ABO血型不合供者外周血造血干细胞的采集及移植效果研究

目的探讨应用CS-3000 Plus血细胞分离机采集ABO血型不合供者外周血造血干细胞的效率及不去除红细胞和/或血浆进行异基因外周血造血干细胞移植(PBSCT)的安全性。方法经G-CSF 5μg/(kg.d)动员的异基因外周血干细胞供者33名,应用CS-3000 Plus血细胞分离机的干细胞采集程序于动员后d 5采集,其中ABO血型主要不合12名,次要不合8名以及ABO血型相合13名。根据供者外周血的红细胞压积(Hct)和单个核细胞(MNC)计数,对分离机参数作相应调整。输注前从产品袋中留取干细胞,检测有核细胞数、MNC比例、CD34+细胞数、红细胞、血浆含量。单次处理循环血量(9 986±2 489)ml,抗凝剂用量(971±162)ml。供者采集前注射10%葡萄糖酸钙,以预防低钙反应。观察PBSC输注后受者的生命体征、尿液颜色及是否有溶血相关不良反应等。结果ABO血型主要不合组、次要不合组与ABO血型相合组采集物中的有核细胞数、CD34+细胞数、MNC比例无统计学差异(P>0.05),3组供者每次采集的PBSC产品终体积近60 ml,ABO主要不合组采集物中混入红细胞为(3.67—10.25)×1010/袋,ABO次要不合组采集物中血浆量为22—38 ml,不去除红细胞及血浆,直接回输给受者,均未出现溶血反应,所有患者造血功能均获得重建。结论应用CS-3000 Plus血细胞分离机采集ABO血型不合供者的外周血干细胞,通过调整分离机参数,减少ABO血型不合红细胞的混入,可以获得足够的干细胞数量并安全用于移植。

两种血细胞分离机干/祖细胞采集效果及供者采集前后血液指标变化的比较

目的比较Fenwal CS-3000 Plus(以下简名称Fenwal)与Amicus 2种血细胞分离机分离外周血造血干/祖细胞的效果及干/祖细胞采集后供者血液指标的变化。方法共有56名供者入组,Fenwal组32名,年龄(36.2±11.6)岁,选择单个核细胞采集程序,共循环37次;Amicus组24名,年龄(35.4±12.1)岁,选择MNC采集程序共循环27次。比较2组采集物白细胞总数、单个核细胞百分率、CD34+细胞数及采集前后供者Hct、Plt的变化。结果2组采集物的白细胞数、单个核细胞百分率、CD34+细胞数、采集效率均差异无统计学意义;2组采集后供者Plt下降率Fenwal组供者较Amicus组高;2组采集后供者Hct下降率差异无统计学意义;2组采集物中MNC、CD34+细胞数均与外周血中MNC呈正相关,CD34+细胞百分率与外周血MNC无相关性。结论在分离外周血干/祖细胞方面Fenwal与Amicus没有明显差异。

自体外周血干细胞移植在下肢缺血性疾病中的应用

目的观察自体外周血干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的效果。方法16例患者均给予G-CSF300μg/d,进行3d动员,第4天用CS-3000plus血细胞分离机采集患者自体单个核细胞,处理全血量(6554±563)ml,抗凝剂(ACD)(661±62)ml,将采集的干细胞悬液注射于双/单侧下肢小腿腓肠肌,每侧注射40个点位,0.75ml/点,每点干细胞数>1×108,间距30mm,深15mm。结果采集物中白细胞(1.71±0.77)×108/ml,单个核细胞百分率(96.3±2.6)%,CD34+细胞(1.68±0.81)×106/ml,产品容积(58.9±1.8)ml,14例患者外周血干细胞移植后疼痛、间歇性跛行、患肢发凉、皮色灰暗、溃疡等临床症状明显改善,2例临床症状未改善,有效率87.5%。结论自体外周血干细胞移植对患者损伤小、操作方便,适用于对药物治疗无效且不适于手术治疗的患者。

