microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

目的研究micro RNA-126(mi R-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达mi R-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证mi R-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果与对照组相比,转染mi R-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达mi R-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,mi R-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论过表达mi R-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。

白细胞介素-4调控糖代谢相关基因LDH-A诱导前列腺癌细胞PC3的增殖

目的:研究白细胞介素-4(IL-4)对前列腺癌细胞糖代谢和细胞增殖的影响。方法:IL-4处理前列腺癌细胞PC3,利用RT-q PCR、Western Blot、细胞增殖实验(CCK-8)以及乳酸测定实验,观察IL-4对乳酸脱氢酶A(LDH-A)的变化和细胞增殖的影响。结果:经过IL-4处理的前列腺癌细胞PC3,LDH-A的m RNA表达量(P<0.05)、蛋白表达量(P<0.05)明显升高,并促进PC3细胞的增殖(P<0.01)和乳酸产生(P<0.01)。结论:IL-4影响前列腺癌细胞的糖代谢,上调糖代谢相关基因LDH-A的表达,从而促进前列腺癌细胞的增殖。

钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶激酶2在前列腺癌及癌旁组织中的表达及其临床意义

目的研究CAMKK2在前列腺癌及癌旁组织中的表达,分析其表达与临床病理数据的关系。方法通过实时荧光定量PCR技术检测CAMKK2的mRNA水平在前列腺癌及癌旁组织中的表达情况,通过免疫印迹及免疫组化技术检测CAMKK2的蛋白水平在两种组织中的表达,分析CAMKK2的表达水平与前列腺癌相关临床病理特征及预后的关系。结果前列腺癌组织中的CAMKK2在mRNA及蛋白水平上均较癌旁组织中上调表达,CAMKK2的表达与血清PSA水平、是否转移及是否生化复发有关,CAMKK2的表达高低与无生化复发生存率相关,CAMKK2是生化复发的独立危险预测因素。结论 CAMKK2在前列腺癌组织中的表达增加,可能提示患者的预后情况,并可作为前列腺癌新的生物标记物。

IMPDH2蛋白与前列腺癌临床相关性分析

目的研究IMPDH2在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,并分析其表达水平与临床病理特征的关系。方法收集临床手术切除的前列腺癌组织和前列腺增生,或者穿刺活检组织,所有组织均由病理学确诊。排除已做手术去势的前列腺组织。通过Western Blot检测IMPDH2在前列腺癌、前列腺增生组织中IMPDH2蛋白的表达情况;免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生标本中IMPDH2的表达。分析IMPDH2基因的表达水平与临床病理特征的关系。结果前列腺癌患者组织中IMPDH2蛋白表达显著上调,IMPDH2蛋白表达上调与肿瘤临床分期、Gleason评分、转移相关。结论 IMPDH2在前列腺癌组织中表达上调,前列腺组织中检测IMPDH2可能有助于判断前列腺癌分化程度并评估预后。

基于生物信息学分析通用转录因子IIH对前列腺癌预后的影响

目的探讨转录起始前复合物中通用转录因子IIH(TFIIH)在前列腺癌(PCa)中的遗传、表达特征及其与PCa预后的关系。方法通过分析癌症基因图谱-PCa数据库(TCGA-PRAD)中495例PCa组织及52例癌旁组织TFIIH亚基的表达特征及临床意义。再通过PCa微阵列芯片验证TFIIH中的关键因子通用转录因子IIH亚基4(GTF2H4)与临床特征[病理分期、生化复发(BCR)以及格里森评分]的相关性。结果495例PCa患者年龄为(61.01±6.82)岁。ERCC3、GTF2H4、MNAT1在格里森评分≥8的PCa组织中mRNA表达量较高(P<0.05)。GTF2H4、MNAT1的表达量与病理分期相关(P<0.05)。高表达GTF2H4的PCa患者的BCR率较高(HR=2.47,95%CI:1.62~3.77,P<0.001),同时其对PCa患者BCR预测效果在各亚基中最好[3、5、7年受试者工作特征曲线下面积(AUC)均>0.7],并在额外4个数据库中得到验证。480例PCa样本中,9例发生了TFIIH亚基的突变,占比1.87%。其中3例为ERCC2亚基突变,2例为GTF2H3亚基突变,GTF2H1、GTF2H4、CCNH、CDK7亚基突变各1例。单因素Cox回归分析显示GTF2H4为BCR的危险因素(HR=2.470,95%CI:1.620~3.767,P<0.001),GTF2H5为保护因素(HR=0.506,95%CI:0.336~0.762,P=0.001)。免疫组织化学染色评分结果显示GTF2H4的蛋白表达量与患者临床特征相关,差异均有统计学意义。结论TFIIH中的关键因子GTF2H4在PCa中高表达并提示预后欠佳。

