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赖型钩体重组质粒pDJH_2亚克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 被引量:2
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作者 江南 戴保民 +14 位作者 李胜富 方之茂 伍卫华 叶丹霓 杨耀 张云 赵慧业 刘家福 刘富先 屠云人 杨洪斌 黄自英 梁莉 胡利贞 赵慕愚 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1996年第4期348-353,共6页
为了探讨pDJH2的1.9kb017株钩体DNA片段可否作为钩体重组疫苗广谱保护性抗原的候选,采用重组DNA技术,将pDJH2的1.9kbDNA片段分别与pT7-7,pRSET系列重组,转化入大肠杆菌进行亚克隆,IP... 为了探讨pDJH2的1.9kb017株钩体DNA片段可否作为钩体重组疫苗广谱保护性抗原的候选,采用重组DNA技术,将pDJH2的1.9kbDNA片段分别与pT7-7,pRSET系列重组,转化入大肠杆菌进行亚克隆,IPTG诱导表达。结果显示:阳性亚克隆pDJt.pDJrB1能在大肠杆菌中高效表达;对其进行SDS-PAGE分析,可见68kd和23kd处出现新带,与钩体017株外膜同分子量蛋白带位置一致,免疫印迹(特异性抗017株外膜抗血清)在68kd和23kd处分别有印迹;用pDJt亚克隆重组质粒主动免疫豚鼠,可抵抗强毒力株攻击,表现出免疫保护作用。本实验结果提示:(1)pDJH21.9kb重组DNA片段能以不同质粒为载体,在不同大肠杆菌株中高效表达;(2)该重组DNA片段表达产物——68kd和23kd蛋白,可能是赖型钩体017株外膜的保护性抗原。 展开更多
关键词 赖型构件 重组质粒 亚克隆 免疫印迹 钩端螺旋体
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问号赖型钩体重组质粒rpDJt表达蛋白P68免疫原性的研究 被引量:2
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作者 江南 戴保民 +14 位作者 李胜富 方之茂 伍卫华 叶丹霓 杨耀 张云 赵慧业 刘家福 刘富先 屠云人 杨洪斌 黄自英 梁莉 胡利贞 赵慕愚 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1997年第2期122-127,共6页
为构建一种新型钩体重组亚单位疫苗,采用问号钩体rpDJt基因的蛋白表达物P68免疫动物,对其免疫原性进行研究。结果显示:在体外,P68能与其特异性抗血清及赖型钩体死菌苗抗血清呈明显高效价Ag-Ab反应;在体内,P68... 为构建一种新型钩体重组亚单位疫苗,采用问号钩体rpDJt基因的蛋白表达物P68免疫动物,对其免疫原性进行研究。结果显示:在体外,P68能与其特异性抗血清及赖型钩体死菌苗抗血清呈明显高效价Ag-Ab反应;在体内,P68能激起明显的T淋巴细胞转化,TH细胞活化,IL-2,IL-6活性增加。提示:rpDJt表达蛋白P68能激起机体强有力的T-B细胞协同性特异性体液免疫反应,是致病性强毒力钩体重组亚单位疫苗好的候选抗原之一。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 重组质粒 表达蛋白 免疫原性
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赖型钩体DNA重组质粒rpDJt及其表达蛋白P68对豚鼠的免疫保护研究 被引量:2
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作者 戴保民 江南 +14 位作者 李胜富 方之茂 赵慧业 伍卫华 叶丹霓 刘家福 杨耀 张云 刘富先 屠云人 杨洪斌 黄自英 梁莉 胡利贞 赵慕愚 《华西医科大学学报》 CSCD 1998年第3期248-251,共4页
为了进一步鉴定赖型钩体DNA重组质粒rpDJt及其纯化表达蛋白质P68的免疫保护作用,采用随机、双盲和对照法对50只豚鼠进行了3次和6个部位主动免疫接种,并于接种后30天以强毒力、大剂量活钩体攻击。结果:P68组存活... 为了进一步鉴定赖型钩体DNA重组质粒rpDJt及其纯化表达蛋白质P68的免疫保护作用,采用随机、双盲和对照法对50只豚鼠进行了3次和6个部位主动免疫接种,并于接种后30天以强毒力、大剂量活钩体攻击。结果:P68组存活率100%(7/7);rpDJt组存活率77%(10/13);pT7-7组(无重组质粒)存活率25%(3/10);全钩灭活疫苗组存活率93%(13/14)。作者认为该质粒的表达蛋白质P68可作为钩体基因工程亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 钩端螺旋体病 重组质粒 rpDJt P68基因
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问号赖型钩体重组质粒pDJH_2 DNA 序列测定及其与其它细菌omp基因序列比较分析 被引量:2
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作者 江南 戴保民 +18 位作者 鄢正新 杨文天 李胜富 方之茂 赵慧业 伍卫华 叶丹霓 阎蓉华 刘家福 杨耀 张云 刘富先 宋绍忠 屠云人 杨洪彬 黄自英 梁莉 胡利贞 赵慕愚 《华西医科大学学报》 CSCD 1996年第4期341-347,共7页
