一次性力竭运动后大鼠心室肌蛋白质组的差异性表达

目的:探讨力竭运动对大鼠心室肌蛋白质组表达的影响,初步筛选出对运动应激具有重要意义的心室肌目标蛋白质。方法:将10只雄性SD大鼠随机分为安静对照组和运动组(n=5)。运动组大鼠采用三级递增运动负荷跑台训练建立一次性力竭运动实验动物模型。取心室肌,提取心室肌组织全蛋白进行双向凝胶电泳(2-DE)分离。通过图像分析软件PD Quest进行分析后,选择运动后消失和表达量上调5倍或下调4/5以上的蛋白质点作为备选质谱鉴定蛋白点。结果:在电泳图谱上对照组平均检测到蛋白质点332±17个,运动组平均检测到347±22个。运动后共有47个蛋白质点发生了变化:5个点在运动后消失;表达量上调3倍以上的点有28个,下调2/3以上的点有14个,其中上调5倍以上的点14个,下调4/5以上的点4个。对6个备选蛋白质点进行了质谱鉴定,共鉴定出心肌α-肌球蛋白重链、原肌球蛋白-1、甘露糖结合蛋白C前体、腈水解酶和一个未知的分子量为21kD的蛋白质。结果表明,力竭运动后大鼠心室肌蛋白质组发生了明显变化;本研究为寻找新的运动性疲劳的生物标志物提供了新的思路。

中等强度运动对大鼠心室肌蛋白质组差异表达的影响

目的:探讨4周中等强度运动后大鼠左、右室肌蛋白质组的差异性表达,初步筛选出心脏在运动反应与适应过程中的目标蛋白质;方法:将18只雄性SD大鼠随机分为实验组和平行对照组(n=9)。实验组经4周中等负荷强度(70%V.O2max～80%V.O2max)跑台训练后,与对照组一起,提取左、右室肌组织的全蛋白样品。进行2-DE蛋白样品分离,采用PD-Quest软件进行图像分析和数据采集。选择运动后差异表达量≥10倍的备选目标蛋白点,进行胶內原位酶解与一、二级质谱鉴定;结果:运动后左、右心室差异表达量≥10倍的蛋白质点共24个,取其中9个点,经一、二级质谱鉴定出ATP合酶偶合因子6、葡萄糖调节蛋白78、烯酰辅酶A水合酶、ATP合酶α亚基、丙酮酸脱氢酶E1α1、硒联蛋白1、类似信号增殖关联蛋白1和丝氨酸精氨酸前体-mRNA拼接因子SR-A1以及一个分子量为116kDa的未知蛋白;结论:1)实验大鼠在心脏重塑过程中,左、右室肌蛋白质组发生了显著的变化。2)成功筛选出在运动医学领域中尚未涉足的8种目标蛋白,其表达量发生的适应性变化表明,在中等强度运动下,会引起心肌能量代谢水平的提高、心肌应激反应与适应能力的增强、血压调节能力的改善等一系列有益变化。

力竭运动大鼠心室肌蛋白质组表达特征

目的:采用蛋白质组学技术,建立安静和递增运动负荷训练后力竭大鼠心室肌蛋白质组的差异性表达谱,初步筛选出心室肌对力竭运动产生反应的目标蛋白质。方法:实验于2007-03在湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与蛋白质组学国家教育部重点实验室和省级运动人体科学实验室完成。①实验分组:10只SD雄性大鼠随机分为对照组和运动组,每组5只。②实验方法:运动组经过7周的大强度递增运动负荷训练后(最后一次力竭),对两组心室肌组织的全蛋白进行双向凝胶电泳分离。结果:经图像分析,在运动组的电泳图谱上共展现蛋白质点(338±17)个,对照组展现蛋白质点(352±17)个。运动后差异表达的蛋白质点共有99个。对其中差异表达的9个蛋白质点进行质谱鉴定,共鉴定出7个蛋白质,Stress-70protein,NADH-ubiquinone oxidoreductase Mr75000subnunit,Long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase,Tropomyosin-1alphachain在运动后"缺失",Nitrilase family,member2在运动后表达上调在5倍以上,一个相对分子质量为21000的未知蛋白在运动后表达下调在5倍以上,另外有两个点经鉴定均为Myosin-6,在运动后表达量相反。这些蛋白质属于收缩蛋白、能量代谢酶、分子伴侣等。结论:递增运动负荷训练后力竭时,大鼠心室肌蛋白质组明显地发生了反应。运动后"缺失"和下调的蛋白质点与心肌收缩的调控和能量代谢的方式转变以及细胞的应激反应有关,其中,成功筛选出6种在运动医学领域尚未涉足的、具有运动应激特点的目标蛋白质。

