奶牛同期发情-定时输精技术研究进展

减少输精次数,缩短空怀间隔,提高奶牛妊娠率是提高奶牛繁殖效率,节约养殖成本的重要保障。奶牛同期发情-定时输精技术不仅能满足上述要求,还能跳过发情鉴定环节,直接进行定时输精,进而最大限度提高奶牛繁殖率。本文介绍了奶牛同期发情-定时人工输精(estrous synchronization-fixed-timed artificial insemination, ES-TAI)发展过程中的常用技术和新技术,并将这些技术按不同的处理方式进行归纳分析,重点论述各类技术的原理、操作流程以及实际应用效果,以期为进一步研发更加高效的奶牛同期发情-定时输精新技术和规模化牧场奶牛的繁殖管理提供一定的参考。

牛Bta-miR-494序列特征及其组织表达分析

为探究牛Bta-miR-494的序列特征及其组织表达情况,运用生物信息学方法分析其上游序列的CpG岛、启动子及转录因子特征及其在不同物种间的保守性;之后对牛Bta-miR-494的靶基因进行预测及功能富集分析;最后通过qRT-PCR方法检测其在牛不同组织及不同时期同一组织间的时空表达特征。结果表明,Bta-miR-494在不同物种间高度保守且与山羊亲缘关系最近,其上游不含CpG岛、存在2个转录起始位点;预测靶基因富集分析表明,Bta-miR-494的靶基因显著富集在PI3K-Akt、p53及MAPK等与肌肉生长发育及代谢相关的信号通路;qRT-PCR结果显示,Bta-miR-494在成年牛肝脏中的表达量最高,睾丸中表达量最低;且Bta-miR-494在成年牛股二头肌中的表达量显著高于初生犊牛,而心肌和背最长肌中的表达量显著低于初生犊牛。这种组织间差异性表达提示,Bta-miR-494可能在牛不同生长阶段的肌肉组织发育过程中主导不同的生肌表达模式。

新疆褐牛PPARγ、MYF5和AGPAT5基因SNP突变与体尺性状的关联分析

【目的】鉴定与牛体尺性状相关的基因,筛选PPARγ、MYF5和AGPAT5三个基因的SNP多态性,研究SNP突变对牛体尺性状的影响,为新疆褐牛的分子育种提供标记信息。【方法】采用PCR-RFLP方法对新疆褐牛PPARγ、MYF5和AGPAT5基因的突变位点进行研究,通过单倍型法构建三个目标基因的单倍型块并统计不同单倍型的基因型频率。【结果】三个基因的6个SNP位点对体尺性状均有显著影响,mRNA二级结构预测发现PPARγ-exon7(G74T)和AGPAT5-exon7(G72A)均导致mRNA二级结构和自由能发生改变,蛋白二级结构预测发现牛PPARγ基因外显子1和AGPAT5外显子7的2个SNP位点均为错义突变,改变氨基酸结构,但是蛋白质二级结构未发生改变;MYF5外显子1的SNP位点突变为同义突变,氨基酸及蛋白质二级结构均未发生改变。【结论】筛选PPARγ、MYF5和AGPAT5基因的6个SNP位点,基因PPARγ、MYF5和AGPAT5与牛体尺性状的关系。

牛子宫复旧调控机制及促进子宫复旧方法的研究进展

牛产后子宫复旧延迟会延长繁殖间隔,降低繁殖率。子宫复旧涉及产后子宫组织退化、修复与子宫肌层的重塑,其中干细胞、细胞因子与非编码RNA以及雌激素与孕激素等参与调控产后子宫组织修复与再生。同时,维生素与葡萄糖类物质、中药制剂、免疫调节因子等绿色、无公害防治方法能够有效促进牛产后子宫复旧。本文就牛产后子宫复旧调控机制及促进子宫复旧方法的最新研究进展进行归纳总结,以期为研究动物产后子宫复旧的分子调控机制及研发促进子宫复旧新方法提供一定参考。

