鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

对从健康鸡空肠和病变组织中分离的15株细菌进行显微镜检、菌落形态观察、16SrRNA基因序列比较分析、致病试验及药敏试验。结果显示：分离菌革兰氏染色阴性，在普通营养琼脂培养基上形成圆形透明菌落，能够在SS培养基生长，在HE培养基和三糖铁培养基产生H2s；与GenBank奇异变形杆菌的相似性为100％～99．6％，与大肠杆菌、沙门菌的相似性为89．7％。91．0％，结合菌落特征和生长特性，该分离菌被鉴定为奇异变形杆菌。人工感染雏鸡（1．7×10^7cfu／mL），复制出与自然病例相似临床症状和病理变化。提示奇异变形杆菌引起鸡感染，肠道可能是奇异变形杆菌贮存库，对鸡群有潜在性威胁。药敏试验发现在6类18种常用抗菌素中，分离菌仅对氨基糖苷类没有抗药性。

邯郸地区鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

为了掌握邯郸地区鸡白痢沙门氏菌的流行情况和耐药情况,试验采用病原菌分离、形态学观察、生化试验、序列分析、药敏试验等方法对邯郸地区疑似沙门氏菌感染的病鸡进行了研究。结果表明:共分离鉴定出48株鸡白痢沙门氏菌,48株分离菌株对氟苯尼考、氯霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、卡那霉素、环丙沙星、阿米卡星、头孢噻呋、头孢噻肟、大观霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素较敏感,敏感率分别为97.92%、93.75%、93.75%、89.58%、87.50%、87.50%、85.42%、85.42%、85.42%、83.33%、83.33%、87.50%、83.33%、83.33%,对四环素、多西环素、磺胺嘧啶、磺胺甲口恶唑、磺胺异口恶唑、氨苄西林、阿莫西林的耐药性较强,耐药率分别为100%、97.92%、91.67%、87.50%、85.42%、56.25%、52.08%,48株分离菌株均具有多重耐药性,其中以5重耐药和7重耐药为主,分别占33.33%和39.58%。说明邯郸地区鸡白痢沙门氏菌的感染率较高,且具有不同程度的耐药性。

鸡传染性支气管炎病毒与白色念珠菌混合感染的诊断及病原分离鉴定

为了掌握发病鸡场的致病原及致病原的生物学特性,试验采用临床和实验室诊断、病原分离与鉴定等方法对临床疑似鸡传染性支气管炎病毒和念珠菌混合感染病例进行了研究。结果表明:临床组织病料经革兰氏染色镜检可见革兰氏阳性、圆形或卵圆形的酵母样细胞,经传染性支气管炎病毒和念珠菌特异性检测引物检测均为阳性;临床病料接种土豆琼脂培养基上可见圆形、乳白色、背面没有色素沉着的单个菌落,分离菌株革兰氏染色可见革兰氏阳性、菌体大小不一、圆形或椭圆形的酵母样菌,在玉米粉吐温培养基上可见厚膜孢子,在羊血清培养基上可见芽管,分离菌株的ITS基因与Gen Bank中白色念珠菌同源性高达97.4%;临床病料接种SPF鸡胚可呈现典型的"侏儒胚"现象,分离病毒的S1基因与Gen Bank中鸡传染性支气管炎病毒同源性高达99.7%。说明发病鸡场由鸡传染性支气管炎病毒和念珠菌混合感染所致。

脂多糖应激对肉仔鸡免疫功能和新城疫疫苗免疫效果的影响

试验旨在研究脂多糖应激对肉仔鸡免疫功能和新城疫疫苗免疫效果的影响。120只肉仔鸡随机分成4个处理组(对照组、Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组),分别在16、18、20日龄,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别腹腔注射100、500、1 000μg/kg体重的脂多糖0.5 mL,对照组注射生理盐水0.5 mL,在21日龄各处理组均滴鼻接种新城疫弱毒活疫苗(La Sota株)1羽份。结果显示,Ⅰ组与对照组相比,21日龄的坏死肿瘤因子α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)含量均差异显著(P<0.05);Ⅱ组、Ⅲ组与对照组相比,21日龄和42日龄的胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数、肝脏指数、TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、IFN-γ含量均差异显著(P<0.05),42日龄新城疫病毒抗体效价均差异显著(P<0.05);Ⅲ组与Ⅱ组相比,21日龄和42日龄的TNF-α含量、21日龄的脾脏指数和肝脏指数、42日龄的新城疫病毒抗体效价均差异显著(P<0.05)。表明肉仔鸡注射500、1 000μg/kg体重的脂多糖能引起机体长期处于免疫应激状态,导致免疫功能和疫苗免疫效果显著下降。