一次性力竭运动对大鼠心房肌蛋白质组表达的影响

目的:探讨一次性力竭运动后大鼠心房肌蛋白质组的表达特征,初步筛选对力竭运动应激有意义的心房肌蛋白质。方法:10只SD雄性大鼠随机分为对照组和运动组。采用三级递增运动负荷跑台训练建立动物力竭运动模型。提取心房肌组织全蛋白进行双向电泳分离。结果:经图像分析,对照组平均检测到382±24个蛋白质点,运动组平均检测到352±17个点。与对照组相比,运动组共有47个蛋白质点发生了变化。12个点在运动后消失,运动后表达量上调3倍以上的点有25个,下调超过2/3的有10个,其中上调量在5倍以上的有14个,下调超过4/5以上的有6个。对运动后表达差异大的4个蛋白质点进行质谱鉴定,鉴定出心肌型-α肌球蛋白重链、乌头酸水合酶、异戊酰辅酶A脱氢酶和甘露糖结合蛋白C前体4种蛋白质。结果表明,一次性力竭运动后,大鼠心房肌的蛋白质组发生了明显改变。

递增负荷运动后大鼠心房肌蛋白质组的差异性表达

目的:以往的许多研究都是针对心房的单个蛋白质进行的,没有系统地对心房的"全部"蛋白质进行研究,因而不能全面地对心房在运动性心脏重塑或运动性心脏疲劳中的作用做出解释。本实验应用双向凝胶电泳技术,认识递增运动负荷训练后,大鼠心房肌组织中对运动应激具有重要意义的差异性表达的目标蛋白质,从蛋白质组学水平上探讨运动性疲劳的发生及发展的规律。方法:实验于2006-11/2007-03在湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与蛋白质组学国家教育部重点实验室和省级运动人体科学实验室完成。①实验动物:10只雄性SD大鼠,随机分为运动组5只和对照组5只。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。②实验方法:递增运动负荷训练7周,力竭运动后6h,运动组和对照组同时麻醉处死。提取心房肌组织的全蛋白,依次对样品蛋白进行pH梯度-SDS双向凝胶电泳分离蛋白、改良考马氏亮蓝方法染色。运用Bio PD quest图像分析软件对双向凝胶电泳图谱进行分析。结果:①运动组和对照组蛋白质斑点数目分别是(354±40)个和(382±24)个,匹配率分别为(68.67±9.87)%和(72.6±8.62)%,相关系数为0.71。②共获得具有2倍以上差异性表达的蛋白质点104个。③运动后上调2倍以上的蛋白质点66个,其中运动后上调5倍以上的蛋白质点18个,未见运动后新增的蛋白质点。④运动后下调2倍以上的蛋白质点38个,其中运动后下调5倍以上的蛋白质点23个,运动后消失的蛋白质点7个。结论:在运动应激状态下,大鼠心房肌蛋白质发生了明显的差异性表达,这些差异性表达的蛋白质点为进一步深入观察具有运动性疲劳特征的新的目标蛋白提供了充分的实验依据。

军训期间大学生生理功能变化特点

对１９９９级１２１名男、女大学生在军训期间的晨脉、体重、反应时、ＲＰＥ、血压、台阶试验、５次肺活量、血常规与尿常规等生理指标进行监测与分析，结果表明大学生对军训负荷在心功能和感觉功能方面反应较敏感，５～７天后开始恢复，定量负荷后心功能水平较军训前有显著提高。

向研究与自由研究型实验教学改革模式的构建与实践

充分利用高校实验教学特有的时空优势与环境设备条件,构建以培养学生创新能力与实践能力为目标的＂定向研究与自由研究型＂实验教学模式,满足社会发展对创新型人才的需求,为高等院校实验室建设与实验教学改革提供实效性好、操作性强的实践模式。实践研究表明研究设计型实验教学模式,有利于培养学生的求知欲、实际操作能力、创新思维素质与创新能力,有利于拓展学生的知识面、提高学生的专业素养、教会学生学会学习,有利于推动高校实验教学的改革。

