miR-99a-5p在结核分枝杆菌感染宿主巨噬细胞中的免疫调控作用

目的:初步探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染THP-1细胞内特异miRNA在宿主抗结核免疫中的作用。方法:提取MTB感染及未感染THP-1细胞RNA,基于Illumina NovaSeq6000二代测序平台检测THP-1细胞内miRNA表达谱。采集4名健康受试者6 ml外周血并分离人原代巨噬细胞。应用实时荧光PCR(qRT-PCR)技术验证MTB感染THP-1细胞内特异miRNA并检测人原代巨噬细胞中靶标miRNA的表达水平。构建miRNA过表达载体,经慢病毒转染THP-1巨噬细胞获得稳定的过表达细胞株,使用qRT-PCR检测H37Rv感染的miRNA过表达细胞及对照空载体细胞中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)表达水平。结果:从16个二代测序结果表达差异明显的miRNA分子中选取既往未作研究且差异最为明显的miR-99a-5p(P=0.021)作为研究靶基因。通过qRT-PCR在THP-1细胞及原代巨噬细胞中验证,发现miR-99a-5p在THP-1感染组和原代巨噬细胞内的表达量(分别为0.482±0.148和0.433±0.072)均明显低于未感染组(1.536±0.290和1.113±0.218),差异均有统计学意义(t=6.476,P<0.001;t=3.167,P=0.019)。MTB感染miR-99a-5p过表达细胞后24 h的菌落形成单位(CFU)[64.0×10^(4)(52.0×10^(4),87.0×10^(4))]明显高于MTB感染的对照空载体细胞内CFU[17.0×10^(4)(16.0×10^(4),24.0×10^(4))],差异有统计学意义(Z=-2.323,P=0.029)。与MTB感染的对照空载体细胞相比,MTB感染的miR-99a-5p过表达细胞内TNF-α及IFN-γ的mRNA相对表达水平分别由1.018±0.310和1.687±0.135下降至0.740±0.001和0.631±0.374,差异均有统计学意义(t=4.631,P=0.010;t=3.349,P=0.010)。结论:miR-99a-5p可抑制TNF-α及IFN-γ的释放,促进MTB在巨噬细胞内的生长。MTB感染后宿主miR-99a-5p的下调表达可能在宿主抗结核感染免疫中发挥重要作用。

结核分枝杆菌乙酰转移酶fadA3对宿主蛋白乙酰化修饰及其体内存活影响的研究

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)乙酰转移酶fadA3对宿主蛋白乙酰化修饰、基因表达和MTB在体内存活的影响。方法:从首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所分子生物学实验室选取MTB标准株(H37Rv),利用CRISPR-cas系统辅助的非同源性末端接合技术(CRISPR-NHEJ)构建H37Rv-fadA3基因敲除株(ΔfadA3),利用微孔板法分别检测H37Rv和ΔfadA3在7H9液体培养基中的吸光度值(A值)和细菌活性,绘制生长曲线图和最低抑菌浓度表。运用免疫印迹和转录组学测序分析H37Rv和ΔfadA3感染巨噬细胞(巨噬细胞系THP-1分化得到)后蛋白质乙酰化修饰变化及基因表达的差异情况;采用菌落计数和苏木精-伊红染色法分析H37Rv和ΔfadA3在C57BL/6J小鼠肺组织和巨噬细胞中的存活及病理变化。结果:fadA3经敲除1116 bp片段后成功获得ΔfadA3敲除株。H37Rv和ΔfadA3在培养第3、6、9和12天的A 600值(分别为0.245±0.005和0.232±0.013、0.403±0.122和0.385±0.009、0.444±0.010和0.442±0.005、0.675±0.027和0.662±0.026)差异均无统计学意义(t值分别为1.623、2.351、0.178、0.848,P值均>0.05);二者对异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、左氧氟沙星、PA-824、利奈唑胺、氯法齐明、利福平、贝达喹啉、德拉马尼等一线/二线抗结核药物的90%最低抑菌浓度相同(分别为0.006、2.000、0.313、0.156、0.250、0.625、1.250、0.003、0.125、0.320μg/ml)。H37Rv感染巨噬细胞中全蛋白乙酰化修饰灰度值(243.100±7.125)与未感染组(204.800±9.348)和ΔfadA3感染组(154.500±14.890)的差异均有统计学意义(t=5.294,P=0.013;t=9.350,P=0.003)。与H37Rv相比,ΔfadA3感染上调的差异基因有94个,下调有7个。同时,在巨噬细胞模型(72 h)和小鼠肺组织中(28 d),H37Rv感染后的菌落形成单位计数[分别为(41.000±4.583)×10^(4)和log 10(5.531±0.203)]与ΔfadA3感染[(18.670±1.155)×10^(4)和log 10(4.541±0.276)]的差异均有统计学意义(t=8.815,P=0.001;t=6.466,P<0.001);ΔfadA3感染小鼠肺组织病理炎症性浸润较H37Rv感染小鼠明显减弱。结论:抗结核药物对ΔfadA3敲除株与H37Rv的杀菌效果一致。fadA3可显著调控宿主蛋白乙酰化修饰和基因表达,可能是维持H37Rv在巨噬细胞胞内和小鼠肺组织中存活,并导致肺组织炎症性浸润的重要毒力因子。这些发现将为靶向fadA3和宿主蛋白乙酰化的宿主导向治疗提供理论数据。

