妇科肿瘤遗传咨询专家共识(2023年版)

随着高通量基因组测序技术的不断成熟,人们深刻认识到遗传因素在妇科肿瘤的发生、发展中具有重要作用,肿瘤遗传咨询也随之广泛应用于肿瘤精准筛查、诊断、治疗及预防等方面。2023年3—9月,20余位来自中国三级妇产科医院/妇幼保健院联盟妇科肿瘤遗传咨询协作组和中国抗癌协会中西整合子宫内膜癌专业委员会的妇科肿瘤临床专家,以及流行病学、循证医学研究的多学科专家共同参与,经过前期临床问题调研并召开方法学专家专题会和妇科肿瘤临床专家编写会反复讨论,起草了《妇科肿瘤遗传咨询专家共识(2023年版)》。本共识围绕制定背景、遗传性妇科肿瘤的特征及常见类型、遗传性妇科肿瘤检测、遗传咨询的适用群体、遗传咨询流程及咨询内容、相关资源推荐等多个方向,参照牛津大学循证医学中心证据分级系统,最终形成16条专家共识及推荐意见。希望通过本共识,提高妇科肿瘤临床工作者对于遗传性肿瘤的识别,有助于为患者提供更精准的诊断和治疗,也为其家系成员提供有效的预防和生殖管理措施。本共识将根据妇科肿瘤诊疗和遗传咨询相关领域的发展定期进行更新。

应用树状DNA杂交(DDH)对生殖道尖锐湿疣中HPV DNA的分型检测

从手术切除的 5 0例生殖道尖锐湿疣新鲜标本中 ,以及 1 5例正常人血清中 ,提取基因组DNA ,同时用树状DNA杂交 (dendrimerDNAhybridizalion ,DDH)技术和PCR进行HPVDNA的分型检测。结果 5 0例尖锐湿疣中 ,以DDH方法检测 ,感染HPV6型者 2 0例 ,感染 1 1型者 2 4例 ,6 / 1 1型混合感染者 3例 ,阴性 3例 ,总检测率达 94 % ;以PCR方法检测 ,HPV6型感染者 2 1例 ,1 1型感染者 2 4例 ,6 / 1 1型混合感染者 3例 ,阴性 2例 ,总检测率为 96 %。1 5例正常人血清中 ,以DDH方法检测 ,HPV感染的假阳性率为 0 % ;以PCR检测 ,假阳性率为 6 .6 7%。还以HPV阳性标本对DDH方法做了敏感度的测定 ,结果阳性病例DNA检测最低浓度为 97.2 8pg/ml。研究表明 ,DDH技术具有较高敏感性和高特异性 ,且成本较低 ,操作安全简便 。

β-hCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:采用时间分辨荧光免疫分析技术建立高灵敏度、高特异性的β-hCG的快速全自动超微量检测方法。方法:以β-hCG单克隆抗体812#包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+标记β-hCG单克隆抗体827#,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用结果:特异性试验显示,与AFP、LH均无交叉反应;平均回收率为96.5%;健全性佳;50例血清β-hCG的TRFIA检测与CLIA(BeckmanAcess)分析结果一致,相关系数为0.972。结论:β-hCG时间分辨荧光免疫分析法灵敏度高、稳定性好,具有很好的临床应用前景。平衡饱和法建立β-hCG时间分辨荧光免疫分析,数据采用Logit-Log法函数数据处理程序处理。

化学发光氧化应激检测在精液质量评价中的应用

人精子细胞内活性氧的过量积蓄是男性不育的重要病因,因此对精浆活性氧进行监测是氧化应激检测的重要手段。重点介绍两种不同化学发光体系——鲁米诺发光体系和吖啶类化学物发光体系,并对其在男性不育临床中的应用进行评价。鲁米诺和光泽精作为细胞内氧化还原反应的分子探针,是灵敏的、可定量的,其化学发光信号能够很好地识别与精子缺陷相关的高水平氧化应激,并提供强有力的、与精液质量和精子体内外受孕潜能相关的证据。此外,在应用化学发光法进行精液氧化应激检测时,为避免非特异性干扰因素的影响,必须设立好各种对照。

TNFAIP8家族基因单核苷酸多态性位点在宫颈癌预后评估中的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8（tumor necrosis factor‐α‐induced protein 8，TNFAIP8）家族基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism ，SNP）位点在宫颈癌预后评估中的作用。方法：选择2008—2009年行根治性子宫切除术并获得至少2年随访的144例宫颈癌患者。采用 Taqman探针检测患者 TNFAIP8家族基因中3个多态性位点（TNFAIP8‐rs11064、TNFAIP8‐rs3813308和TNFAIP8L1‐rs1060555）的基因分型。分析 TNFAIP8家族基因SNP位点与宫颈癌预后的关系。结果：携带TNFAIP8L1‐rs1060555 GG的宫颈癌患者相较于携带CG／CC基因型者，肿瘤复发的危险度显著增加（校正HR＝3．25，95％ CI：1．06～9．95）。联合效应分析发现，携带TNFAIP8基因家族2～3个危险基因型的患者相较于携带0～1个危险基因型者，肿瘤复发的危险度显著增加（校正 HR＝2．55，95％ CI：1．02～6．36）。结论：TNFAIP8家族基因的SNP位点有望为宫颈癌的预后评估提供参考。