综合疗法治疗不孕症76例疗效观察

凡婚后未避孕、有正常性生活、同居2年而未曾妊娠者，称为不孕症。婚后未避孕且从未妊娠者称为原发性不孕，曾有过妊娠而后未避孕连续2年不孕者称继发性不孕。不孕症是妇科常见病，笔者自2006年6月至2009年6月采用综合疗法治疗该病76例，取得满意疗效，现报告如下。

预防产后出血中存在并需注意的问题

产后出血一直是产科领域中常见而严重的并发症,是我国孕产妇死亡的首要原因,尤其在我国农村发病率较高。因此,必须积极防治。但在基层防治产后出血中存在的一些问题制约着本病的防治,使其发生率仍然较高,时刻威胁着产妇的生命,直接影响着孕产妇病死率的下降。

综合疗法治疗先兆流产疗效观察

目的:观察综合疗法治疗先兆流产的临床疗效。方法:随机对照研究的方法,运用综合疗法治疗先兆流产66例,通过综合疗法治疗先兆流产前后临床症状和体征的观察,分析综合疗法治疗的临床疗效。结果:综合疗法治疗能明显改善先兆流产症状,继续妊娠至足月分娩,治愈率为95.5%,对照组72.9%。结论:综合疗法治疗方法是先兆流产的有效方法。

运动心脏重塑中大鼠右心室肌的差异蛋白质组学研究

目的:探讨在运动心脏的发生过程中,右心室肌蛋白质组的差异表达,筛选对研究运动心脏重塑机制有重要意义的右心室蛋白质。方法:18只雄性SD大鼠按运动能力和体重随机配伍分为对照组和运动组,每组9只。运动组进行12周中等强度有氧运动(70～80%VO2max),后与对照组同时称取体重、麻醉处死,称取心脏重量,提取右心室肌的全蛋白,对样品蛋白用双向凝胶电泳技术分离、后固定染色。运用Bio-rad PD quest图像分析软件对双向凝胶电泳图谱进行分析,选取差异蛋白进行质谱鉴定。结果:经过12周运动后,运动组心脏出现明显形态学变化。此次实验获得了重复性和分辨率较好的双向凝胶电泳图谱,与对照组相比,通过软件分析,上调到10倍以上或下调至1/10及以下的差异点31个,其中7个上调,24个下调。这些点最多位于分子量50～70kDa和10～20kDa、等电点7.0～9.0范围内。质谱分析并鉴定了其中2个蛋白点,包括丙酮酸脱氢酶E1α1(运动12周后下调)和一个未知蛋白。结论:12周运动后大鼠右室肌蛋白质组发生了明显变化。能量代谢酶的变化提示中等强度运动对心脏产生的重塑作用可能主要引起右心室肌能量代谢水平的变化。

长期递增负荷训练后大鼠心室肌蛋白质组的差异性表达

目的:探讨递增运动负荷训练后大鼠心室肌蛋白质组的表达特征,为进一步筛选对运动性疲劳的研究具有重要意义的蛋白提供实验依据。方法:将10只SD雄性大鼠随机分为对照组和实验组。实验组经过7周的递增运动负荷训练(最后一次为力竭)后与对照组同时麻醉处死,取心室肌,提取心肌组织的全蛋白进行双向凝胶电泳分离。运用Bio-radPDquest图像分析软件对图谱进行分析。结果与结论:在电泳图谱上运动组可见蛋白质点338±17个,对照组可见352±17个。运动后差异表达的蛋白质点共有99个。运动后消失的点有5个,表达量上调4倍以上和下调幅度超过80%的点各12个,表达量上调1倍以上和下调幅度超过50%的点分别有52个和42个。递增负荷运动训练后,大鼠心室肌蛋白质组发生了明显的质变和量变。运动后表达量差异比较大的蛋白质点的分子量主要集中在35～57kD,等电点主要集中在6.0～7.4和8.6～9.6,在这个范围的蛋白质多为能量代谢酶,提示心室肌能量代谢的改变可能是运动引起心肌疲劳的原因。

