医用可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶的生物安全性评价

背景:前期研究制备的可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶结合了防粘连膜和防粘连液的优点,于较短时间内可在原位形成形状柔软的凝胶,不受体位影响,可承受周围组织的压力且自身无压迫作用。目的:评价医用可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶的生物相容性。方法:以对数生长期的L929细胞为受试细胞,采用MTT法检测可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶浸提液的细胞毒性;以日本大耳兔为受试动物,进行可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶浸提液的皮内刺激实验;以豚鼠为受试动物,进行可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶浸提液的皮内诱导与局部诱导迟发型超敏反应实验;以Wistar大鼠为受试动物,进行可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶浸提液的亚慢性毒性实验。结果与结论:可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶浸提液的细胞毒性为1级,符合标准要求;可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶浸提液无潜在皮内刺激作用、无潜在皮肤致敏性;亚慢性毒性实验中,对大鼠连续尾静脉注射28 d的可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶浸提液,大鼠体质量、血液学、凝血功能、血液生化学和脏器病理均未见明显的亚慢性全身毒性反应;结果表明,可注射羧甲基葡糖胺聚糖防粘连凝胶具有良好的生物安全性。

含银离子烧伤敷料的遗传毒性研究

目的:采用哺乳动物细胞和细菌对含银离子烧伤敷料进行遗传毒性研究。方法:通过鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验和体外哺乳动物细胞基因突变试验,观察该敷料浸提液是否引起细胞的基因突变、染色体结构的改变或DNA和基因的改变。结果:该试样在3.0 cm2/ml(浸提原液剂量)样品的二甲基亚砜(DMSO)浸提液对试验所用鼠伤寒沙门菌有抑制作用,3.0 cm2/ml样品浸提液对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)具有毒性作用,对体外培养的V79细胞无诱导HGPRT基因突变作用。结论:结果显示在一定的剂量下,该含银离子烧伤敷料未见引起明显的遗传毒性作用,而浸提原液剂量组具有一定的遗传毒性作用。

医用钛合金Ti-6Al-4V基体/羟基磷灰石涂层复合材料的生物安全性评价

评价新型医用钛合金Ti-6Al-4V基体/羟基磷灰石涂层复合材料的生物安全性。通过遗传毒性试验、细胞毒性试验、骨植入实验和迟发型超敏试验,对Ti-6Al-4V基体/HA涂层复合材料进行安全性研究。该复合物试样在Ames实验中无诱变性,对体外CHL细胞不诱发染色体畸变,不引起体外V79细胞的基因突变,无体外细胞毒性。该检品在骨植入试验中,对局部组织无刺激。最大剂量试验法迟发型超敏试验显示,该检品无致敏性。该复合材料有良好的生物安全性。

正交法制备羧甲基壳聚糖-纳米银纳米微球

目的:制备以纳米银为模型药物的羧甲基壳聚糖载药纳米微球,探索载药纳米微球的制备条件对粒径、包封率的影响,确定最佳制备工艺。方法:三聚磷酸钠为交联剂,采用离子交联法制备载药纳米微球,测量药物的包封率及粒径。紫外分光光度法测定该制剂中纳米银释放情况。结果:通过正交实验设计,优化了制备工艺条件,其最佳条件是羧甲基壳聚糖浓度4.2 mg/mL,滴速为5 s/滴,纳米银投药量为20 mg(500μL)。在此条件下进行实验,制备出的载药纳米微球的平均粒径为514.1 nm,多分散系数0.204,包封率61.67%。8 h内累计释放量达80%以上,方程拟合以一级动力学方程拟合效果最好。结论:该制备工艺简单、稳定,可制备出包封率高、粒径适宜的羧甲基壳聚糖-纳米银纳米微球。

UHPLC-ESI-MS/MS法测定烫骨碎补-续断药对中10个成分的含量

目的:建立UHPLC-ESI-MS/MS法同时测定烫骨碎补-续断药对中绿原酸、马钱苷、当药苷、表儿茶素、咖啡酸、木犀草苷、柚皮苷、木犀草素、槲皮素、川续断皂苷Ⅵ的含量。方法:采用InertSustain^(Ⓡ)C_(18)(100 mm×3.0 mm,3.0μm)色谱柱;以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.4 mL/min;柱温为35℃;进样量为10μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI源);正负离子扫描,多重反应监测模式进行定量分析。结果:烫骨碎补-续断药对中10个成分在相应的浓度范围内与峰面积的线性关系良好,方法学考察结果的RSD均<3.00%,平均加样回收率为99.83%~107.85%。结论:该方法高效、稳定、准确、简便,可用于烫骨碎补-续断药对及其制剂的质量评价与质量控制,为烫骨碎补、续断的临床应用及研究提供依据。

