1株罗汉杉内生放线菌的鉴定、活性分析及抗生素生物合成基因的筛查

对1株从罗汉杉分离的内生放线菌LCB-0297进行系统学鉴定,在ISP3培养基上其气生菌丝灰烬色,有粉褐色可溶性色素,电镜观察孢子丝呈螺旋状,孢子椭球形表面多刺,通过其形态、生理生化特征初步确定为链霉菌。16S rRNA基因序列分析显示,放线菌LCB-0297与Streptomyces lanatus NBRC 12787(T)最为相似,相似性为98.531%,但在N-J树上仍在较远的2个分支上,确定为Streptomyces sp.。通过滤纸片法、SRB法进行抑菌、细胞毒活性检测,显示出较强的抑菌及抗癌活性。用PCR的方法对其多种抗生素生物合成基因进行筛查,该菌株含有Ⅰ型聚酮合成酶(PKS-Ⅰ)、非核糖体多肽合成酶(NRPS)、Ⅱ型聚酮合成酶(PKS-Ⅱ)的基因,含有多种潜在的抗生素合成基因。

虎杖内生真菌的分离及对白藜芦醇的生物转化

目的:对虎杖茎部分离的内生真菌进行纯化鉴定,并以白藜芦醇为底物进行生物转化的初步研究。方法:采用表明消毒法分离虎杖内生真菌,对分离菌株进行分子鉴定并作系统发育分析;采用摇瓶发酵进行生物转化,并利用薄层层析和高效液相色谱(HPLC)方法进行转化结果分析。结果:共研究31株内生真菌,经排重后,得到24株真菌(编号CB37-CB60)。经ITS部分序列测定后,得到属于6个目:Eurotiales、Pleosporales、Mucorales、Hypocreales、Capnodiales和Agaricales;9个属:Penicillium、Tremato-sphaeria、Aspergillus、Cunninghamella、Trichoderma、Fusarium、Cladosporium、Paecilomyces和Termitomyces。对分离出的24株真菌进行白藜芦醇生物转化研究,得到CB41、CB48两株具有转化活性的真菌。结论:从虎杖茎部分离提纯的内生真菌在分类上具有多样性,对白藜芦醇的生物转化具有良好前景。

一株10-羟基喜树碱转化内生菌的筛选及鉴定

目的:利用从喜树中分离的内生真菌将喜树碱转化为10-羟基喜树碱。方法:采用摇瓶发酵进行生物转化,并利用薄层层析和高效液相色谱(HPLC)方法进行转化结果分析。通过内生真菌ITS区扩增,测序及系统进化分析等方法对菌种进行鉴定。结果:得到1株能将喜树碱转化为10-羟基喜树碱的菌株,结果显示该菌种为青霉菌属,转化率为7.37%。结论:微生物转化可作为化合物结构修饰以及得到目标化合物的重要手段。

一株产Pseurotin A的虎杖内生真菌CB50及其活性研究

目的:对分离自虎杖茎部的内生真菌进行鉴定,并对其发酵物进行化学成分的分离、结构鉴定及活性研究。方法:将CB50进行ITS序列鉴定,并将其发酵产物进行分离,对分离出的化合物1通过1H-NMR、13C-NMR、DEPT-90、DEPT-135、HMBC和HMQC鉴定。并对化合物1进行抗菌和抗肿瘤活性实验。结果:CB50被鉴定为Penicillium brevicompactum。化合物1为Pseurotin A。Pseurotin A生物活性研究结果如下:抗菌实验结果显示Pseurotin A对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)具有较强的抑制作用;抗肿瘤活性测试结果显示Pseurotin A对人肺癌细胞株A549有一定的抑制作用。结论:首次从虎杖内生真菌中分离得到PseurontinA,并证明其具有明显的抗肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)活性和抗人肺癌细胞株A549活性,菌株经鉴定为Penicillium brevicompactum。

一株皱叶南蛇藤内生放线菌的分离、鉴定及活性研究

目的:分离具有抗肿瘤作用与抗菌作用的内生放线菌,并对其进行分子鉴定和系统发育分析。方法:从皱叶南蛇藤中分离内生放线菌,通过滤纸片法和SRB法对其进行抗菌活性和抗肿瘤活性筛选,然后利用菌株形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析对活性菌株进行鉴定。结果:从皱叶南蛇藤中分离到10株内生放线菌,其中内生放线菌LCB369具有较好的抗菌活性和抗肿瘤活性,该菌对5种致病菌和肝癌细胞株HepG2均有抑制作用。经分子分类学分析鉴定,该菌与Strep-tomyces microflavus在同一个分支上,同源性为99%。结论:皱叶南蛇藤内生菌LCB369具有明显抗菌和抗肿瘤作用,经鉴定为链霉菌Streptomyces microflavus。