脂多糖应激对肉仔鸡生长性能、肠道微生物菌群和肉品质的影响

旨在研究脂多糖应激对肉仔鸡生长性能、肠道微生物菌群和肉品质的影响,确定脂多糖作为免疫应激模型的最适使用剂量提供指导支持,为阐明免疫应激状态下动物生长代谢变化及从营养角度研发抗免疫应激药物奠定基础。将120只肉仔鸡随机分成4个处理组(对照组、Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组),分别在16、18、20日龄,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别腹腔注射100、500、1 000μg/kg体重的脂多糖,对照组注射生理盐水,试验期为42d,通过检测平均日增重、平均日采食量、料重比、大肠埃希菌、乳酸菌、双歧杆菌、屠宰率、半净膛率、全净膛率、肉色、pH、剪切力、失水率等指标,比较分析脂多糖不同注射剂量对肉仔鸡生长性能、肠道微生物菌群和肉品质的影响。结果显示,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组与对照组相比,平均日采食量、平均日增重、乳酸菌数、双歧杆菌数、a*值、pH均显著降低(P<0.05),大肠埃希菌数、失水率均显著升高(P<0.05);Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅰ组相比,平均日采食量、平均日增重、双歧杆菌数、pH均显著降低(P<0.05),大肠埃希菌数、失水率均显著提高(P<0.05);Ⅲ组与Ⅱ组相比,平均日增重显著降低(P<0.05),失水率显著提高(P<0.05)。表明脂多糖应激能引起肉仔鸡肠道微生物菌群平衡发生改变,导致肉鸡生长性能、屠宰性能和肉品质下降,而且应激强度越大,负面效应越强。

雏鸡屎肠球菌感染的病原学与分子生物学诊断

为了调查雏鸡屎肠球菌感染,从疑似病雏肝脏分离病菌,进行菌落和菌体形态学观察,16SrDNA序列比对,特异PCR分析和病理学观察。结果显示,分离株菌落较小圆形,菌体为圆形或椭圆形,革兰染色阳性。分离株与GenBank中屎肠球菌同源性为99.6%~98.7%,与其他菌株的同源性均小于97%。PCR扩增条带为特异屎肠球菌的目的片段。经分子生物学方法结合菌落及菌体的形态学,该菌被鉴定为屎肠球菌。病理学观察发现,肝脏肿大、出血,肝细胞质疏松并且致病力试验复制出与临床相似病例,这些提示该病雏为屎肠球菌感染。

家兔须癣毛癣菌皮屑涂片染色方法的比较研究

为了建立须癣毛癣菌快速诊断方法,采集疑似患真菌病的家兔皮屑样品96份,制作涂片,分别进行直接镜检、G rocott六胺银染色、过碘酸雪夫氏染色、Calcofluor W hite荧光染色和定量PCR检测。结果显示,4种常规方法的阳性率依次为69.78%、71.19%、72.92%和84.38%,特异性和阳性预测值没有显著差异,而荧光染色检查的敏感性和阴性预测值明显高于其他3常规种方法(P<0.01)。定量PCR的阳性率略高于荧光染色,但没有显著差异。与其他3种常规方法相比,Calcofluor White荧光染色方法相对简单、快捷、敏感、阳性率高,其阳性率与定量PCR相当,但费用低。由此可见,Calcofluor White荧光染色方法是须癣毛癣菌感染可选择的检测方法。

鸡奇异变形杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、特异、敏感的鸡奇异变形杆菌检测方法。本研究针对鸡奇异变形杆菌全基因序列设计了1对特异性引物,建立检测鸡奇异变形杆菌的SYBR GreenⅠLC-PCR检测方法,进行敏感性、特异性、重复性试验,并通过临床组织样品检测评价其临床实用性。结果显示,所建立方法的标准曲线线性关系良好,相关系数R^2=0.9957。该方法灵敏度高,可检测到稀释度为10~1 CFU/m L的奇异变形杆菌。特异性强,不与其他禽源致病原发生交叉反应。重复性试验变异系数小于2%。提示该方法可用于鸡奇异变形杆菌的监测和早期临床诊断。