树状DNA杂交技术在HCV检测中的应用

目的 建立一种敏感性、特异性、重复性较好的 ,适于病原体群体筛查的检验方法。方法 通过RT PCR DDH ,RT nested PCR和HCVRNA DDH 3种方法检测HCV核酸 ,推断RT PCR DDH技术检测病毒核酸的特异性、敏感性和稳定性。结果 4 7份ELISA检测HCV抗体阳性血清标本 ,RT nested PCR检出阳性标本 33例 (70 .2 1% ) ,RT PCR DDH检出阳性标本 39例 (82 .98% )。结论 RT PCR DDH技术在逆转录病毒核酸检测的应用中具有较好的特异性、敏感性和稳定性 ,而且成本较低 ,操作安全简便 。

非综合征耳聋大家系永生细胞系的建立及几种EB病毒转化外周血淋巴细胞建系方法的探讨

永久保存珍贵的家系材料,是对该家系进行深入研究的基础,为此采用EB病毒(Epstein Barrvirus,EBV)转化淋巴细胞的方法对中国江苏淮阴地区非综合征耳聋大家系行建系工作。该家系患者呈典型的母系遗传特征,且研究发现患者中均具有线粒体DNA12SRNAA1555G突变,是迄今世界上最大的非综合征耳聋家系之一,在该家系的建系过程中使用了4种不同的方法。建系结果分别为:微量全血法1株,冻存全血法1株,冻存白细胞法14株及环孢霉素A(CyA)法36株,共计52株。文章就建系工作及这4种转化方法作一简单探讨。

吸烟对精子染色质结构完整性影响的探讨

目的：探讨吸烟对精子染色质结构完整性的影响。方法：784例男性不育患者从病例库中选取,根据吸烟与否及每日吸烟支数（≤10、11-19、≥20）和吸烟年限（≤5、6-9、≥10）进行分组,比较各组患者精液常规检测参数及精子染色质结构受损和精子核成熟情况。精子染色质结构完整性采用流式细胞仪检测,DNA损伤程度和不成熟精子指数分别以DNA损伤指数（DFI）和高DNA着色性（HDS）来表示。结果：吸烟≥20支/日和吸烟年限≥10年的患者组精液量、前向运动精子比例低于其他组而精子畸形率高于其他组（P〈0.05）;吸烟组男性的DFI和HDS值均升高（P〈0.05）;HDS与前向运动精子比例呈负相关（r=-0.18,P〈0.05）,DFI与HDS均与精子畸形率呈正相关（r=0.31与r=0.39,P均〈0.05）。结论：日吸烟量≥20支或吸烟年限≥10年对男性的精液量、前向运动精子比例和精子畸形率都有影响,吸烟影响男性精子DNA完整性和精子核成熟。

鹿科动物线粒体控制区序列分析与系统进化(英文)

通过测定鹿科麂亚科中的小麂、赤麂和黑麂的线粒体全基因组 ,从而定位它们的控制区 ,并从GenBank获得鹿科另外 3个亚科 9种动物的线粒体控制区全序列。利用MEGA软件计算了各物种控制区序列的碱基组成、遗传距离和遗传相似度 ,通过比较序列同源性 ,以羊线粒体控制区序列为外群 ,构建NJ分子系统树 ,探讨了鹿科 4个亚科 12种动物的系统进化关系。序列分析表明 ,鹿科 12种动物控制区序列的碱基长度在 90 9～ 10 4 9bp之间 ,A +T含量约占 6 2 0 6 % ,其中 36 3个核苷酸位点存在变异 (约占34% )。系统进化关系结果表明 :(1)以线粒体控制区构建的鹿科 12种动物分子系统树基本与NCBI分类一致 ;(2 )美洲鹿亚科驼鹿属驼鹿在鹿科这 12种动物中处于最为原始的地位 ;(3)小麂比赤麂和黑麂更为原始 ;(4)獐亚科獐属的獐与美洲鹿亚科狍鹿属的狍鹿和美洲狍鹿聚为一支。