肉牛剩余采食量相关瘤胃及粪便微生物特征比较分析

本试验旨在研究不同剩余采食量(residual feed intake,RFI)相关肉牛胃肠道微生物物种组成及相对丰度、微生物基因功能注释与富集特征。选取30头牛进行81 d饲喂试验,试验结束后选取极端RFI个体各5头屠宰并采集瘤胃液及肠道末端粪便样用于宏基因组测序。结果表明:共获得259045.47 Mb有效数据,组装得到4318393条Scaftigs,基因预测得到7008053个开放阅读框(ORFs)。进行物种注释后发现粪便样中Top10物种相对丰度在高剩余采食量(high residual feed intake,HRFI)、低剩余采食量(low residual feed intake,LRFI)组间无差异(P>0.05),瘤胃液中的Top10微生物在LRFI组的相对丰度均低于HRFI组;粪便中、瘤胃液中优势菌门均为拟杆菌门和厚壁菌门;粪便中的优势属为拟杆菌属,瘤胃液中的优势属为普雷沃菌属。LefSe分析显示,在粪便中LRFI组的丹毒丝菌纲(Erysipelotrichia)显著富集(P<0.05),瘤胃液中差异最显著的是甲烷杆菌纲(Methanobacteria),且该菌在HRFI组的相对丰度显著高于LRFI组(P<0.05)。使用KEGG、eggNOG和CAZy数据库进行功能注释分析表明,在胃肠道中微生物的一些功能基因的丰度与RFI的分组有关。不同RFI肉牛瘤胃液、粪便中的微生物结构存在显著差异,丹毒丝菌纲、甲烷杆菌纲可能是区分肉牛饲料效率的潜在生物标志物之一。

肉牛剩余采食量相关下丘脑差异lncRNA筛选及特征分析

剩余采食量(RFI)是用于评价家畜饲料利用效率的重要指标之一,其受消化代谢、肠道免疫、运动及下丘脑采食中枢等多种因素调控。lncRNA是一类参与众多生物学过程的非编码RNA分子,在疾病等表型研究中得到广泛研究,但有关下丘脑lncRNA表达特征及其与牛采食量调控存在何种联系仍不明确。旨在筛选下丘脑中与RFI相关的lncRNA,探究lncRNA与饲料利用率之间的调控关系。选择极端高、低RFI安格斯牛为材料,采集下丘脑组织样本,经总RNA提取、文库构建及高通量测序后开展RFI相关差异表达lncRNA筛选及调控通路分析。共鉴定出105个差异表达lncRNA,其中46个lncRNA在LRFI组下调,59个上调,这些差异lncRNA预测靶基因主要富集于线粒体相关的氧化磷酸化及生热作用等通路;同时上述通路中相关基因(ATP酶、呼吸链复合物)主要与差异表达lncRNA(LNC_006637、LNC_007569、LNC_012079、LNC_005449)相关;蛋白互作网络分析构建的网络中的一些基因(NDUFA4、SDHD、UQCRH)也已被报道为与家畜饲料效率相关。以上结果表明,牛剩余采食量相关的下丘脑组织可能主要通过生热作用及氧化磷酸化信号通路对机体线粒体功能及能量利用进行调节,但这需要更多的细胞试验进行验证。

宁夏地区荷斯坦奶牛妊娠天数对泌乳性状的影响

为探究荷斯坦奶牛妊娠天数对泌乳性状的影响,收集了宁夏地区9个规模化牧场2005—2020年间出生的30 133头荷斯坦奶牛的泌乳性状与繁殖性状数据,利用SAS 8.1软件,采用GLM等过程分析了妊娠天数对11个泌乳性状的影响,并对其进行方差分析和相关性分析。结果表明:奶牛的妊娠天数与日产奶量、体细胞评分、高峰奶量、305 d产奶量、乳脂量以及乳蛋白量均呈现极显著正相关(P<0.01,r>0),其中与305d产奶量的相关性最强(r=0.753)。而妊娠天数与乳脂率、乳蛋白率、脂蛋比、乳糖率和乳固形体含量呈弱相关或者不相关。当奶牛妊娠天数在280 d左右时,奶牛的整体泌乳指标达到最优值,而过高或过低的妊娠天数均会对奶牛泌乳性状产生负面影响,其中过低的妊娠天数影响相对更大。本研究发现荷斯坦奶牛的妊娠天数能够显著影响部分泌乳性状,因此可作为产奶量和乳品质等泌乳性状的显著预测因子。研究奶牛的妊娠天数有助于牧场采取更加适当的管理措施,满足不同妊娠奶牛的营养需求,对提高牧场的经济效益具有重要意义。