对pDJH2片段DNA进行了序列测定,结果:插入片段为1811个核苷酸;可读框2个:ORF1,1-565bp;ORF2(从最后一个密码倒算)1-662bp,计算机序列同源性或类似性匹配(alignment)表明,OR... 对pDJH2片段DNA进行了序列测定,结果:插入片段为1811个核苷酸;可读框2个:ORF1,1-565bp;ORF2(从最后一个密码倒算)1-662bp,计算机序列同源性或类似性匹配(alignment)表明,ORF1与ORF2的核苷酸类似性为49.36%;ORF1与L.kirschneri(L.alstoni)流感伤寒型omp核苷酸序列类似性为49.26%;ORF2与L.alstoni类似性为51.56%;ORF1与其它细菌(包括螺旋体)omp核苷酸序列对准比较,序列类似性均在43%以上。经查阅EMBLDNA序列数据库未见类似序列。作者认为pDJH2的1.9kb插入DNA片段(ORF1与ORF2)可能是具有保护作用的omp基因片段。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 核苷酸序更 外膜蛋白基因 omp基因
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应用人—鼠杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌人单克隆抗体的初步研究
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作者 叶丹霓 阎蓉华 +2 位作者 李胜富 彭海荣 徐欣 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第1期24-26,共3页
作者用绿脓杆菌多价菌苗免疫的人外周血淋巴细胞与SP2/0小鼠骨髓癌细胞融合,一次成功。细胞融合率为74%,抗体阳性率为19.7%。经3次克隆化后共获得2株能稳定地分泌抗绿脓杆菌人单克隆抗体的杂交瘤细胞株A_3和F_3。核型分析可见人与小... 作者用绿脓杆菌多价菌苗免疫的人外周血淋巴细胞与SP2/0小鼠骨髓癌细胞融合,一次成功。细胞融合率为74%,抗体阳性率为19.7%。经3次克隆化后共获得2株能稳定地分泌抗绿脓杆菌人单克隆抗体的杂交瘤细胞株A_3和F_3。核型分析可见人与小鼠的染色体共存。亚类检定均属人IgG,免疫印迹实验证明它们可识别绿脓杆菌抗原分子量为43kd和36kd的特异组分。 展开更多
关键词 杂交瘤技术 绿脓杆菌 单克隆抗体
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单克隆抗体治疗烧伤创面绿脓杆菌感染的初步探讨
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作者 马文熙 谭谦 +3 位作者 陈卫东 兰省科 王磊 叶丹霓 《铁道医学》 1994年第6期324-325,共2页
绿脓杆菌是烧伤感染的主要病原菌之一,用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌单克隆抗体进行保护小鼠抗绿脓杆菌感染实验,获满意效果,再用人体单层中性粒细胞技术,体外检测了抗绿脓杆菌I群10ll5株单克隆抗体(A4和D4)的调... 绿脓杆菌是烧伤感染的主要病原菌之一,用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗绿脓杆菌单克隆抗体进行保护小鼠抗绿脓杆菌感染实验,获满意效果,再用人体单层中性粒细胞技术,体外检测了抗绿脓杆菌I群10ll5株单克隆抗体(A4和D4)的调理吞噬活性,证明其可显著增强人体中性粒细胞对绿脓杆菌的吞噬,应用于烧伤创面绿脓杆菌感染的治疗,亦获良好疗效。 展开更多
关键词 绿脓杆菌 单克隆抗体 烧伤 感染
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以λgt11作载体构建赖型钩体基因文库及其重组质粒pDL121的克隆和在E.coli表达的研究 被引量:4
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作者 刘洪斌 戴保民 +17 位作者 敬保迁 伍卫华 李胜富 方之茂 赵慧业 叶丹霓 阎蓉华 刘家福 杨耀 张云 刘富先 宋绍忠 屠云人 杨洪彬 黄自英 梁莉 胡利贞 赵慕禺 《华西医科大学学报》 CSCD 1997年第1期18-22,共5页
为探讨赖型钩体抗原基因特点及其表达产物作为疫苗的可行性,采用问号赖型017株钩体经HhaⅠ和AluⅠ限制性内切核酸酶部分消化,行EcoRⅠ限制酶切位点甲基化,加上EcoRⅠ接头与去磷酸化的λgt11DNA-EcoRⅠ... 为探讨赖型钩体抗原基因特点及其表达产物作为疫苗的可行性,采用问号赖型017株钩体经HhaⅠ和AluⅠ限制性内切核酸酶部分消化,行EcoRⅠ限制酶切位点甲基化,加上EcoRⅠ接头与去磷酸化的λgt11DNA-EcoRⅠ臂连接,体外包装后转染E.coliY1090,建成含2.1×106重组子的问号赖型017株钩体基因文库。用抗赖型钩体兔血清从上述基因文库中筛选出一个强阳性克隆,λDL12,亚克隆入pUC18质粒,获重组质粒,pDL121。EcoRⅠ酶切证实该重组质粒含有1kb的外源插入片段。pDL121经IPTG诱导后,在SDS-PAGE上出现23kd特异条带。免疫印迹表明该蛋白带可被抗赖型钩体兔血清识别。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 基因文库 λgt11 重组质粒 分子克隆
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北京和旧金山等四城市分离的绿脓杆菌血清学分型调查分析
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作者 王世鹏 叶丹霓 《生物制品资料选编》 1989年第13期18-20,共3页
关键词 绿脓杆菌 血清学分型
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