应用羧基荧光素-寡核苷酸-羧基四甲基罗丹明荧光探针测量吸收剂量

用X-射线照射不同浓度羧基荧光素-寡核苷酸-羧基四甲基罗丹明(Carboxyfluorescein-Oligonucleotidecarboxytetramethylrhodamine,FAM-DNA-TAMRA)水溶液,测量溶液发出的荧光强度,研究吸收剂量与荧光强度之间的关系。结果表明,对于含不同浓度FAM-DNA-TAMRA荧光探针的水溶液,在0-20 Gy剂量范围内,荧光强度与吸收剂量之间的线性关系很好,并且荧光稳定性良好,但存在荧光本底比较高,影响测量吸收剂量灵敏度的问题。研究结果提示,FAM-DNA-TAMRA荧光探针可以用于测量水溶液的吸收剂量。

miR-101对宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响和机制研究

Objective To study the effects of microRNA101（miR-101）on radiosensitization of human uterine cervix cancer HeLa cells and underlying mechanism. Methods HeLa cells were divided into three groups including blank control, miRNA negative control and miR-101 transfection group. The cells were irradiated by 160 kVp X-ray generated from a linear accelerator at a 目的 研究microRNA101（miR-101）对体外培养的人宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响及其作用机制.方法 实验设为3组,分别为空白对照组、阴性对照组和实验组.采用160 kVp X射线照射细胞,吸收剂量率为1.15 Gy/min.实时定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-101的过表达情况;克隆形成实验检测miR-101对HeLa细胞辐射敏感性的影响;γ-H2AX免疫荧光法检测细胞DNA双链断裂,Western blot实验观察ATM和DNA-PKcs蛋白表达量变化.结果 转染48 h后,实验组的细胞与空白对照组相比,miR-101的表达量明显增加（t=14.16,P〈0.05）.过表达miR-101的HeLa细胞存活率明显降低（t=10.75,P〈0.05）.miR-101能增加HeLa细胞的辐射敏感性（F=7.72,P〈0.05）,辐射增敏比为1.29.γ-H2AX免疫荧光显示,miR-101能抑制辐照后细胞DNA损伤修复.过表达miR-101的HeLa细胞与对照组相比,ATM和DNA-PKcs蛋白表达量明显减少.结论 miR-101 mimic对HeLa细胞的生长有抑制作用.miR-101过表达能增加HeLa细胞的辐射敏感性,miR-101通过抑制辐照后DNA损伤修复提高辐射敏感性.

应用Alexa Fluor488与BHQ1双标记寡核苷酸荧光探针测量辐射吸收剂量的可行性研究

目的 研究荧光探针Alexa Fluor 488-DNA-BHQ1用于辐射吸收剂量测量的可行性。方法 在寡核苷酸的5＇与3＇端分别标记荧光分子Alexa Fluor 488与其特异性荧光抑制剂BHQ1,制备Alexa Fluor 488-DNA-BHQ1的DNA双标记荧光探针。用X射线照射其水溶液,检测照射后溶液的荧光强度。结果 浓度为0.5~1μmol/L时,该荧光探针对剂量0.1~30 Gy之间线性响应最好（R2=0.99）。在辐照后40~80 min检测探针,荧光强度基本不变。4℃条件下保存受照后的荧光探针的荧光稳定性较好。结论 荧光探针Alexa Fluor 488-DNA-BHQ1可以应用于0.1~30 Gy范围内辐射吸收剂量的测量。

聚乙二醇和核酸适配体AS1411修饰的金纳米粒子对人宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响

目的研究聚乙二醇（PEG）和核酸适配体AS1411修饰的金纳米粒子（AuNPs）对人宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响。方法用PEG和PEG—AS1411分别修饰经柠檬酸钠还原法制备的AuNPs，制备纳米粒子AuNPs@PEG和AuNPs@PEG—AS1411。分别用CCK一8法和克隆形成法检测纳米粒子的细胞毒性。用电感耦合等离子体质谱仪（ICP—MS）检测HeLa细胞对纳米粒子的吸收量。用克隆形成法检测纳米粒子联合x射线照射对HeLa细胞存活率的影响。结果CCK-8实验结果显示，AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411对HeLa细胞的毒性很小（P〉0．05），而克隆形成实验结果则显示，10d后HeLa细胞的存活率明显降低（t=4．38～11．60，P〈0．05）。用AS1411修饰AuNPs，可以增加细胞对AuNPs的吸收。AuNPs@PEG和AuNPs@PEG—AS1411对HeLa细胞均具有辐射增敏作用（F=7．90、48．23，P〈0．05），Au浓度为10mg／L时，其增敏比分别为1．12和1．20。结论AuNPs@PEG和AuNPs@PEG—AS1411对HeLa细胞的急性细胞毒性较小，但具有长期毒性。用AS1411修饰PEG化的AuNPs，可以增强AuNPs的放射增敏作用。