壳聚糖/海藻酸钠水凝胶顺序释放BMP/WNT信号通路激活剂促成骨细胞分化的体外实验研究

目的:通过组织工程策略构建顺序释放骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)和WNT信号通路激活剂的双层复合材料,并研究其在体外对成骨细胞分化的作用。方法:用CCK-8法、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法和茜素红染色法分别检测BMP信号通路激活剂他克莫司(tacrolimus,FK506)和WNT信号通路激活剂6-溴靛玉红-3-肟(6-bromoindirubin-3-oxim,BIO)对前成骨细胞系MC3T3-E1增殖活性和成骨向分化的影响,筛选出最合适的药物浓度;制备壳聚糖/海藻酸钠支架材料,采用称量法测定材料的降解曲线,制备内层壳聚糖载BIO、外层海藻酸钠载FK506的支架材料,采用紫外分光光度计测定药物的释放;制备内外单载不同药物的支架材料,用ALP染色法和茜素红染色法检测载药复合材料对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨向分化的作用,应用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测载药支架材料对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨相关基因表达的影响。结果:在适宜范围内,FK506处理的细胞早期ALP活性较BIO处理的细胞更强,且FK506促进ALP活性最适合的质量浓度为2.0μg/mL;茜素红染色结果表明,BIO在0.1μmol/L时,细胞表现出更强的钙结节形成能力。支架材料缓慢稳定降解至第35天,期间FK506和BIO顺序释放,药物在14 d内基本释放完毕。应用载药材料浸提液ALP染色的支架材料和茜素红染色结果显示,内载BIO外载FK506的实验组相比较于其他组表现出更强的成骨向分化能力;RT-qPCR结果显示,内载BIO外载FK506的支架材料能够显著促进成骨相关基因Runx2和OCN的表达。结论:以壳聚糖/海藻酸钠为支架材料,内层壳聚糖载WNT信号通路激活剂BIO,外层海藻酸钠载BMP信号通路激活剂FK506,两者顺序释放,即先激活BMP信号通路,后激活WNT信号通路,能够在体外促进MC3T3-E1细胞的成骨向分化,为临床治疗骨缺损,促进骨再生提供新思路。

颏下岛状瓣在口腔颌面部恶性肿瘤切除术后修复中的应用

目的:探讨颏下岛状瓣(submental artery island flap,SIF)在修复口腔及颌面部恶性肿瘤术后缺损中的临床应用价值。方法:回顾性地分析了2017年6月—2020年6月,我科颌面部恶性肿瘤手术切除后同期行颏下岛状瓣修复的患者资料,并以同期行血管化游离股前外侧肌皮瓣修复的患者作为对照组,两组共30例。使用SPSS 19.0软件包进行统计分析。结果:使用颏下岛状瓣修复口腔颌面部恶性肿瘤术后缺损共11例,皮瓣均完全成活,皮瓣大小在3 cm×4 cm~4 cm×10 cm。无论是T2期肿瘤还是T3期肿瘤切除后的缺损,颏下岛状瓣的手术时间和术后恢复时间均明显小于血管化游离股前外侧肌皮瓣(P<0.05)。结论:颏下岛状瓣小巧灵活,制作简便,无须血管吻合及开辟远位供区,可以缩短手术时间及术后恢复时间,且术后瘢痕隐蔽。适用于修复恶性肿瘤切除术后面中下2/3的中小型缺损,但要选择合适的手术适应证。