微小RNA-126对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭及转移的影响

目的 观察转染微小RNA（miRNA,miR）-126对肝癌细胞生物学行为的影响.方法 通过构建稳定miR-126高表达肝癌细胞株Hep-G2,应用细胞计数试剂盒（CCK-8）法、划痕实验、流式细胞术和Transwell小室检测细胞增殖、迁移、凋亡及细胞周期分布和侵袭能力,建立裸鼠皮下成瘤模型并观察miR-126对肿瘤生长的影响.结果 Hep-G2在miR-126表达升高后,48 h后细胞吸光度值、迁移和侵袭能力（0.783 8±0.050 5、158.1±32.9、45.219±3.687）与空载体对照组（1.121 1 ±0.0637、258.2±51.5、80.387±5.641）比较相对减弱（P＜0.05）,凋亡率（18.621±0.852）％比对照组（5.325 ±0.239）％升高（P＜0.05）,细胞周期出现S期阻滞.裸鼠皮下成瘤模型中,实验组裸鼠瘤体质量及体积明显减小（P＜0.05）.结论 上调miR-126表达可明显抑制肝癌细胞株Hep-G2的增殖、迁移、侵袭能力,促进其凋亡,并且抑制裸鼠皮下成瘤模型肿瘤的生长.

趋化因子CCL18对前列腺癌细胞迁移力、侵袭力和细胞增殖影响的研究

目的研究趋化因子CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力和细胞增殖的影响。方法通过培养前列腺肿瘤细胞LNCa P、DU145,并加入趋化因子蛋白CCL18,利用Transwell实验、Wound Healing实验和CCK8试剂盒来分别检测CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力及对细胞增殖的影响。结果经过趋化因子蛋白CCL18处理的前列腺肿瘤细胞,在Transwell实验中,肿瘤细胞跨膜细胞数显著增加(LNCa P:对照vs.CCL18=202.0±18.5 vs.279.7±27.6;DU145:对照vs.CCL18=60.3±6.5 vs.91.0±9.5);Wound Healing实验中,肿瘤细胞发生迁移的数量明显增加(LNCa P:对照vs.CCL18=127.3±14.3 vs.214.4±30.9;DU145:对照vs.CCL18=68.6±15.8 vs.129.4±12.0);细胞生长实验结果揭示肿瘤细胞增殖速度也显著加快。结论趋化因子蛋白CCL18能促进前列腺肿瘤细胞LNCa P、DU145的侵袭力、转移力,并加快前列腺肿瘤细胞的生长速度。

锌指含髓样神经变形表皮生长因子结构域第8亚型作为糖皮质激素受体下游基因在前列腺癌组织的表达及临床意义

目的 验证锌指含髓样神经变形表皮生长因子结构域第8亚型（ZMYND8）与糖皮质激素受体（GR）之间调控关系,探讨ZMYND8表达量与前列腺癌各临床病理特征之间的关系.方法通过软件预测及在敲除GR基因的前列腺癌细胞PC3中用Western blot实验方法检测ZMYND8表达量,分析GR与ZMYND8之间的关系,并在80例前列腺癌及非癌组织的组织芯片中使用免疫组织化学的方法,对ZMYND8蛋白表达量与前列腺癌各病理特征之间的关系进行分析.结果 ZMYND8 基因受GR基因调控,ZMYND8在癌组织及转移癌中表达上调（免疫组织化学评分：非癌组织为5.700±2.054,癌组织为7.340±2.163,P=0.001,转移癌组织为6.710±2.369,非转移癌组织为8.110±1.595,P=0.028）,差异有统计学意义.结论 ZMYND8的表达受上游基因GR的调控,ZMYND8基因在前列腺癌临床上表现为促癌基因.

基于CRISPR/Cas9的雄激素受体基因敲除的实验研究

目的探讨细胞水平的雄激素受体（AR）基因敲除方法，为前列腺疾病AR通路的功能研究提供细胞株材料。方法通过在线软件设计针对AR的sgRNA靶向序列，将设计好的sgRNA靶序列克隆到PX330载体中并测序验证。将克隆好的CRISPR-AR载体转染T293细胞，提取DNA，PCR产物酶切和测序鉴定基因敲除效率。结果 CRISPR-AR载体测序证明质粒载体构建成功，293T细胞转染和酶切鉴定实验证明CRISPR-AR载体具有95.3%的敲除效率。结论基于CRISPR/Cas9技术构建的CRISPR-AR载体可用于细胞的AR基因敲除，可进一步构建AR基因敲除的细胞株。

应关注前列腺癌基础研究的转化应用

前列腺癌一直是严重威胁男性人群健康的主要公共卫生问题之一。临床上始终面临着何如针对个体化患者进行合适筛查和治疗的困难。此外,随着精准医疗和过度治疗概念的提出,前列腺癌不同阶段的治疗方案也需要改变,局限性前列腺癌患者更有可能获得改善和延长寿命的机会。近几十年来前列腺癌基础研究不断取得重要突破,相关分子机制也在深入挖掘,随之研究成果的积累越来越多,未来应如何促进基础研究对前列腺癌临床诊治的转化应用,为此展开评述。

