克拉维酸高产菌株的选育及发酵工艺研究

以克拉维酸产生菌———棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)CA0726为出发菌株,采用紫外线照射60 s,NTG诱变处理40 min,并结合甘油耐受性突变株的理性化筛选,选育得到较佳诱变株CA0726-19,效价达1 645μg/mL,且传代性能稳定.以此突变株为试验菌株,通过碳源、氮源及无机盐的组成优化试验,得到了较佳的种子培养基和发酵培养基组成,并对发酵条件进行了优化.在较适的发酵条件下,经摇瓶发酵96 h后,克拉维酸效价可达2 397μg/mL,较出发菌株提高10.3倍.采用15 L发酵罐试验表明,28℃培养72 h左右,克拉维酸效价达2 152μg/mL.

利普司他汀发酵工艺研究

以毒三素链霉菌(stretomyces toxytricini)突变株XC-lp-69为试验菌株,研究了利普司他汀(lipstatin)的发酵工艺.通过单因素条件试验确定了其生物合成的最适温度,种龄,接种量及摇瓶装量.以正交试验优化了其发酵培养基,并进行了发酵中间补料试验,确定了最佳补料工艺.试验结果表明:以5.5%豆油,2.0%甘油,3.0%黄豆粉,1.0%酵母粉,1.2%卵磷脂的发酵培养基配方,以20h种龄,接种量2.0%,在250 mL三角瓶中装量25 mL,27℃下发酵,在发酵46 h时补加豆油/甘油混合物,利普司他汀的发酵效价达1 400μg.mL-1.

高产克拉维酸的耐甘油突变株选育及生理特性研究

以带小棒链霉菌XC-1-35为出发菌株,经紫外线照射60s,并结合甘油耐受性菌株的理性筛选,选育得到较佳诱变株XC-5-48,效价达1970μg/ml。该菌株经斜面连续传代4次,效价稳定在1800μg/ml以上。对该菌株的生理特性研究表明,其具有活力较强的甘油特异诱导的甘油转运系统(GTS)。以XC-5-48菌株为试验菌株,当培养基中甘油初始浓度为1.5%,并且在发酵60h时补加1.0%的甘油,摇瓶发酵的效价可达2668μg/ml,较出发菌株(318μg/ml)提高了7.4倍。该工艺应用于15L发酵罐共十个批次的发酵试验,96h时克拉维酸的平均效价达2103μg/ml。