金属有机纳米粒的制备及其在高强度聚焦超声治疗小鼠肝癌中的增效作用

目的制备一种金属有机纳米粒,并探究其在高强度聚焦超声(HIFU)治疗肿瘤中的增效作用。方法制备二氧化锰(MnO_(2))纳米粒,利用物理吸附法将葡萄糖氧化酶(GOD)、MnO_(2)、三价铁离子(Fe^(3+))与抗癌药物阿霉素(DOX)自组装形成GODMnO_(2)-Fe^(3+)-DOX纳米粒(GMFD NPs)并进行表征。建立HepG2肝癌细胞荷瘤裸鼠模型,随机分为生理盐水+HIFU和GMFD NPs+HIFU组。HIFU治疗声功率为90W,治疗总时间为3 s。观察HIFU辐照前后肿瘤灰度值变化。HIFU辐照结束24 h后观察肿瘤组织凝固性坏死情况,收集肿瘤组织,苏木精-伊红染色法(HE染色)观察各组织的形态结构变化。结果成功制备GMFD NPs,其粒径为131.23±0.84 nm,表面电位为+21.87±1.72 mV。其中DOX的载药率为40.18%,在酸性环境中,DOX在4 h内释放的药物超过77.2%。体内动物实验结果表明HIFU辐照后,GMFD NPs组灰度增强(25.5±4.50)明显高于生理盐水组(18.7±3.85),差异具有统计学意义(P=0.04)、凝固性坏死体积GMFD NPs组(105.80±1.21 mm^(3))明显大于生理盐水组(38.02±0.34 mm^(3))、能效因子(EEF)GMFD NPs组(1.79)明显低于生理盐水组(4.97),差异具有统计学意义(P<0.001)。结论制备的GMFD NPs可增强HIFU对瘤鼠肿瘤组织的消融效果并释放抗癌药物DOX以治疗残留的肿瘤组织。

不同浓度白色念珠菌连续培养对比观察

目的通过对比观察白色念珠菌(白念珠菌)在LB营养琼脂培养平板上不同浓度的生长情况,探讨白念珠菌平板稀释法计数的适宜观察浓度。方法将白念珠菌原液稀释至约1.5×109 cfu/m L,编号为A。然后取7个20 m L的无菌试管,每个试管加入9 m L无菌生理盐水,分别编号为B^H。从A试管中吸取1 m L菌液至B管,混匀后再吸取1 m L至C管,如此连续倍比稀释至H管。用移液枪吸取100μL不同浓度的白念珠菌悬液到对应编号的一次性琼脂培养平板,用接种环涂抹均匀,置于37℃孵箱内培养。结果培养48 h后,浓度数量级为104的白念珠菌较浓度数量级为102、103菌体密集且体积小,而105较104更密集、体积更小,呈针尖状,肉眼不易观察具体形态。白念珠菌浓度数量级为102、103时,真菌数量为20~300个,可以计数,而浓度数量级达104及以上时,则不能计数。分别培养24、48、72 h后取出琼脂培养平板观察,培养24 h后肉眼可观察到菌落,但具体形态不明显;培养48 h后较24 h时体积大,大致形态可看出,呈乳白色圆形或卵圆形,表面光滑湿润,有光泽,直径为1.0~2.0 mm;培养72 h后较培养48 h后体积稍大,但呈现黄色。结论菌液浓度为1.5×102cfu/m L时可以作为平板稀释法的适宜计数浓度,培养48 h后为菌落形态观察的最佳时机。

高强度聚焦超声联合脂质纳米氟碳液滴消融兔肝的实验研究

目的探讨脂质纳米氟碳液滴(L-PFP)增效高强度聚焦超声(HIFU)消融兔肝的空化活动及术后病理学变化。方法采用薄膜水化法制备L-PFP,然后将24只正常新西兰大白兔随机分为对照组(单纯HIFU组)和联合组(L-PFP联合HIFU),每组各12只;于超声引导下行HIFU定点消融兔肝,观察两组强回声区范围和灰度变化值情况;使用被动空化检测系统监控空化活动,观察辐照过程中两组宽带噪声(RMS)和累积瞬态空化剂量情况。分别于辐照前1 d和辐照后即刻、1 d、3 d、7 d检测兔肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST);对辐照后各时间点兔肝标本行HE染色,观察消融灶转归过程中的病理学变化。结果成功制备L-PFP,粒径(278.33±26.06)nm,稳定性良好。HUFI辐照后联合组强回声区范围大于对照组,对照组和联合组灰度变化值分别为45.60±4.07和88.00±7.21,差异有统计学意义(P<0.05)。空化检测结果显示,HIFU辐照过程中两组RMS均总体增强,且随时间波动,联合组RMS高于对照组(P<0.05);联合组累积瞬态空化剂量0.69±0.07,显著高于对照组0.11±0.01,差异有统计学意义(P<0.05)。肝功能检测结果显示,对照组与联合组辐照后即刻、1 d、3 d、7 d ALT和AST均呈先增高后降低的趋势;联合组辐照后1 d、3 d、7 d ALT和AST均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。大体标本及病理结果显示,联合组组织损伤更严重,细胞变性更彻底,炎性反应更强烈;其中对照组辐照后7 d消融灶恢复为正常组织,联合组辐照后7 d消融区域边缘可见较多正常肝细胞,并伴有条带状纤维化及少量炎性细胞浸润。结论L-PFP可通过增强空化效应有效提高HIFU消融效果,延长消融灶恢复所需时间。

低频低强度超声对白色念珠菌急性损伤效应的实验研究

目的探讨低频低强度超声对白色念珠菌的急性损伤情况,以及对其细胞壁通透性的影响。方法取5 ml浓度为1.5×107 cfu/ml的白色念珠菌菌液于六孔板中。采用频率为42 k Hz、探头直径为5 cm的圆形平面超声治疗头,分别选择超声强度0.13 W/cm2、0.35 W/cm2辐照六孔板中的白色念珠菌菌液5 min(0.13 W/cm2组、0.35 W/cm2组);对照组不经超声辐照。培养48 h计数各组菌落在培养皿上的存活数。扫描电镜和透射电镜观察细菌外部形态、内部结构的损伤情况。结果对照组菌落计数为21 cfu,0.13 W/cm2组菌落计数为20 cfu;0.35 W/cm2组菌落计数为14 cfu。低频低强度超声辐照白色念珠菌后,扫描电镜下可见0.13 W/cm2组和0.35 W/cm2组菌体均明显肿胀、外形变大,细胞外液进入细胞内明显增加;0.35 W/cm2组透射电镜下见核物质在边缘聚集,细胞壁受损,形成空泡,大量细胞外液进入细胞。结论随着超声辐照强度的增加,白色念珠菌的死亡率显著增加;低频低强度超声辐照白色念珠菌能促进其细胞壁通透性的增加。