miR-1-3p/206/613对LXRα和OATP1B1蛋白表达的影响及其机制研究

目的:探究miR-1-3p、miR-206和miR-613对肝X受体α(LXRα)和有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)蛋白表达及OATP1B1转运能力的影响及其机制研究。方法:通过生物信息学数据库预测可靶向作用于LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-q PCR、Western blot方法检测miR-1-3p/206/613及LXRα和OATP1B1蛋白水平;采用LC-MS/MS方法检测Hep G2细胞中瑞舒伐他汀(RSV)的含量;应用双荧光素酶报告基因法,研究miR-1-3p/206/613影响LXRα和OATP1B1表达的分子机制。结果:预测结果表明miR-1-3p/206/613与LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR互补配对,且具有较高的特异性、保守性及结合稳定性。与对照组相比,miR-1-3p/206/613 mimics能明显下调Hep G2细胞中LXRα蛋白表达水平16.5%、16.0%、25.1%,OATP1B1蛋白30.4%、30.5%、44.4%;相反,miR-1-3p/206/613 inhibitors明显上调LXRα蛋白表达水平13.3%、13.3%、16.0%,OATP1B1蛋白25.0%、25.6%、30.4%。当RSV浓度为5、60、125μmol/L时,miR-1-3p/206/613mimics显著减少Hep G2细胞对RSV的摄取至对照组的0.50、0.19、0.30倍,0.49、0.24、0.23倍和0.64、0.48、0.31倍;与之相反,miR-1-3p/206/613inhibitors上调1.26、1.59、2.07倍,1.97、2.44、2.63倍,2.22、2.86、2.93倍。与对照组相比,miR-1-3p/206/613 mimics或miR-1-3p/206/613 inhibitors,p GL/LXRα-WT报告基因荧光素酶活性分别下降38.5%、32.5%、32.8%或升高137.0%、75.8%、55.7%,而p GL/LXRα-Mut报告基因荧光素酶活性未见明显改变;同上,p GL/OATP1B1-WT报告基因荧光素酶活性下降24.3%、28.9%、32.1%或升高33.5%、48.3%、61.6%,而p GL/OATP1B1-Mut报告基因荧光素酶活性也未见明显改变。结论:miR-1-3p/206/613既可通过直接靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR而调控OATP1B1的蛋白表达和转运功能,也可通过靶向作用于LXRαmRNA 3'-UTR而发挥间接调控作用。

微小RNA对核受体调控药物代谢酶和转运体的研究现状

核受体(NRs)是一类配体依赖性转录因子超家族,通过内源性或外源性配体物质激活调控靶基因的转录。核受体在药物代谢酶和转运体的转录调控中发挥着重要的作用。微小RNA(MicroRNA)是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其对核受体表达的改变可影响药物代谢酶和转运体的表达,进而影响药效、药物不良反应和药物相互作用。本文系统地综述microRNA对几种重要核受体调控药物代谢酶和转运体的影响。

熊果酸对HepG2细胞中有机阴离子转运多肽1B3表达的影响及其机制研究

目的研究熊果酸(UA)对有机阴离子转运多肽1B3功能和表达的影响及其机制。方法实验分为实验组、空白组和对照组,实验组为用不同浓度的UA作用于Hep G2细胞24 h,空白组和对照组分别给予0.1%二甲基亚砜(DMSO)和FXR激动剂GW4064。用LC-MS/MS法检测Hep G2细胞中替米沙坦的含量;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测OATP1B3和FXR mRNA水平;用Western blotting测定OATP1B3和FXR的蛋白表达水平;用双荧光素酶报告基因法研究熊果酸对FXR转录调控OATP1B3表达的影响机制。结果与空白组比较,4,8,16,32μmol·L-1的UA增加Hep G2细胞中替米沙坦的摄取量,分别上调了77.8%,103.9%,114.6%,131.3%;UA也能明显上调OATP1B3mRNA和蛋白的表达水平,OATP1B3 mRNA表达分别上调了89.0%,90.0%,112.7%及126.3%,OATP1B3蛋白分别上调了42.0%,46.0%,64.3%及72.3%;与空白组比较,实验组FXR mRNA的表达分别上调了64.7%,65.0%,69.7%及110.0%,FXR蛋白的表达分别上调了38.3%,42.7%,53.0%及72.7%,对照组FXR mRNA和蛋白分别上调了191.0%和107.0%;与正常组相比,UA(8,16和32μmol·L-1)对沉默了FXR的Hep G2细胞的OATP1B3蛋白、mRNA和转运功能的上调作用都显著减少;双荧光素酶报告基因结果显示:4,8,16,32μmol·L-1熊果酸分别能使报告基因p GL3-OATP1B3荧光素酶活性上调66.0%,81.0%,124.3%及143.7%,FXR激动剂10μmol·L-1GW4064能使报告基因OATP1B3荧光素酶活性上调228.0%。结论熊果酸可以诱导OATP1B3 mRNA和蛋白的表达,这种作用可能是通过核受体FXR调控的。