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重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的鉴定
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作者 宋水川 季军捷 +4 位作者 寇庚 钱卫珠 史菊鲜 王皓 郭亚军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期460-461,共2页
关键词 重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 鉴定 Ⅱ型膜糖蛋白 半胱氨酸蛋白酶 细胞凋亡 克隆 原核表达
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小鼠Foxp3融合蛋白的原核表达及纯化
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作者 胡水清 危华峰 +6 位作者 张大鹏 史菊鲜 樊克兴 王皓 戴建新 郭亚军 张雁云 《中国血液流变学杂志》 CAS 2007年第2期181-184,共4页
目的克隆小鼠Foxp3(MFoxp3)基因,构建含该基因的原核表达载体,并表达、纯化出小鼠的Foxp3融合蛋白。方法RT-PCR方法从小鼠淋巴细胞扩增出小鼠Foxp3基因,连入T Easy Vector进行测序,然后将序列正确的小鼠Foxp3基因用酶切的方法从T Easy v... 目的克隆小鼠Foxp3(MFoxp3)基因,构建含该基因的原核表达载体,并表达、纯化出小鼠的Foxp3融合蛋白。方法RT-PCR方法从小鼠淋巴细胞扩增出小鼠Foxp3基因,连入T Easy Vector进行测序,然后将序列正确的小鼠Foxp3基因用酶切的方法从T Easy vector切下,并将其连接到用相同酶切,含有硫氧还蛋白(含6个组氨酸“标签”)的pET 32a(+)原核表达载体中构建pET 32a(+)-MFoxp3表达载体。用IPTG诱导转化pET 32a(+)-MFoxp3表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并以镍螯合层析法纯化MFoxp3融合蛋白。结果经RT-PCR成功地克隆了1,290 bp的小鼠Foxp3基因,测序正确后转化大肠杆菌原核表达载体pET 32a(+),重组质粒在BL21(DE3)中成功表达出分子质量约为63 kD的融合蛋白,运用Ni-NTA方法纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白纯度达80%,并用Western Blotting检测蛋白的灵敏度和特异性。结论构建了小鼠Foxp3的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化出小鼠Foxp3的融合蛋白。 展开更多
关键词 小鼠Foxp3基因 原核表达 蛋白纯化
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