微粒皮移植联合医用自凝集水凝胶修复家兔全层皮肤缺损的实验研究

目的评价自凝集水凝胶(医用可注射聚羧甲基葡萄糖胺凝胶)的皮内刺激反应,以及该材料与微粒皮移植联用对全层皮肤缺损的疗效。方法依据国家标准GB/T 16886.10—2005,对该材料进行皮内刺激反应安全性评价。麻醉家兔背部,切除3.5 cm×3.5 cm 全层皮肤。切下的皮肤裁剪成1 mm×1 mm 的微粒皮,将微粒皮在创面上摆放,滴洒水凝胶原液于创面。通过凝胶自凝完成微粒皮固定,用制备好的异体兔脱细胞真皮紧密覆盖创面、缝合。观察4 周,修复创面做病理观察。结果自凝集水凝胶无潜在的皮内刺激。凝胶联合微粒皮移植术4 周后伤口完全愈合且有毛发生长,病理切片可见皮肤创面修复,炎症细胞浸润较轻。结论自凝集水凝胶对局部皮肤组织无刺激。凝胶联合微粒皮移植可促使创面皮肤组织的修复再生。

有细胞膜结合能力的四丙烯酰基乙酰氨基葡萄糖的合成与生物安全性评价

目的合成并表征四丙烯酰基乙酰氨基葡萄糖(DA-NAG),测其生物相容性和细胞膜结合性能,为其用于医用自凝集凝胶提供依据。方法通过酯化反应合成DA-NAG,采用高效液相色谱/质谱和核磁共振氢谱对产物进行表征,并对产物进行细胞毒性实验和动物皮下植入实验。采用高效液相色谱检测DA-NAG与小鼠成纤维细胞L929细胞膜的结合性能。结果质谱和氢谱结果均符合DA-NAG的结构特征,该化合物无细胞毒性,日本大耳白兔皮下植入4周后可见DA-NAG有明显降解,且对周围组织刺激不明显。高效液相色谱检测结果显示,DA-NAG与L929细胞膜有结合作用。结论成功合成DA-NAG,且DA-NAG具有很好的细胞相容性和细胞膜结合能力。

医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶生物安全性评价

目的评价医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶的生物安全性。方法采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验(Ames实验)、体外染色体畸变实验和体外基因突变实验检测医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶的遗传毒性。以日本大耳白兔为受试动物,经耳缘静脉缓缓注入凝胶盐水浸提液(10 ml/kg),测其体温并计算体温升温值。以昆明种小鼠为受试动物,分别经腹腔注射和尾静脉注射凝胶盐水浸提液(50 ml/kg)和氯化钠注射液(对照),观察动物的毒性反应,记录动物的体质量变化。在抗凝兔血中分别加入凝胶盐水浸提液、氯化钠注射液与蒸馏水,检测溶血率。结果在活化和非活化条件下,凝胶盐水浸提液组和凝胶二甲基亚砜浸提液组4种菌株的回变菌落数均未达到相应阴性对照组的2倍;3个剂量组(凝胶培养基浸提液和1/2、1/4凝胶培养基浸提液组)中国仓鼠肺成纤维细胞的染色体畸变率均为0;3个剂量组小鼠淋巴瘤细胞L5178Y的大集落突变频率、小集落突变频率和总突变频率均无明显增长(均P>0.05)。注射凝胶盐水浸提液后,3只日本大耳白兔的体温升温值分别为0、0.3和0.2℃。注射凝胶盐水浸提液后24、48和72 h,各组小鼠均未见毒性反应症状,且随着注射后时间的延长,样品组和对照组小鼠体质量均有所增长,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。溶血实验结果显示,医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶的溶血率为0.1%。结论医用羧甲基葡糖胺聚糖凝胶无诱发细菌突变、体外细胞染色体畸变及细胞基因突变的作用,亦无热原性、急性全身毒性和溶血性,表明其具有良好的生物安全性。