两种血细胞分离机干/祖细胞采集和移植效果的比较

背景:外周血造血干/祖细胞通过血细胞分离机进行体外收集,血细胞分离机的性能、工作状况将直接关系到采集物的特性和数量,从而直接影响受者的造血重建。目的:比较Fenwal CS-3000Plus与Amicus两种血细胞分离机采集外周血造血干/祖细胞及受者移植效果。方法:共入选接受异基因外周血干细胞移植患者51例,Fenwal CS-3000Plus组27例,平均年龄(34.2±10.6)岁;Amicus组24例,平均年龄(35.4±12.1)岁。比较两组采集物有核细胞数、CD34+细胞数、采集效率、红细胞与血小板采集量及造血重建时间。结果与结论:两组采集物的有核细胞数、CD34+细胞数、采集效率、红细胞采集量及造血重建时间差异均无显著性意义;Fenwal CS-3000Plus组血小板采集量明显高于Amicus组(P<0.01)。结果显示Fenwal CS-3000Plus与Amicus血细胞分离机在分离外周血干/祖细胞方面和移植效果没有差异;血小板较低被采集者使用Amicus血细胞分离机采集可能更为安全。

急性心肌梗死与不稳定型心绞痛患者血栓前体蛋白和肌酸激酶的检测

为了解检测血栓前体蛋白对急性冠状动脉综合征转归的早期诊断价值 ,5 1例临床确诊冠心病患者分为不稳定型心绞痛和急性心肌梗死两组 ,采用酶联免疫吸附法检测各组血浆中血栓前体蛋白含量 ,采用干化学法同步检测患者血清磷酸肌酸激酶及其同工酶。结果发现 ,急性心肌梗死组 2 5例患者血栓前体蛋白均值为 9.9± 3.9mg L ,不稳定型心绞痛组 2 6例患者血栓前体蛋白均值为 2 .6± 1.7mg L ,前者明显升高 ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1) ;急性心肌梗死组磷酸肌酸激酶均值为 5 95± 4 32u L ,磷酸肌酸激酶同工酶均值为 10 1± 74u L ,不稳定型心绞痛亚组磷酸肌酸激酶均值为 137± 4 0u L ,磷酸肌酸激酶同工酶均值为 10± 7u L ,前者亦明显升高 ,差别均有显著意义(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结果提示 。

临床分离的2208株病原体分布及耐药性

目的 分析某院临床常见病原体分布及耐药性,为合理选用抗菌药物提供参考.方法 采用WHONET5.5软件对该院2011年1月-2012年12月临床标本分离的2 208株病原体资料进行回顾性分析.结果 2 208株病原体主要分离自痰标本（50.63%,1 118株）和尿标本（22.69%,501株）.其中革兰阴性（G-）菌1 418株（64.22%）,以大肠埃希菌（15.72%）居首位,其次为肺炎克雷伯菌（11.96%）、鲍曼不动杆菌（10.64%）和铜绿假单胞菌（9.83%）等;革兰阳性（G＋）菌577株（26.13%）,主要为金黄色葡萄球菌（11.23%）;真菌213株（9.65%）.G-杆菌对亚胺培南的敏感性较好,但鲍曼不动杆菌耐药较为严重（耐药率55.74%～74.04%）;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）分别占69.76%和87.56%,未发现对万古霉素耐药的葡萄球菌属细菌.结论 该院住院患者感染部位以呼吸道为主;病原菌耐药形势日趋严重,加强病原菌的耐药性监测,对指导临床合理使用抗菌药物及减缓多重耐药菌株形成具有重要意义.