急性大强度力竭运动大鼠骨骼肌比较蛋白质组学研究

研究目的运用蛋白质组学的理论和方法研究急性大强度力竭运动大鼠骨骼肌蛋白质表达特征。方法10只雄性SD大鼠随机按体重配对分为安静组(5只)和运动组(5只)。运动组大鼠按Bedford大强度运动模型运动至力竭,力竭后3h和安静组大鼠同时断头处死,提取后肢腓肠肌全蛋白质做双向凝胶电泳。结果用bio-radPDquest软件对电泳图谱进行分析,安静组和运动组各获得667±35和572±28个蛋白质点,在运动组中出现新增和缺失的蛋白质点,同时还出现蛋白质表达上调和下调的蛋白质点。对表达差异的蛋白质点做MALDI-TOF-TOF质谱分析,鉴定出7个运动后表达差异的蛋白质。结论大鼠大强度力竭运动后蛋白质发生了质和量的变化,为更加深入地研究运动性疲劳打下了良好的基础。

凝血纤溶系统与动脉粥样硬化血栓形成的关系及运动对其的影响

凝血纤溶系统与动脉粥样硬化血栓形成的关系及运动对其的影响,一直以来是医学界和运动医学领域关注的课题。与血栓形成有关的生理过程主要有凝血系统、纤溶系统和血小板系统。运动对此三系统可以产生影响。研究运动医学领域的已有成果发现:大多数文献报道局限于某一个系统的某一个或几个因子,缺乏对三大系统的整体性研究。致力于探讨能综合反映三大系统功能的研究方法和检测项目是解决问题的关键所在。

急性力竭运动后大鼠骨骼肌蛋白质组差异性表达的研究

目的:应用双向凝胶电泳技术(2-DE),分析探讨急性大强度力竭运动后大鼠骨骼肌组织蛋白质组的表达变化及其意义。方法:10只雄性SD大鼠按体重配对随机分为安静组(5只)和运动组(5只)。运动组大鼠按Bedford模型运动至力竭。力竭后3小时处死大鼠,取其后肢腓肠肌全蛋白质进行SDS-固相pH梯度聚丙烯酰胺双向凝胶电泳,运用Bio-radPDquest图像分析软件对2-DE图谱进行分析。结果:安静组显示667±35个蛋白质点,运动组显示572±28个蛋白质点,蛋白质点的匹配率为75%;运动后消失88个蛋白质点,新增32个蛋白质点;运动后蛋白质量上调2倍以上的蛋白质点有12个,蛋白质量下调至1/2以下的蛋白质点有10个,共有282个蛋白质点表达有差异。结论:大鼠大强度力竭运动后3小时,腓肠肌蛋白质发生了明显的质和量的变化。

运动与绝经后骨质疏松

采用文献资料方法 ,论述了运动预防绝经后骨质疏松的可行性 ,比较了不同运动对绝经后骨质的影响 ,并就运动防治绝经后骨质疏松研究中存在的问题。

基于蛋白质组学的中等强度有氧运动对大鼠心房肌物质能量代谢蛋白差异表达的研究

目的:基于蛋白质组学的研究技术与方法,研究4周中等强度有氧运动对大鼠心房肌蛋白质组差异表达的影响,揭示中等强度有氧运动对心房肌物质能量代谢影响的规律。方法:建立速度24m/min、持续时间40min(负荷强度相当于60%—70%VO2max),持续训练4周的中等强度有氧运动实验动物模型。应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离心房肌蛋白质点,串联飞行时间质谱仪技术鉴定电泳结果中表达量上调≥5倍以上,下调至1/5以下的13个备选目标蛋白质点。结果:鉴定结果有7个与心房肌细胞物质能量代谢相关的蛋白或酶,其中线粒体乌头酸水合酶上调5.7倍,丙酮酸脱氢酶E1α1表达量上调6.4倍,线粒体琥珀酸脱氢酶黄素蛋白亚基下调6.9倍,甲基丙二酸半醛脱氢酶[酰基]上调 6.3倍,异戊酰辅酶A脱氢酶下调6.9倍,线粒体二氢硫辛酸脱氢酶下调5.7倍,细胞质苹果酸脱氢酶表达量下调7.3倍。结论:①中等强度有氧运动诱导心房肌蛋白质组表达量与强度出现显著变化,同时诱发心脏出现生理性肥大。②筛选出甲基丙二酸半醛脱氢酶[酰基],该蛋白在运动生物医学领域尚未展开深入研究,为运动改善心房肌物质能量代谢的研究带来新的研究内容。③中等强度有氧运动可能改善心房肌物质氧化代谢水平,上述差异蛋白是否具有运动依赖性和蛋白之间的联系还需进一步验证。