肉牛大理石花纹等级相关lncRNA筛选与特征分析

牛肉大理石花纹特征是由多基因调控的重要肉质性状,是衡量高档牛肉品质的条件之一。LncRNA是一种重要的非编码RNA,在调节脂肪沉积的相关生物学过程中发挥重要作用。为了解lncRNA在肉牛不同大理石花纹表型中的潜在生物学作用,采集高(A5)、低(A1)2种极端等级大理石花纹的杂交和牛背最长肌组织,利用高通量测序方法检测与肉质大理石花纹相关的差异lncRNA,预测差异lncRNA反式作用靶基因,并对其进行功能富集分析。结果表明,在2个等级大理石花纹牛肉组织中共筛选出45个显著差异lncRNA,其中在高等级大理石花纹组织中分别有21,24个显著上调及下调的lncRNA,包括MSTRG.9509.3、ENSBTAT00000077612、ENSBTAT00000072841等与脂肪沉积相关的lncRNA。对反式作用靶基因的功能富集分析表明,预测靶基因显著富集到脂多糖结合、脂肪分解等脂肪沉积相关的生物学过程。差异lncRNA可能通过反式作用靶向脂肪沉积相关基因(FABP4、PLIN1、LIPE等)参与调节肉牛大理石花纹表型特征。检测到的牛肉大理石花纹相关差异lncRNA、预测靶基因及其富集通路将为拓展对非编码RNA生物学功能的认识及其与牛肉大理石花纹特征的关系奠定基础,也为农业家畜的优质性状解析与新品种培育提供参考。

孕酮—ARIS的建立

本研究利用酶蛋白激活免疫测定系统(ARIS)原理,以黄毒腺嘌呤二核苷酸(FAD)作为孕酮(P4)的标记物,建立了P4-ARIS方法学。测定系统的灵敏度达到47.46bpg孔-1,标准曲线的拟合度为0.99692.75×10-3(n=8),与P4-RIA平行试验,测值的相关系数为r=0.9033(y=-6.2879+1.2730RIA)。为研制P4-ARIS现场测定试剂盒奠定了基础。

奶牛早孕诊断乳汁孕酮临界值的确定

随机选择健康荷斯坦母牛６３头，其中发情周期牛５头，配后１８－２４天牛３０头和通过直检确定的怀孕牛２８头，按程序采集末乳乳样。用放射免疫测定法（ＲＬＡ）测定乳汁孕酮（ＭＰ４）浓度。以发情第３天ＭＰ４浓度加上２倍标准差为未孕临界值的上限，以配后１８－２４天怀孕牛ＭＰ４浓度的平均值减去１倍标准差为怀孕临界值的下限。结果表明，奶牛ＭＰ４早孕诊断临界值为：≥７．１９ｎｇ／ｍｌ为怀孕，＜４．７２ｎｇ／ｍｌ为未孕，其间为可疑。据上述标准，配后２２－２４天的怀孕确诊率均为９２．３０％，未孕的确诊率为１００％。因此，以配后２２－２４天为早孕诊断的最佳采样时间。

新疆褐牛的资源状况与发展策略

新疆褐牛是中国优良的地方品种,同时也是乳肉兼用品种,对发展地方经济、农牧民增产增收起到重要的作用。本文就新疆褐牛的资源状况、存在的问题以及发展展望等方面做了详细阐述,希望能推动新疆褐牛业的快速、健康、持续发展。

奶牛乳汁孕酮现场快速测定技术的发展

本文描述了近年来奶牛乳汁孕酮现场快速测定技术的发展概况。对测定原理和方法学作了详细论述；讨论了影响测定结果准确性的因素；同时介绍了乳汁孕酮现场快速测定技术研究的新动态及其应用前景。

