用于多重免疫荧光染色的小鼠肺组织冰冻切片制备方法优化研究

目的优化小鼠肺组织冰冻切片制作方法,提高肺组织冰冻切片质量,有利于提高免疫荧光染色的特异性,获得更准确可靠的实验结果。方法使用C57BL/6小鼠,分别采用传统冷冻后固定法、冷冻前固定法、改良灌注冷冻前固定法3种方法制作冰冻切片,经免疫荧光染色后使用激光扫描共聚焦荧光显微镜观察肺组织染色情况。使用荧光显微镜对肺组织切片进行全片扫描,计算单位面积内完整气道数量。结果传统冷冻后固定法制作的小鼠肺组织冰冻切片,肺泡结构破坏,气道壁断裂严重,存在非特异性染色;冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片,肺泡和气道结构相对完整,但肺泡塌陷,部分气道结构破坏;改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织切片,肺泡和气道结构形态均完整、清晰,多重免疫荧光染色定位准确。改良灌注冷冻前固定法制作的小鼠肺组织冰冻切片单位面积内完整气道(直径≥100μm)数量高于冷冻前固定法((0.66±0.15)/mm^(2) vs(0.33±0.14)/mm^(2),P<0.05),也显著高于传统冷冻后固定法((0.66±0.15)/mm^(2) vs(0.02±0.04)/mm^(2),P<0.01)。结论使用改良灌注冷冻前固定法制作冰冻切片,利于保持小鼠肺组织形态完整,利于获得高质量的多重免疫荧光染色结果。

干扰素诱导蛋白Nmi与人巨细胞病毒皮层蛋白UL23相互作用区域的研究

目的:探究干扰素诱导蛋白N-Myc相互作用因子(Nmi)与人巨细胞病毒(HCMV)皮层蛋白UL23相互作用的关键区域。方法:根据前期实验结果,分别将10个不同截短突变型的Nmi构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,表达并纯化出带有GST标签的融合蛋白,利用GST-pulldown的方法探究Nmi与UL23相互作用的区域。根据GST-Pulldown实验结果,用同源重组的方法在真核表达载体pc DNA4-Myc上分别构建3个缺失突变型Nmi。将实验组和对照组的Nmi分别与含有Flag标签的UL23质粒共转染至He La细胞中,通过免疫共沉淀法进一步研究Nmi与UL23的相互作用区域。结果:(1)10个截短突变型Nmi与GST基因融合的原核表达载体构建成功;(2)3个缺失突变型Nmi与Myc基因融合的真核表达载体构建成功;(3)GST-pulldown实验证明Nmi与UL23相互作用位点位于Nmi上的第192~202位氨基酸区域;(4)免疫共沉淀法确认Nmi的第192~202位氨基酸区域是与UL23相互作用的区域,与GST-pulldown实验结果一致。结论:Nmi与UL23相互作用的区域位于Nmi上第192~202位氨基酸区域。这为阐明UL23帮助HCMV在宿主体内潜伏的分子机理提供了基础。

4株栽培用金针菇部分生物学特性分析

利用拮抗试验研究4个金针菇菌株间的亲缘关系.然后进行4个金针菇菌株生化性能测定,分别以PDA(不加葡萄糖)培养基、羧甲基纤维素钠培养基、愈创木酚培养基培养4个菌株,判断金针菇利用营养物的能力大小.试验结果:4个菌株间存在不同程度的拮抗现象,表明其亲缘关系有一定的远近,尤其是川金10#与金野菌株间拮抗线最明显,亲缘关系较远;生理性能测试中,不同菌株产酶能力不同,各有其优势,川金3#产淀粉酶能力最强,金野产漆酶能力最强,综合4个菌株产淀粉酶、纤维素酶、漆酶能力温金F11性能最为稳定,三种酶活性较强.

工厂化栽培杏鲍菇配方筛选

设计了7个杏鲍菇栽培配方,统计分析了各个配方的生物转化率、生产周期和产投比以及对于菌丝长势、长速的影响,结果表明:配方⑥的生物转化率最高,达到79.67%,同时产投比最高,达到1.51;配方⑦菌丝长势最好;配方②菌丝长速最快。综合结果,配方⑥为试验最佳配方。

杏鲍菇工厂化栽培关键技术

四川南充绿宝菌业科技有限公司从事食用菌生产已有10多年,进行人工气候调控的工厂化生产长达七年,栽培主要品种为杏鲍菇。最初由于杏鲍菇栽培技术不够成熟,导致成本较高、生产周期长、感染率高、畸形菇多,经过最近几年来不断努力摸索,杏鲍菇栽培技术已成熟,栽培出高产优质杏鲍菇。现总结如下,为广大杏鲍菇栽培者提供参考。

医学本科生

四川大学华西医院呼吸病学研究室从加强入室医学本科生实验室安全和科研诚信教育、开展专项实验技能培训、增进项目组和实验室的沟通交流、促进实验室与学术型社团合作等方面入手,采用项目分级管理新模式,对进实验室的"大创"项目进行动态评估和监管。通过新的管理模式实施前后的对比发现,申请获得的项目数量增加16.7%,项目产出的论文数量增长6.5倍,论文质量也显著提升。