活化素Ⅰ型受体对小鼠下颌骨髁突软骨生长发育的影响及其机制

目的:观察Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素Ⅰ型受体(ACVR1)对出生后小鼠下颌骨髁突软骨(MCC)细胞形态、增殖和分化的影响,为研究MCC相关性疾病的病因及治疗提供参考。方法:采用Cre-LoxP系统构建在C57BL/6J小鼠MCC细胞中条件性敲除ACVR1基因的动物模型。将基因型为Acvr1fx/fx;RS/RS和Acvr1+/-;Osterix(+)/(-)的雌性和雄性小鼠配对合笼,以子代Osterix-Cre(+);Acvr1fx/-;RS/+基因型小鼠为实验组,Osterix-Cre(+);Acvr1fx/+;RS/+小鼠为对照组。分别取新出生(n=3)、出生后21天(PN21)(n=4)和出生后42天(PN42)(n=5)雄性小鼠,X-gal染色检测MCC组织中Osterix-Cre表达,micro-CT法检测2组小鼠下颌骨髁突宽度和髁头长度,HE染色和甲苯胺蓝染色分析2组小鼠MCC细胞形态及各层软骨厚度,免疫组织化学(IHC)染色检测2组小鼠MCC组织中增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数和Ⅹ型胶原水平。结果:X-gal染色和IHC染色,ACVR1条件性基因缺失小鼠模型构建成功。在PN21时,与对照组比较,实验组小鼠下颌骨髁突宽度和髁头长度明显变短(P<0.05);2组小鼠MCC细胞形态表现和结构无明显差异。与对照组比较,实验组小鼠肥大软骨细胞层(Hy)和成软骨细胞层(Ch)这2层及Hy单层MCC组织中PCNA阳性细胞数明显增多(P<0.05或P<0.01)。在PN42时,与对照组比较,实验组小鼠部分下颌骨髁突软骨细胞形态异常,部分髁突肥大软骨细胞的排列紊乱,实验组小鼠髁突软骨前1/3区的Hy和中1/3区除Hy以外的其他层细胞厚度明显增大(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,实验组小鼠MCC组织各层PCNA阳性细胞数和Ch中Ⅹ型胶原水平明显升高。结论:ACVR1通过抑制MCC细胞增殖和成软骨细胞向肥大软骨细胞的分化,从而影响MCC细胞形态及MCC组织结构。

诱导大鼠脂肪来源干细胞向腺泡样细胞转化的实验研究

目的:研究脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在下颌下腺细胞submandubular gland cells,SMGCs)裂解液模拟的微环境下能否转化为具有分泌功能的腺泡样细胞。方法:提取,培养大鼠的ADSCs并鉴定,用下颌下腺细胞裂解液诱导其分化,观察其形态变化以及是否表达SMGCs的α-Amylase抗体及上皮细胞来源的Cytokeratin-8抗体,并用淀粉酶检测试剂盒检测诱导不同时间细胞上清液内淀粉酶的含量,分析转化效率。结果:自大鼠脂肪组织提取的细胞具有多向分化的能力,证实其为脂肪来源干细胞,经下颌下腺细胞裂解液诱导后,α-Amylase抗体及Cytokeratin-8抗体表达阳性,而对照组为阴性,证实其成功转化为腺泡样细胞,随着时间增加细胞上清液内淀粉酶含量逐渐增加,说明其诱导效率随着时间增长而逐渐增高。结论:脂肪来源干细胞可以转化为具有分泌,α-Amylase功能的腺泡样细胞,随着时间增长其转化效率逐渐提高。

活化蛋白A受体1在成牙本质细胞极化和牙本质形成中的作用

目的:研究活化蛋白A受体1(ACVR1)对成牙本质细胞极化及牙本质形成的影响。方法:以Cre-LoxP系统建立牙源性间充质特异性Acvr1基因敲除小鼠模型,取"Osterix-Cre;Acvr1 fx/-基因型小鼠"为实验组,同窝"Osterix-Cre;Acvr1 fx/+基因型小鼠"为对照组。取新生小鼠,通过HE染色观察小鼠下颌切牙的牙本质形成和成牙本质细胞形态;天狼星红染色观察下颌切牙的牙本质胶原排列;免疫荧光染色检测高尔基体(GM130)在下颌切牙成牙本质细胞中的定位。结果:HE染色结果显示,与对照组相比,实验组小鼠下颌切牙有牙本质形成缺陷,牙尖处可见骨样牙本质;从颈环至牙尖,成牙本质细胞形态由多角形变为高柱状,又变为多角形,极性从无到有,再逐渐消失,最终牙尖处部分细胞极性完全丧失。天狼星红染色结果显示实验组小鼠切牙的牙尖处胶原排列紊乱。GM130免疫荧光染色结果显示实验组小鼠切牙的近牙尖处成牙本质细胞中,高尔基体-细胞核相对位置发生变化。结论:Ⅰ型BMP受体ACVR1可维持成牙本质细胞极性并促进牙本质的有序形成,在调控牙本质形成中具有重要作用。

ECRG4在口腔鳞癌中的表达及其临床意义

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是口腔颌面部最常见恶性肿瘤,约占头颈部恶性肿瘤80%以上,本研究通过免疫组织化学技术检测食道癌相关基因4(ECRG4)在口腔鳞癌中的表达情况,分析其与口腔鳞癌病理分型的关系。