牛蹄病综合防治措施的临床效果

在家畜繁育中心奶牛场、种公牛队、金积镇部分户养奶牛 ,应用牛蹄病综合防治措施两年 ,蹄病发病率由 74 3%、78 1%和 5 4 8%降至 4 7%、0和 3%。死淘率由 2 7 6 %、10 0 %和 4 6 6 %降至3 4 %、0、0。对严重变形蹄进行矫正修蹄 ,修蹄一周后一个月比修蹄前一个月奶产量增加 1 2 7～1 9kg和 1 4～ 2 1kg ;种公牛修蹄一周后比修蹄前一周采精量。

哺乳动物生殖功能的免疫调节

本文根据近年来在生殖免疫学方面取得的研究进展，讨论了抗精子免疫和与性腺功能、怀孕、分娩、泌乳、生殖内分泌功能有关的免疫调节机理以及激素免疫；着重阐述了细胞因子在协调免疫系统对生殖功能的影响方面所起的作用。提出分娩发动可能与来自胎儿的免疫因素有关；抗精子免疫可能是引起家畜屡配不孕和早期胚胎死亡的原因之一。

兔抗孕酮抗体的制备及纯化

以11α－羟孕酮半琥珀酸酯为原料．采用混合酸酐法合成11α－羟孕酮半琥珀酰一人血清白蛋白结合物。两批合成的产率分别为87．38％和64．88％；孕酮与人血清白蛋白的分子结合比率为18：1和23：1。达到Sigma同类产品标准。用合成的P4—HSA主动免疫家兔．成功率为50％（5／10）．用RIA监测P4抗血清滴度，最高达1：40000，通过RIA测定血样和乳样P4浓度检验，所制备的克抗孕酮血清符合免疫学测定的要求。采用盐析－DEAE（DE—32）平衡抽滤法纯化抗孕酮IgG，经SDS－PAGE电泳检测，纯度达95％以上。制备方法简便实用。

哺乳动物性别决定的研究进展

本文从哺乳动物性别决定研究的历史沿革到当前的发展动态,较为详尽地概述了性别决定的染色体理论、性别决定的基因调控机理和性别决定模型,并提出一些在未来研究工作中具有挑战性的问题。

葡萄糖氧化酶酶蛋白的制备及全酶活性重建

用改良的Morris（1981）方法制备出高纯度葡萄糖氧化酶酶蛋白，并进行全酶活性重建。结果表明，酶蛋白回收率为60％，重构活性达到全酶的80．07％，活性位点FAD浓度为53．92nmolFADL-1as-1（活性位点）。并证明，在不增加FAD浓度的情况下，增加酶蛋白用量可提高重构活性。

应用核技术监测母牛产后生殖活动中的公牛效应

随机选择成年黑白花母牛41头,试验组(n=24)产后第7天起与公牛接触,对照组(n=17)则与公牛隔离。每天观察发情表现,每3天直肠检查1次。对其中32头母牛,从产后3天开始至怀孕60天为止,采集末乳乳样,应用 RIA 测定孕酮(P_4)浓度。根据 P_4水平变化,结合观察母牛的行为表现和直检卵巢活动情况,监测公牛的生物学刺激对母牛产后生殖活动的影响;同时观察两组母牛 P_4的变化范型。结果表明:试验组产后卵巢周期活动恢复时间显著早于试验组(P<0.05),分别为21.86±10.83和33.63±24.00天:试验组产后60天内的发情检出率为68.25%,对照组为44.44%,两者差异显著(P<0.05);同一期间,试验组的发情次数极显著多于对照组(P<0.001),分别为2.63±0.77和1.59±1.06次。试验组85天的受胎率也显著高于对照组(P<0.01),分别为66.67%和23.50%;试验组母牛的 P_4峰值比对照组提早出现,而且在产后60天期间 P_4的周期性变化频率明显增加。试验还对引入公牛的方法进行了改进。