长链非编码RNA抗结核分枝杆菌感染功能的研究进展

目前对于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染和结核病发病的免疫调控机制尚未完全阐明。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是近年来结核病研究领域的重点关注对象之一,其可参与基因表达调控、细胞周期调节和细胞分化等多种生物学过程。研究结核病中异常表达的lncRNA在疾病发病及转归过程中的免疫调控作用,对于深入了解MTB感染和结核病发病过程中的宿主免疫应答机制具有重要意义。笔者综述近年来关于宿主lncRNA分子在MTB感染免疫调控过程中的作用和具体机制研究进展,为lncRNA介导的结核病宿主免疫治疗提供思路。

“十三五”背景下构建医养结合养老服务新体系的理论思考

医养结合是应对人口老龄化和未来养老的发展方向,本文在分析了医养结合必要性的前提下,主要运用理论分析等描述性研究的方法对医养结合养老服务体系进行了综合描述,对养老机构和医疗机构一体化建设、推进医养结合进行了理论探索并提出了构建医养结合养老服务新体系的一系列观点和政策建议。

源于传统生活方式的现代家居产品设计研究

中国几千年的发展进程中出现并流传下许多传统的生活方式。其中有许多精华值得我们借鉴。目前市场上大多产品只是停留在表面的中式元素设计,将传统生活方式融入现代家居产品设计中,更能体现产品的内涵。本文通过梳理中国传统生活方式的定义、发展及特点,对比了现代生活方式与传统生活方式的差异,总结了其对现代家居产品设计产生的各方面影响,说明了传统生活方式在家居产品设计中的重要性,为今后的创新设计提供了参考和依据。

基于基因芯片的miRNA表达差异在结核性脑膜炎与病毒性脑膜炎诊断中的价值

目的:评价基于基因芯片的miRNA表达差异在结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)与病毒性脑膜炎(viral meningitis,VM)诊断中的价值。方法:选取2017年12月至2019年9月在首都医科大学附属北京胸科医院和首都医科大学附属北京天坛医院治疗的TBM患者28例和VM患者27例作为验证样本进行实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证。选取前期收集的8例TBM患者和5例VM患者作为基因芯片样本进行全基因组miRNA微阵列分析,通过预测差异性miRNA的靶基因、基因本体(GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析、构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络筛选出两病间前10个差异性miRNA枢纽基因。再采用qRT-PCR对患者间表达差异明显的miR-21-5p进行验证,并通过受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)分析miRNA的诊断价值。结果:通过miRNA微阵列分析初步筛选出26个差异表达的miRNA(14个表达上调,12个表达下调)和对应的靶基因3217个。经GO富集分析、KEGG信号通路分析筛选出190个相关靶基因,对其进行PPI网络分析,筛选出前10个靶基因作为核心靶基因。对基因芯片检测样本的hsa-miR-21-5p相对表达量进行qRT-PCR验证,发现TBM患者hsa-miR-21-5p的表达水平[15.890(3.423,25.581)]较VM患者[0.807(0.614,0.955)]明显上调(Z=-2.355,P=0.019),差异倍数(TBM/VM)在基因芯片和qRT-PCR中分别是4.817和4.660,两种检测方法结果基本一致;对28例TBM和27例VM患者的hsa-miR-21-5p进行qRT-PCR结果比较,发现hsa-miR-21-5p在TBM患者的相对表达量为4.825(2.433,21.362),明显高于VM患者[0.204(0.112,0.711)],差异有统计学意义(Z=-5.000,P=0.000),且ROC曲线区分TBM与VM患者的AUC为0.893(0.806~0.980),敏感度为85.7%,特异度为88.9%。结论:相较于VM患者,作为基因芯片检测中表达差异明显的miR-21-5p在TBM患者中表达明显上调,可作为鉴别TBM与VM的潜在生物标志物。

乡村振兴视域下农村老人幸福感提升研究

在乡村振兴、全面建成小康社会的背景下,提升农村老人幸福感具有重要的时代意义。该文探究了在城乡一体化进程加快、老龄化程度加深的形势下,由于经济条件不乐观、社交关系薄弱、家庭关系亟待改善等因素给农村老年人幸福感提升带来的现实困境,提出了通过增加农民经济收入、完善农村老人医疗卫生服务体系和社会保障制度、因地制宜创新养老模式和营造尊老爱老的社会环境等途径,以破解制约农村老人幸福感提升的困境。