树状DNA杂交技术在戊型肝炎病毒检测中的应用

目的 研究树状DNA杂交 (DDH)技术在戊型肝炎病毒 (HEV)检测中的应用。方法 以逆转录巢式PCR法 (RT nPCR)检测筛选HEV阳性标本 ,逆转录产物进行DDH。研究DDH技术检测HEV病毒的敏感性和通用性。结果 2 5份HEV阳性标本的逆转录产物DDH检测均显阳性 ,HEV 5个不同基因型和亚型逆转录产物DDH检测也呈阳性。结论 RT

精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠的可行性研究

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以XholI和BamHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer-N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer-N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer-N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer-N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表达;为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。

胚系BRCA 1/2基因变异与乳腺癌患者临床特征的关系

目的分析乳腺癌胚系BRCA 1/2基因变异(germline BRCA 1/2 mutation,gBRCAm)类型和分布情况,研究其与临床特征的关系。方法采用二代测序对2019年6月至2021年4月于复旦大学附属中山医院就诊的146例乳腺癌患者进行gBRCAm检测。收集到其中94例乳腺癌患者的发病年龄、组织学分级、淋巴结状态以及雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕酮受体(progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)表达等信息。采用χ^(2)检验和Fisher精确检验分析gBRCAm与乳腺癌临床特征的关系。结果乳腺癌患者发生gBRCAm频率为12.3%。乳腺癌患者变异检出率显著高于公共数据库的报道(P=0.023)。94.4%的变异发生于外显子,5.6%发生于内含子的剪接区。移码变异、无义变异、大片段重排、剪接突变和同义突变分别占61.1%、16.7%、11.1%、5.5%和5.5%,其中1例为未报道的新变异位点。gBRCAm与乳腺癌发病年龄(P<0.001)、肿瘤家族史(P=0.008)、双侧乳腺癌(P=0.001)和三阴型乳腺癌(P=0.025)有关。在ER和PR阳性的乳腺癌患者中,携带胚系BRCA 2基因变异显著多于BRCA 1基因(P=0.041和P=0.026)。结论乳腺癌患者携带的gBRCAm多为移码突变,位于重要的基因功能区和结构域上,且早发、肿瘤家族史和三阴型乳腺癌患者多携带gBRCAm。

低浓度NaOH对小鼠精子DNA完整性的影响

目的用精子DNA完整性评价NaOH溶液对小鼠精子进行头尾分离的最优条件。方法取2～3月龄雄鼠附睾尾精子，稀释到合适浓度（5×10^6～10×10^6／ml），0～37℃下，加入不同浓度NaOH溶液孵育，显微镜下观察精子的头尾分离率，流式细胞仪检测精子的质膜完整性及DNA完整性。结果NaOH对精子头尾分离的效果，与碱浓度、作用时间和作用温度呈正相关，作用温度越高，时间越长，头尾分离效果越好，但同时对精子DNA的损伤程度也就越大。本研究证实精子在10mmol／LNaOH溶液，0℃下孵育2h，精子头尾分离的效率可达55％，而精子DNA损伤与空白对照相比，则无显著性差异。结论在本研究条件下低浓度NaOH处理小鼠精子，方法简单易行，可有效去除小鼠尾巴，而又不使其DNA受损。

国际卵巢肿瘤分析简单规则联合糖类抗原125或人附睾蛋白4对女性附件肿块的诊断价值

目的探讨国际卵巢肿瘤分析(the International Ovarian Tumor Analysis,IOTA)的简单规则联合糖类抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)或人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)对女性附件区肿块的整体诊断性能。方法回顾性选择2017年1月至2020年7月在复旦大学附属中山医院超声科行经腹部超声或经阴道彩色多普勒超声检查的164个可疑附件区肿块的女性患者140例。比较IOTA简单规则联合CA125或HE4对164个附件区肿块的诊断性能;对绝经前后患者进行亚组分析,比较2种联合策略在绝经前后亚组中诊断性能的变化。结果164个肿块中共有140个可使用IOTA简单规则,剩余24个判定为不确定性肿块。若将24个不确定性肿块均判定为恶性,灵敏度变化差异无统计学意义(97.3%vs 97.5%),而特异度显著降低(89.4%vs 71.1%,P<0.05),约登(Youden)指数由0.87显著降低至0.69(P<0.05);IOTA简单规则联合HE4与联合CA125灵敏度差异无统计学意义(95.1%vs 96.3%),而前者特异度(90.4%vs 80.7%)和Youden指数(0.85 vs 0.77)均显著高于后者(P<0.05);2种联合策略在绝经前后的诊断性能差异无统计学意义。结论IOTA简单规则联合HE4对附件区肿块具有很好的诊断性能,较IOTA简单规则联合CA125诊断性能好,可帮助经验不丰富的检查者提高整体诊断性能。

