针对TRPM2通道开发脑缺血损伤治疗药物

目的 TRPM2通道自从1998年被克隆以来,已经被认为是一种氧化应激损伤激活的效应器。近年来研究表明,在神经元、胶质细胞和中性粒细胞中的TRPM2通道均参与脑缺血损伤,提示TRPM2是脑缺血治疗的一个潜在重要靶点。为此,本研究拟开发针对TRPM2特异性抑制剂,为临床治疗脑中风患者提供新的候选药物。方法组合运用计算机筛选、化合物结构修饰、分子突变、电生理和高通量筛选等技术,并运用tMCAO模型和TTC染色等进行药效学评价。结果针对TRPM2的配体结合口袋开发系列TRPM2特异抑制剂,电生理结果显示,部分抑制剂具有很好的选择性。药效学评价结果显示,在脑缺血再灌3 h后给药处理能够显著减轻脑缺血损伤。结论开发了系列TRPM2特异性抑制剂,并发现部分化合物能够延长脑缺血损伤治疗时间窗,提示本研究开发的TRPM2特异抑制剂有望成为治疗脑中风的潜在候选药物。

人源瞬时受体电位M2型通道Nudix水解酶9同源结构域的提取和纯化

目的:摸索人源瞬时受体电位M2型通道(TRPM2)羧基端Nudix水解酶9(NUDT9)同源结构域(NUDT9-H)的蛋白提取和纯化方法。方法:异丙基硫代半乳糖苷诱导表达的Rosetta(DE3)大肠埃希菌菌株经超声破碎和离心后,将收集到的上清液与GST磁珠结合并用还原型谷胱甘肽洗脱以抽提GST-NUDT9-H融合蛋白,浓缩离心后再经分子排阻色谱层析纯化,最后经凝血酶酶切并与GST磁珠结合即得NUDT9-H蛋白。结果:含有0.5%的十二烷基-β-D-麦芽糖苷(DDM)裂解溶液体系和0.025%的DDM分子排阻层析色谱溶液体系能够提高GST-NUDT9-H融合蛋白的稳定性,再按每2 mg融合蛋白加入1 U凝血酶切割24 h,即获得高纯度NUDT9-H蛋白。结论:NUDT9-H蛋白稳定性较差,提取和纯化体系中需添加DDM以稳定其构象从而提高目的蛋白的产量和纯度。