2724例O型孕妇产前IgG抗-A(B)效价与新生儿ABO溶血病发生的关系

目的研究血型为O型的孕妇产前IgG抗-A(B)效价,以预防新生儿溶血病的发生。方法采用抗人球蛋白法检测2 724例丈夫为非O型的O型孕妇IgG抗-A或抗-B效价,分娩时取脐静脉血进行红细胞4项试验:血型、直接抗人球蛋白试验、游离抗体检测、释放试验。结果 2 724份血清中IgG抗-A(B)效价≥1∶64者634例,异常检出率为23.27%;丈夫为A型、B型、AB型者,IgG抗-A(B)异常检出率分别为26.25%、19.98%、23.44%。当孕妇IgG抗-A(B)效价为64、128、256、≥512时,新生儿脐血血清学检验结果阳性率分别为8.00%、64.15%、100.00%、100.00%。结论孕妇IgG抗-A(B)效价与新生儿红细胞致敏呈正相关,是产前预测母子血型不合引起HDN的有效方法。及早发现,及时治疗,可减少由于母婴血型不合引起的溶血病。

犬急性心肌梗死模型制备的方法学研究

目的 建立一种急性心肌梗死病理模型的实验方法。方法 采用自制的微电流刺激仪刺激犬冠状动脉(冠脉 )血管外膜导致冠脉内急性血栓形成 ,并予生化和病理检测。结果 成功制备 10条犬急性心肌梗死模型 ,并经心肌酶学和病理检测证实。结论 本文所建立的实验方法是一种简便、安全和有效的方法。

人肺腺癌细胞总RNA电穿孔法转染的树突状细胞疫苗的体外抗肿瘤效应研究

目的探讨人肺腺癌细胞A549总RNA电穿孔法转染的树突状细胞(dendritic cell,DC)的特征及其特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)从血细胞分离机分离出的外周血采集物中诱导DCs产生,同时从人肺腺癌细胞A549中提取总RNA用以转染DCs,并用转染后的DCs与自体T细胞共同培养,诱导成为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)。实验分未转染DCs组,转染PBS的DCs组,转染RNA的DCs组,以流式细胞术(FCM)鉴定DCs、T细胞表型、RT-PCR证明总RNA转染效率,MTT检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平并比较各组差异。结果 1)RT-PCR证明电穿孔法可成功使A549的总RNA转染入DCs并可使DCs表达肿瘤抗原。2)RNA转染组的DCs表面标志物CD40、CD80、CCR-7、CD83、HLA-DR都呈强阳性表达,表达率明显高于PBS转染组DCs和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);3)流式结果显示RNA转染的DCs刺激后的T细胞表面标志物CD8比例明显上升;4)RNA转染组IL-12、IFN-γ分泌水平明显高于PBS转染组和未转染组(P<0.05);5)RNA转染组DCs可以有效刺激T淋巴细胞增殖,并且诱导肿瘤特异性CTLs产生,对A549细胞产生特异性杀伤作用。而PBS转染组与未转染组则无明显作用(P<0.05)。结论利用电转染法可成功将A549的总RNA转入DCs内并使其表达肿瘤抗原,在体外能诱导肿瘤特异性免疫反应。

原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态检测

目的研究原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态及其与原发性肝细胞癌发生发展的关系。方法用特异性甲基化PCR(MSP)法检测30例原发性肝细胞癌肿瘤组织和5例正常肝脏组织中p16、p15基因启动子区甲基化状态,并进行统计分析。结果30例原发性肝细胞癌肿瘤组织中p16和p15基因启动子区分别有53.3%(16/30,P<0.05)和46.7%(14/30,P>0.05)甲基化,5例正常组织中未发现甲基化。两基因甲基化与原发性肝细胞癌临床病理及HBsAg之间无明显相关性(P>0.05),两者在原发性肝细胞癌发生中有协同性(相关性和一致性)。结论p16、p15基因启动子区异常甲基化在原发性肝细胞癌中发生频率很高,可能对肝细胞癌发生发展起重要作用。

