河南省部分地区奶牛弓形虫病血清学调查

弓形虫病是由龚地弓形虫引起的一种人兽共患寄生虫病,猫、犬、牛、羊、猪等动物均可感染。奶牛感染弓形虫后急性型表现为体温升高,呼吸困难,体表淋巴结肿大,重者可致死亡。弓形虫感染阶段及传播途径多,其速殖子可通过胎盘在胎儿脑部形成包囊,导致死胎或流产。

牛传染性鼻气管炎病毒gE基因LAMP检测方法的建立

根据Gen Bank收录的BHV-I NM06株的gE基因序列,利用软件Primer Explorer V4设计2对LAMP引物,建立IBRV gE基因的LAMP检测方法;利用重组质粒进行了敏感性检测,利用IBRV、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛轮状病毒等进行特异性试验,并对临床采集的50份奶牛鼻腔拭子DNA进行了检测。结果显示,建立的LAMP方法能对重组质粒DNA产生阳性反应,在58℃-65℃8个温度进行反应,结果无肉眼可见差异,反应最短时间达90 min时可见到阳性结果;该方法的检测下限是1.68×10-4拷贝/μL,对6种其他微生物呈阴性反应;50份临床样品中检出2份阳性。表明本研究初步建立了IBRV gE基因的LAMP快速检测方法,可用于IBRV分离株的鉴定以及临床样品的快速检测。

2015年河南省规模化奶牛场BHV-1感染情况调查

为了解河南省规模化奶牛场牛疱疹病毒1型(BHV-1)的感染情况,课题组于2015年2~8月,对河南省5个地区的12个规模化奶牛场进行了分层随机抽样,共采集了440头牛的鼻腔和/或阴道拭子样品,采用qPCR方法进行BHV-1的病原学检测。结果:共检测出阳性奶牛68头,总体阳性率为15.45%;场阳性率为100%,其中阳性率最高场达到了68.00%,最低场为6.67%;5个地区的阳性率由低到高依次为豫东(10.00%)、郑州地区(10.78%)、豫北(12.04%)、豫西(20.00%)、豫南(35.82%);不同年龄段奶牛的阳性率不同,犊牛、后备青年牛、1胎、2胎、3胎、4胎以上牛分别是3.57%、6.67%、23.53%、26.22%、14.55%、28.57%;患病牛阳性率为28.13%,明显高于外观健康牛的13.23%。结果表明,2015年河南省调查的5个地区普遍有BHV-1感染,其中豫西、豫南地区的阳性率较高,明显高于豫东、豫中和豫北地区;随着奶牛年龄和胎次的增加,阳性率整体呈上升趋势;BHV-1感染与奶牛的临床健康状况密切相关,其中患有乳房炎牛群的阳性率最高。本试验首次利用qPCR对河南省规模化奶牛场进行了较为系统的BHV-1病原学调查,直接揭示了牛群中BHV-1的感染情况,分析了BHV-1感染与奶牛的年龄、机体健康状况、牛场地理环境等的关系。

鸡传染性贫血病毒VP3蛋白的原核表达及其单克隆抗体的研制

本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的表达.随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细胞融合以及间接免疫荧光(IFA)筛选,获得2株稳定分泌CIAV-VP3抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8;亚型鉴定表明,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均为IgG1;效价测定发现,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8的腹水间接免疫荧光效价分别为1:102400与1:12800;Western blot进一步证实,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均能识别重组蛋白rGST-VP3.本研究结果为后期研究VP3蛋白在CIAV致病中作用及其诱导凋亡分子机制奠定了坚实的物质基础.

河南省部分地区奶牛场传染性鼻气管炎感染情况调查

为了解河南省奶牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRv)的感染情况,采用SYBR Green I荧光定量PCR方法,对郑州、新乡、焦作等地区采集的397头奶牛鼻腔、阴道棉拭子进行了IBRv DNA检测。结果:总体检出率为7.1%,检出率最高场可达73.7%;患病牛群中的检测率(6.5%)高于外观健康牛群中的阳性率(5.9%)。由此证实,河南省奶牛场中存在一定的IBRV感染,并且其感染程度与年龄、机体健康状况、牛场饲养管理和卫生情况具有一定的相关性。

一株鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及全基因组分析

试验对江苏常州某养殖场内发生的疑似CIAV感染病例通过PCR、病毒分离以及基因组测序等方法进行疾病诊断与病毒鉴定。结果显示:病料组织CIAV特异性PCR为阳性,接种MDCC-MSB1细胞分离到一株CIAV病毒,命名为CZC1602-CIAV。基因组序列测定发现其基因组大小为2 298 bp。CZC1602-CIAV与NCBI上检索到的16个CIAV毒株全基因组序列比对分析发现,核苷酸的同源性在96%～99%之间。进化树分析表明,CZC1602-CIAV分离株与广州株(KU050680)和韩国株(JF507715)处于一个分支,而与美国的Alabama分离株亲缘关系较远。CZC1602-CIAV的分离鉴定及全基因组测定为进一步研究国内CIAV的分子流行及其致病性提供了基础材料。

郑州地区7株鸭源鸡杆菌的MALDI-TOFMS鉴定及其生物学特性分析

为了解郑州地区鸭源鸡杆菌的生物学特性和耐药情况,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,从郑州地区某鸡场分离的细菌中鉴定出7株鸭源鸡杆菌。对分离菌株进行形态学观察、生化试验和药敏试验,结果显示,分离菌株在血平板上长成光滑、圆润、灰白色、半透明、边缘整齐且呈β-溶血的小菌落;L-阿拉伯醇、D-山梨醇、麦芽糖、海藻糖试验的鉴定结果表明,7株鸭源鸡杆菌可能属于不同的生物分型;整体上,分离菌株对头孢噻肟、头孢曲松、阿米卡星、庆大霉素等敏感,对氨苄西林、环丙沙星、妥布霉素、左氧氟沙星和氧氟沙星具有较强的耐药性,对克林霉素、四环素、氯霉素、复方新诺明具有严重的耐药性。

河南省42株奶牛临床型乳房炎病原菌的分子鉴定及药敏试验

为了解近年来河南省奶牛临床型乳房炎的主要病原菌种类及药物敏感性,从郑州、焦作等地奶牛场采集乳房炎奶样47份,采用微生物学方法、16S rRNA基因PCR扩增、序列分析比较等方法对分离菌株进行鉴定,并用K-B纸片法对分离菌株中的26株致病菌进行药物敏感性试验。结果显示,47份奶样中共分离出17种42株细菌,环境性病原菌32株,主要包括大肠杆菌、克雷伯氏菌、芽孢杆菌、葡萄球菌等,检出率17.6%~20.6%。郑州2家奶牛场分离出的23株致病菌对16种药物均有不同程度的耐药,耐药率4.35%~56.52%。焦作1家奶牛场分离出的3株病原菌只对复方新诺明、氨苄西林、四环素、氯霉素耐药。部分菌株多重耐药严重,同时对3~11种药物耐药。结果说明分离的奶牛临床型乳房炎的病原菌种类很多,并且已经产生了严重的耐药性。