鸡舍气溶胶真菌的种类及浓度动态

为评估鸡舍空气的卫生质量,用Andersen-6级采样器采集鸡舍空气样本,计算各级培养基的菌落总数,分析真菌气溶胶颗粒大小和浓度,用ITS基因序列分析结合形态学的方法对分离菌株进行鉴定。结果显示:鸡舍气溶胶真菌浓度与季节、养殖模式、日龄和品种有关,其气溶胶真菌浓度在夏季、秋季、冬季和春季由高到低依次为(1.78±0.26)×103,(1.43±0.2 2)×103,(1.31±0.31)×103,(1.06±0.22)×103 CFU/m3。在不同的养殖模式中,地下最高,为(1.50±0.36)×103 CFU/m3;半封闭最低,为(0.98±0.25)×103 CFU/m3;封闭介于两者之间,为(1.04±0.14)×103 CFU/m3。肉鸡舍(3.12±0.48)×103 CFU/m3明显高于蛋鸡舍(0.98±0.11)×103 CFU/m3,并随日龄的增加而提高。在真菌气溶胶颗粒中,C-F级(0.65~4.70μm)颗粒占88%。获得26 703菌落,分离出153个菌株,鉴定出13个属,25种真菌;优势菌属为曲霉菌属(37株)和青霉菌属(44株),占菌落总数的52.93%(81/153);优势菌种为芽枝状枝孢菌(16株)、黑曲霉(15株)、草酸青霉(12株)、黄曲霉(10株)和链格孢(10株)。分离烟曲霉和热带念珠菌2种常见致病菌。这对鸡舍气溶胶真菌浓度、种类和颗粒大小有了一个全面的认识,为评估环境质量奠定基础,对环境卫生控制有指导意义。

鸡白痢沙门菌外膜蛋白C的原核表达与免疫反应性分析

利用PCR方法扩增鸡白痢沙门菌主要抗原外膜蛋白C的基因,将其定向克隆至pET30a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21表达菌,利用His标签的蛋白纯化柱纯化重组蛋白,通过免疫印迹检测重组蛋白活性。通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切鉴定获得了pET30a-C原核表达重组质粒,转化BL21表达菌后,通过IPTG诱导获得以包涵体形式存在的重组蛋白,重组蛋白纯化后免疫印迹检测显示具有良好的反应原性。本研究为鸡白痢基因工程抗原的制备及诊断试剂研究奠定了基础。

虾青素临床研究现状及其在特医食品开发中的应用前景

虾青素是1种酮式类胡萝卜素,具有广泛的临床应用价值,在糖尿病、心血管系统疾病、眼科疾病、神经疾病及肿瘤的预防和治疗等多方面体现一定的改善作用。特殊医学用途配方食品(特医食品)是为了满足特定疾病状态人群对营养素或膳食的特殊需要,专门加工配制而成的配方食品,能辅助临床治疗。对虾青素的临床及临床前研究进行综述,为未来基于虾青素的特医食品开发及进一步深入研究提供参考。

肉鸡白色念珠菌的分离与鉴定

为了对河北省某肉鸡养殖场发生的疑似念珠菌感染病例进行确诊,并进一步确定致病病原的遗传特征和基因型,采用分离培养、形态特征观察、ITS基因序列分析、基因分型鉴定等方法进行了肉鸡白色念珠菌(C.albicans)的分离与鉴定研究。结果表明:5株分离菌均属于白色念珠菌;5株分离株之间ITS基因同源性为96.9%~97.4%,与Gen Bank上白色念珠菌标准菌(FJ662402株、JN606308株)ITS基因的同源性为79.6%~99.7%;5株分离菌株中1株为基因A型,4株为基因C型。说明导致河北省某肉鸡养殖场发病的病原为基因A型和C型的白色念珠菌,应引起重视。

鸡白色念珠菌、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒三重PCR检测方法的建立与应用

根椐Gen Bank中已发表的白色念珠菌(CA)、传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)基因序列设计并合成三种病原的特异性检测引物,通过三重PCR反应条件的优化,建立了检测三种病原的PCR检测方法。该方法对同一样品中的CA、IBV和NDV核酸模板可同时扩增出231 bp、417 bp和747 bp的特异性片段,检测光滑念珠菌(CG)、克柔念珠菌(CK)、热带念珠菌(CT)、H9亚型禽流感病毒(AIV H9)、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、减蛋综合症病毒(EDSV)等7种禽病病原均为阴性,该方法对CA DNA、IBV c DNA、NDV c DNA的检测最低限度分别为25.0,33.5,36.5 pg,临床样品检测结果表明三重PCR检测方法可以用于这三种病原单独和混合感染的检测和鉴别诊断。说明所建立的三重PCR检测方法具有很好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,为三种病原单独或混合感染的检测和鉴别诊断提供了一种操作简单、检测快速的分子生物学诊断方法。