晚期卵巢癌中间型瘤体减灭术+腹腔热灌注化疗对比单纯中间型瘤体减灭术研究解读

背景:新诊断的晚期卵巢癌的治疗通常包括瘤体减灭术和全身化疗。本研究旨在探索中间型瘤体减灭术(interval debulking surgery,IDS)中加腹腔热灌注化疗(hyperthermic intraperitoneal chemotherapy,HIPEC)是否会改善接受新辅助化疗的Ⅲ期上皮性卵巢癌患者的预后。方法:在一项多中心、开放标签的Ⅲ期临床试验中,我们随机将245例患者分配至IDS联合顺铂HIPEC组(100 mg/m^2)或接受单纯IDS组。这些患者都接受了3个疗程的卡铂[5～6 mg/(m L·min^(-1))曲线下面积]和紫杉醇(175 mg/m^2体表面积)至少达到疾病稳定状态。手术时,对患者进行评估:如果能达到无残留病灶(完全瘤体减灭)或残留病灶最大直径小于10 mm(满意瘤体减灭)才进行随机分组。术后再接受3个疗程的卡铂和紫杉醇化疗。主要研究终点是无复发生存期(relapse-free survival,RFS),次要终点包括总生存期(overall survival,OS)和不良反应。结果:在意向性治疗分析中,123例患者中110例(89%)接受单纯瘤体减灭术(手术组)的患者及99/122(81%)例接受瘤体减灭术联合HIPEC(手术联合HIPEC组)的患者出现了疾病复发或死亡(疾病复发或死亡风险比HR=0.66;95%CI:0.50～0.87;P=0.003)。手术组的中位RFS为10.7个月,手术联合HIPEC组中位RFS为14.2个月。中位随访时间为4.7年,手术组和手术联合HIPEC组分别有76例(62%)和61例(50%)患者死亡(HR=0.67;95%CI:0.48～0.94;P=0.02)。手术组中位OS为33.9个月,手术联合HIPEC组中位OS为45.7个月。两组中发生3级或4级不良事件的患者比例相似(手术组为25%,手术联合HIPEC组27%,P=0.76)。结论:在Ⅲ期上皮性卵巢癌患者中,在IDS术中行HIPEC比单纯IDS获得了更长的RFS和OS,且并未增加不良反应。

卵巢癌复发化疗还是手术

2017年美国临床肿瘤学会年会的最大亮点是“手术延缓复发性卵巢癌的再复发”。手术真的能延长复发卵巢癌患者的生存时间吗？卵巢癌复发，能否二次手术就疾病本身而言，卵巢癌复发的患者能不能接受二次手术，取决于患者对化疗是否敏感，手术切除能否彻底。实际上，通过手术彻底切除病灶，是很难做到的事情。与第一次手术类似，盆、腹腔任何角落都可能藏有肿瘤，如果手术清除不彻底，还不如不手术。这是多数复发卵巢癌患者不能从手术获益的主要原因。

应用化学发光法检测男性不育人群精液活性氧水平

目的探讨化学发光法检测男性不育人群中精液ROS水平的意义。方法使用化学发光法检测1018例不育男性和50例已育志愿者精液活性氧水平。不育男性精液分为弱精子组(400例)、少精子组(19例)、少弱精子组(212例),少弱畸精子组(35例),精液指标正常组(352例)。结果男性不育人群精液活性氧水平呈偏峰分布,中位数为40 RLU/s;男性不育各组与志愿者ROS水平差异有统计学意义,不育组各组之间差异也有统计学意义。结论用化学发光法检测精液ROS水平能够较好地评价男性生育功能, ROS能够作为一个独立的指标指导男性不育的诊断。

铂敏感复发卵巢癌手术相关问题与规范化诊疗

复发卵巢癌并无普遍接受的标准治疗模式,3项平行随机对照研究(SOC-1,DESKTOP 3和GOG-0123)为铂敏感复发卵巢癌二次手术提供了更高级别的循证医学证据。基于现有循证医学依据及中国的SOC-1研究结果,文章介绍了铂敏感初次复发卵巢癌新的诊疗模式:通过有效的患者选择标准筛选手术获益的最大人群,但同时警示不恰当的手术反而有害,并指明适合每个复发卵巢癌患者的治疗路径;复发卵巢癌的治疗仅仅是卵巢癌系统治疗中的一个环节、手术仅仅是复发卵巢癌治疗的手段之一,推进中国卵巢癌整体的规范化诊疗,还有很长的路要走。

脂联素基因多态性与前列腺癌发病风险的相关性研究

前列腺癌在全球范围内占男性恶性肿瘤发病率的第2位，但发病率具有明显的地区差异，提示高脂饮食为主的西方生活方式和肥胖在前列腺癌发病机制中起着重要的作用。研究发现脂联素可能是前列腺癌与肥胖之间潜在的分子介质。我们通过检测脂联素基因rs3774262基因型在前列腺癌患者与正常对照人群中的分布差异，分析其与前列腺癌发病风险的相关性．并探讨其与肥胖之间是否存在交互作用。