《全宋诗》补遗101首——据《中国佛寺志丛刊》补辑兼论补辑方法

据《中国佛寺志丛刊》辑得《全宋诗》《全宋诗订补》及《全宋诗辑补》失收诗人7家26首、已收诗人遗作75首,凡101首,亦为各辑补论文所未收。僧人诗作,自是佛寺志的关注点,《中国佛寺志丛刊》多载有僧人诗作,因为他们多不太出名,易为人忘却,而在佛寺志中却很好地保存。著名诗人如苏轼等,往往喜欢游览佛寺,并与僧人多有交往,多留有交往之诗作。

互联网,为建构精彩小学美术课堂助力

在科技飞速发展的背景下,我们也正式迈入了信息化时代,多媒体技术开始一点一点占据着人们的生活。在教育领域,多媒体技术同样推动着教学的革新与发展。鉴于此,本文将深入分析信息技术背景下小学美术教学策略。一、使用信息技术,优化新课导入导入,是整个教学过程中最为重要的环节,因为它将学生引入新知识的大门,是让学生萌发学习动机的关键步骤。导入虽然只有短短的3-5分钟,但它却能影响接下来近40分钟的教学。传统的导入方式相对单一,并不能起到很好的辅助效果,但是在多媒体技术的辅助下,导入方式会更加多元化,也更能刺激学生的感官,让学生产生强烈的学习动机。

信息网络时代运用微信平台全面推进医院党建工作

当前,中国特色社会主义建设迈入了新的历史阶段,现代信息技术已经应用到社会经济建设发展的方方面面,医院党组织推进党建工作与互联网的深入融合,是新形势下医院党建工作创新发展的必然趋势和客观要求。医院党组织应当真正认识到信息技术对于党建工作的重要促进作用,打造互联网+党建的创新工作模式,促进医院党建实效性的不断提升。

浅谈全面预算和绩效考核在企业财务管理中的作用

在科技飞速发展,互联网高度发达的今天,企业在运营产供销链条获利的同时,会更加重视财务管理,因为有效的财务管 理能够为企业的生产经营提供充分的融资保障,能够将企业获得的利润现金流进行合理的投资,实现资本价值最大化,从而使产供销 链条不断的进入良性循环,使企业的基本盘越来越大,获得更大的利润。企业基于利润优化的目的,还会有很多全方位的管理措施和 方式,例如制定战略和长远规划,制定短期的目标和预算,系统的启动全面预算,节约成本,调动人力资源积极性,就会很自然地引 入绩效考核这样科学的手段。 本文首先分别阐述全面预算和绩效考核的意义和在企业财务管理中的作用,接下来论证两者的关系和相互作用促进财务管理,最后

智能时代我国主流意识形态话语权建构论析

智能时代的来临,重构着人们的生产方式、生活方式和思维方式,给意识形态话语的生产、传播和治理带来了深刻的变革。在智能时代,我国主流意识形态的话语权建构面临着西方国家依靠智能技术霸权进行的意识形态渗透、资本运作逻辑的人工智能侵入、智能算法推荐衍生的“信息茧房”泛化、智能传播样式带来的受众接受偏好转变等风险挑战。应对这些风险挑战,需要从加强话语阵地、话语主体、话语主题和话语形式建设多角度综合施策,通过净化智能时代下我国主流意识形态的话语环境、锻造与智能时代相适应的意识形态工作队伍、提升智能时代我国主流意识形态的议题设置能力、优化智能时代我国主流意识形态的话语表达,建构起有针对性的应对体系。

竹材在现代家居产品设计中的应用

竹材具备众多优良特性,在现在家居产品设计领域中具有较高的应用价值。本文从研究竹材料的特性入手,分析竹制品的应用及创新设计方式,归纳了竹制品在家居产品设计中的应用途径,并探讨了竹材的应用趋势。

非编码RNA调控结核分枝杆菌感染巨噬细胞免疫应答的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌(MTB)感染引起的慢性传染性疾病。巨噬细胞是MTB进入宿主后的第一道防线,亦是MTB生长和持续增殖的主要宿主细胞,其功能的改变对于宿主抵御MTB感染及控制后续活动性结核病的发生至关重要。非编码RNA(ncRNA)参与了包括结核病在内的多种疾病的病理生理过程,对巨噬细胞介导的免疫应答过程有着十分重要的调控作用。本文综述了ncRNA调控巨噬细胞介导的MTB感染免疫应答的研究进展,以期为深入研究宿主导向的抗结核免疫治疗潜在靶点提供参考。

数字化背景下人工智能赋能德育的风险与应对

数字化背景下人工智能对德育的赋能主要体现在德育方法赋能、德育资源赋能和德育环境赋能。人工智能对德育的赋能,有助于推动德育个性化、精准化、交互化发展。同时,数字化背景下人工智能对德育的赋能也蕴含着一定的风险:人工智能技术的“预设固化”机制易消解德育过程生成性,人工智能技术的“算法赋权”易扭曲德育内容供给,人工智能技术的“用户中心主义”易弱化德育引导性功能。要应对这些风险,需要明晰介入边界、注重源头嵌入、建立保障机制,以确保人工智能赋能德育的适度性、正向性、稳健性。