尿微量蛋白在诊断早期糖尿病肾病中的意义

目的：探讨尿微量蛋白在诊断早期糖尿病肾病中的意义。方法：应用免疫速率散射测浊法检测３４例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者尿转铁蛋白（ＴＲＦ）、白蛋白（ＡＬｂ）、免疫球蛋白（ＩｇＧ）、α１－微球蛋白（α１－Ｍ）及β２－微球蛋白（β２－Ｍ）。结果：与正常对照组比较，ＮＩＤＤＭ正常蛋白尿组ＴＲＦ含量明显升高（Ｐ＜０．０５），其余４种微量蛋白无统计学意义；微量蛋白尿组，ＴＲＦ、ＡＬｂ、α１－Ｍ含量显著升高（Ｐ＜０．０１），尿ＩｇＧ、β２－Ｍ明显升高（Ｐ＜０．０５）。结论：尿５种微量蛋白检测可作为诊断早期糖尿病肾病的参考标准，其中以ＴＲＦ最敏感。

转染A549细胞总RNA的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体外研究

目的探讨人肺腺癌细胞株A549总RNA转染的人树突状细胞(DCs)在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法利用密度梯度离心法从血细胞分离机新鲜采集的外周富集血中分离出单个核细胞(PBMCs),贴壁获得单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)进一步诱导为树突状细胞(DCs),同时利用提取的A549细胞总RNA转染DCs来制备疫苗,并与T细胞混合培养诱导扩增细胞毒性T淋巴细胞(CTLs);实验分为转染A549细胞总RNA的DC组、未转染DC组和转染空脂质体DC组,分别以流式细胞术(FCM)鉴定DCs表型、酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平、3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性并比较各组差异。结果1)转染总RNA组DCs表面CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表达较未转染组DCs和转染空脂质体组DCs均有升高,CD40在3组的表达率分别为(69.01±7.67)%、(19.28±3.51)%和(39.62±2.72)%;CD80在3组的表达率分别为:(74.39±6.46)%、(15.48±3.03)%和(25.70±2.92)%;CD83在3组的表达率分别为:(81.79±4.61)%、(13.29±2.34)%和(31.42±1.97)%;HLA-DR在3组的表达率分别为:(76.53±5.13)%、(49.23±4.05)%和(29.94±3.53)%,差异有统计学意义(P<0.05);2)转染总RNA组DCs的IL-12和IFN-γ分泌水平较未转染组及转染空脂质体组明显升高(P<0.05),3组IL-12分别为(543.24±68.33)、(77.11±27.65)和(167.78±31.84)pg/ml;3组IFN-γ分别为:(122.95±32.84)、(41.06±10.97)和(56.08±15.96)pg/ml;3)3H-TdR掺入试验所得的cpm,3组分别为(7437±720)、(3 807±476)和(4 543±719),阳性对照组为:16 739±91,差异有统计学意义(P<0.05);4)LDH释放法可见转染A549总RNA的DC组的特异性杀瘤活性(58.54±8.27)%,明显高于未转染组(36.03±4.03)%和转染空脂质体组(33.47±8.21)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论人肺腺癌细胞A549总RNA转染的DC疫苗体外诱导的特异性抗肿瘤免疫能力显著增强,有望为肺腺癌的治疗提供新的手段。

特发性血小板减少性紫癜与HPA等位基因相关性研究

目的探讨HPA-1—6、15等位基因与特发性血小板减少性紫癜(ITP)的相关性。方法采用聚合酶链反应序列特异性引物(PCR-SSP)法,对ITP组(n=25)和健康对照组(n=25)进行HPA-1—6、15共7个抗原系统基因分型,采用ELISA法和微柱凝胶法检测2组人群血小板吸附抗体及血小板游离抗体。结果ITP组HPA-3的基因频率明显异于对照组(P<0.01),其中HPA-3 a基因频率高于对照组,HPA-3b基因频率低于对照组,其余等位基因在2组间未发现有明显区别(P>0.05);ITP组血小板游离抗体检测到17例阳性(68%),吸附抗体检出21例(84%),对照组血小板抗体未检出。结论本次研究显示HPA-3抗原系统和ITP的发病可能存在一定的关联;血小板吸附抗体在ITP中检出率明显高于游离抗体。

