电离辐射对沉默ATRX的HeLa细胞DNA损伤修复的影响

目的:靶向沉默宫颈癌HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白(ATRX),检测电离辐射对ATRX、γH2AX和Rad51蛋白表达及γH2AX和Rad51焦点数的影响,探讨ATRX参与辐射后HeLa细胞DNA损伤修复的作用。方法:3条ATRX-shRNA和阴性对照(Control-shRNA)的慢病毒载体转染293T细胞,收集慢病毒并感染HeLa细胞,利用puromycin筛选获得稳定沉默ATRX的细胞系,分别命名为shA1-HeLa、shA2-HeLa、shA3-HeLa和shCon-HeLa,采用Westernblotting法检测沉默ATRX效率以及电离辐射后ATRX、γH2AX和Rad51蛋白的表达,采用免疫荧光技术观察shCon-HeLa和shA1-HeLa组中γH2AX和Rad51焦点并计数其数量。结果:shCon-HeLa细胞中可见ATRX蛋白表达,而shA1-HeLa、shA2-HeLa和shA3-HeLa细胞中均无ATRX蛋白表达,表明沉默效率较高。在2和8Gy剂量照射后1、6和24h,shCon-HeLa组ATRX蛋白表达量逐渐升高,24h时表达量最高,且8Gy照射后1、6和24h表达量均较高。4Gy照射后0~6h,与shCon-HeLa组比较,shA1-HeLa组γH2AX焦点数在1h明显升高(P<0.05),而后逐渐降低,但在6h焦点数仍明显高于shCon-HeLa组(P<0.01);Rad51焦点数与γH2AX焦点数变化相一致,与shCon-HeLa组比较,shA1-HeLa组Rad51焦点数在1h明显升高(P<0.05),在6h时shA1-HeLa焦点数仍明显高于shCon-HeLa组(P<0.01)。4Gy照射后0~16h,shA1-HeLa组细胞中γH2AX和Rad51蛋白表达量均较shCon-HeLa组增加。结论:成功获得稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,电离辐射可诱导ATRX蛋白表达量增加,且沉默ATRX的HeLa细胞中γH2AX和Rad51焦点数及蛋白表达量均高于对照组,提示ATRX参与了辐射诱导的DNA损伤修复过程。

直肠黏膜渗液FH检测在非手术直肠癌局部疗效评价中的临床意义

目的 探讨直肠黏膜渗液FH检测在非手术直肠癌患者局部疗效诊断的临床意义。方法选取2016年12月至2017年12月36例非手术直肠癌患者,在治疗前、治疗中、治疗后分别进行直肠黏膜渗液FH检测和肠镜检查,以肠镜病理结果为标准,采用SPSS17.0软件进行分析,肠镜和FH两种检测方法对比结果采用卡方检验;Kappa一致性系数检验考察两种检测方法检验结果的相关性和一致性,P<0.05差异具有统计学意义。结果在治疗前、治疗中、治疗后行直肠黏膜渗液FH检测及肠镜检查的检出率分别为97.2%、100%;55.6%、66.7%;27.8%、33.3%,P均>0.05,差异无统计学意义;在治疗前、治疗中、治疗后FH检测的阳性预测值为91.8%、93.0%和94.7%;治疗中、治疗后两种检测方法的相关性检测Kappa一致性系数分别为0.769和0.870,且P均<0.0001。结论直肠黏膜渗液FH检测在评估非手术直肠癌局部疗效中的作用和肠镜检查效果基本一致,有望为非手术直肠癌疗效评价提供更加简便、快捷的指标。