 :建立一种准确、可靠的白血病免疫分型检测方法。方法 :采用流式细胞仪单染色和三色荧光标记技术。结果 :单染色标记法检测 4 8例白血病患者 ,诊断不明确 9例 (18.7% ) ,初始诊断与最后诊断不符 2例 (4% ) ,三染色标记法检测 36例白血病患者 ,未发现诊断不明确者或初始诊断与最后诊断不符者 ;且通过二维表型图谱 ,可发现相关抗原共同表达 ,利于混合型白血病诊断。结论 :流式细胞仪三色荧光标记法进行白血病免疫分型 ,克服了单染色标记法细胞分群不清的问题 ,对白血病诊断、发生发展和预后判断有重要的指导意义。

急性白血病患者周期蛋白D_1 mRNA表达及其临床意义

目的 检测急性白血病患者周期蛋白 (cyclin)D1mRNA的表达 ,并探讨其与临床的关系。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 6 5例急性白血病患者及 5名正常人骨髓细胞cyclinD1mRNA。结果 正常骨髓未检测到cyclinD1mRNA表达 ;急性白血病患者阳性率 2 6 2 % ,急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病之间差异无显著性 ;复发组患者的cyclinD1mRNA阳性率 (6 3 6 % )明显高于初治组 (2 1 4% )及缓解组 (8 3% )。结论 急性白血病患者中有cyclinD1mRNA过度表达的情况 ,且与临床复发关系较为密切。

环孢菌素A与细胞因子联合逆转白血病多药耐药性的体外研究

目的探讨环孢菌素Ａ（ＣｓＡ）联合细胞因子对耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２的逆转作用。方法以甲基四唑蓝法测定柔红霉素（ＤＮＲ）的细胞毒性；用流式细胞仪技术测定细胞内罗丹明（Ｒｈ１２３）浓度；用ＲＴＰＣＲ及ＪＳＢ１抗体分别检测多药耐药（ＭＤＲ１）ｍＲＮＡ及其Ｐ糖蛋白的表达。结果１μｍｏｌ／ＬＣｓＡ、５００Ｕ／ｍｌ干扰素、２００Ｕ／ｍｌ白介素２（ＩＬ２）均能增加ＤＮＲ对耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２的细胞毒作用，ＩＣ５０（半抑制浓度）分别为（３．７８±０．０３）μｇ／ｍｌ，（１３．７７±０．３８）μｇ／ｍｌ，（１８．５±０．６０）μｇ／ｍｌ，逆转倍数分别为６．７０、１．８４和１．３７倍。而上述剂量的ＣｓＡ和ＩＦＮα联合则ＩＣ５０为（１．７１±０．１９）μｍ／ｍｌ，逆转倍数增加到１４．８倍，且细胞内Ｒｈ１２３浓度亦明显高于单药逆转（Ｐ＜０．０５），但ＭＤＲ１ｍＲＮＡ及Ｐ糖蛋白表达无明显改变。ＣｓＡ和ＩＬ２联合应用无明显的协同效应。结论单用低剂量ＣｓＡ（１μｍｏｌ／Ｌ）或细胞因子对多药耐药只有部分逆转作用，而ＣｓＡ联合干扰素则有较好的协同效应，能明显增强耐药的逆转作用。

初治急性白血病患者p170和MRP蛋白表达与预后的关系

目的 :探讨多药耐药蛋白 (p170 )和多药耐药相关蛋白 (MRP)表达与初治急性白血病(AL)患者化疗效果的关系。方法 :用流式细胞仪检测 2 9例初治 AL患者骨髓单个核细胞中 p170和MRP蛋白表达。结果 :初治 AL患者 p170和 MRP蛋白表达率分别为 3 7.9%和 41.4% ;MRP蛋白阳性与阴性患者的首次完全缓解 (CR)差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;而 p170蛋白阳性与阴性患者的首次完全缓解 (CR)有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;p170和 MRP蛋白两者之间无相关性。结论 :作为预测初治AL 患者化疗效果的敏感性指标 ,p170明显优于