448份血培养阳性标本需养菌分布及耐药性分析

目的了解本院2011～2013年血培养阳性标本细菌分布及耐药情况,指导临床合理运用抗菌药物。方法采用BACT/ALERT 3D全自动血培养仪对血培养标本进行检测,阳性标本分离菌株使用WalkAway40SI全自动微生物鉴定药敏分析仪进行鉴定和药敏实验。结果 7 210例血培养标本中共分离出448株病原菌,阳性率为6.21%,其中革兰阳性菌235株,占51.1%,以凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌为主,对万古霉素、利奈唑胺敏感性较好;革兰阴性菌197株,占44.0%,以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌为主,对亚胺培南、阿米卡星的敏感性较高,但鲍曼不动杆菌耐药菌较严重。结论本院血流感染病原菌种类较多,耐药率较高。及时了解血液感染细菌的分布特征和耐药性,对减少院内感染,指导临床合理、规范使用抗菌药物具有重要意义。

不同指标在糖尿病早期肾功能损害检测中的应用评价

目的：探讨当糖化血红蛋白（HbA1c）异常时,各常规检测指标对糖尿病早期肾功能损害检测的敏感性和特异性.方法：按尿蛋白定性阴性、微量~1＋、2＋~3＋分为A组、B组和C组,另选取30名体检健康者为对照组;尿中五种蛋白（IgG、TRF、mALB、α1-m、β2-m）测定采用免疫散射比浊法、血清Cys]C采用循环酶法、BUN采用酶法、Cr采用苦味酸电极法检测.结果：A、B、C组中各检测指标阳性结果总体有差异（P〈0.01）,A组患者尿IgG、TRF、mALB、β2-m和mALB/Cr阳性率均低于B组和C组（P〈0.05）,而α1-m、CyshC、BUN、Cr阳性率均低于C组（P〈0.05～P〈0.01）;B组和C组各指标阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）;糖尿病组与对照组比较各检测指标阳性率差异有统计学意义（P〈0.01）,与对照组比较,糖尿病尿蛋白定性阴性组尿IgG、TRF、β2-m、mALB、mALB/Cr均有较高的阳性率（P〈0.05）.结论：当HbA1c阳性而蛋白定性阴性时,相对于其他检测指标,IgG、TRF、mALB、B2-m、mALB/Cr对糖尿病早期肾功能损害检出更为敏感、特异,单独及联合检测均能有效筛查糖尿病早期肾功能损害.

血清IGF-I和IGFPB-3检测在不同类型脑肿瘤中的应用

目的探讨血清胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFPB-3)表达水平检测在脑肿瘤中的应用价值。方法采用化学发光法检测几种脑肿瘤患者血清IGF-I和IGFPB-3水平,其中脑膜瘤16例、胶质瘤13例、GH分泌型脑垂体瘤32例、非GH分泌型脑垂体瘤40例和30例健康对照者。结果脑膜瘤组和GH分泌型脑垂体瘤组IGF-I和IGFPB-3血清水平均高于健康对照组(均P<0.05);GH分泌型脑垂体瘤组IGF-I和IGFPB-3血清水平均高于非GH分泌型脑垂体瘤;GH分泌型脑垂体瘤血清IGF-I水平以术前高于术后(均P<0.05)。结论 IGF-I和IGFPB-3在许多脑肿瘤患者血清中表达水平升高,可辅助诊断某些脑部肿瘤;IGF-I、IGFPB-3在分泌型和非分泌型脑垂体瘤中的表达有明显差异,因此可以鉴别诊断脑垂体瘤的类型;分泌型脑垂体瘤术前IGF-I和IGFPB-3明显高于术后,可以通过监测其术后下降速度和程度来判断手术效果及患者恢复情况。