双特异性磷酸酶5基因在良性前列腺增生症与前列腺癌中的表达及临床意义

目的前期研究发现双特异性磷酸酶5(DUSP5)基因在良性前列腺组织和前列腺癌组织中存在差异性表达,但DUSP5基因的表达与前列腺癌疾病的临床病理相关性尚无统计研究。本次研究检测DUSP5在良性前列腺增生和前列腺癌中的表达,分析其表达水平与临床病理特征的关系。方法通过RT-qPCR检测DUSP5在前列腺癌、前列腺增生组织中DUSP5基因的表达情况;免疫组化检测前列腺癌、前列腺增生标本中DUSP5蛋白的表达。分析DUSP5的表达水平与临床病理特征的关系。结果前列腺癌患者组织中DUSP5基因表达显著下调,DUSP5蛋白表达下调与肿瘤临床分期(≤T2期vs.>T2期:6.43±0.96 vs.5.10±0.70,P<0.01)、Gleason评分(GS<7 vs.GS≥7:6.37±0.78 vs.5.04±0.57,P<0.01)显著相关。结论 DUSP5蛋白在前列腺癌组织中表达下调,检测DUSP5表达水平可协助判断前列腺癌分化程度并评估预后。

GPER的激活调控自噬抑制前列腺上皮细胞增殖

目的 探讨G蛋白耦联雌激素受体(GPER)对正常前列腺上皮细胞增殖及自噬的影响。 方法 利用CCK8,观察雌二醇、G1对两种前列腺上皮细胞BPH-1及RWPE-1增殖的影响,通过Western印迹、CYTO-ID自噬检测试剂检测加入雌二醇、G1及同时加入G1及G15对前列腺上皮细胞的自噬活动的作用。 结果 加入雌二醇、G1后24 h开始,雌二醇组及G1组的吸光度(A)值均低于空白对照组(P<0.01);显示雌二醇及G1对BPH-1及RWPE-1细胞处理有抑制作用,且随时间延长,抑制效应增加。雌二醇组及G1组中的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及CytoID绿色荧光强度均较空白对照组低(P<0.01),G1+G15组较G1组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及CytoID绿色荧光强度高(P<0.05)。 结论 GPER的激活可抑制细胞的自噬及增殖。

代谢重编程:前列腺癌诊疗方向的新思考

代谢重编程是肿瘤的一项新特征,肿瘤细胞大幅度改变代谢方式并且更高效地产能和进行各种生物合成以支持其失控生长。随着对肿瘤代谢重编程的深入研究,分析肿瘤的主要代谢特征以及识别癌基因和代谢重编程之间的联系,有望成为发掘诊断生物标记物的新手段。本文基于前列腺癌的代谢特征,分析讨论前列腺癌中糖、脂质以及氨基酸的异常代谢参与肿瘤发生发展的研究进展,并就其研究现状和潜在应用价值展开评述。

第五尤文转录因子在前列腺癌中的功能研究

目的通过转录组学及生物信息学分析的方法,探讨第五尤文转录因子(FEV Transcription Factor,FEV)在前列腺癌的功能。方法构建外源性过表达FEV的人前列腺癌PC-3(PC3)细胞株,并进行转录组学测序,其后在这基础上描绘基因表达热图、构建FEV共表达差异基因网络。并在对该共表达差异基因群进行基因本论富集分析及功能互作网络分析。最后通过美国肿瘤基因数据图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)资料进行相关性分析。采用t检验分析两组定量资料的统计学意义,采用χ2检验对定性数据进行分析。结果在外源性过表达FEV后,发现86个基因表达上调,73个基因表达下调。结合FEV相关的基因共表达网络,得出49个差异共表达基因。该基因群参与了血管新生、细胞增殖与迁移、脂肪酸合成与代谢的相关通路。其中碱性成纤维细胞生长因子2(FGF2)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、突触小泡磷酸酶2结合蛋白(SYNJ2BP)、同源盒基因3(HOXB3)、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗体及其相应的相互作用对象磷酸肌苷-3激酶调节亚基2(PIK3R2)、磷酸二酯酶4D(PDE4D)、激活素A受体ⅡB(ACVR2B)共同参与血管新生和细胞迁移相关通路。并发现在TCGA数据库中这8个基因中HOXB3与FEV呈负相关(r=-0.206),PDE4D与FEV呈正相关(r=0.191)。结论在前列腺癌中,FEV基因可能通过影响HOXB3和PDE4D的表达,影响肿瘤血管新生和细胞迁移相关通路激活水平,从而抑制前列腺癌进展。