花鲈胚胎干细胞移植及嵌合体的构建

旨在通过花鲈胚胎干细胞（LJESl）移植构建嵌合体，证实LJES1细胞的体内分化能力和发育全能性。采用脂质体介导法将线性化pCMV-EGFP质粒导入到长期培养的LJES1细胞内，细胞绿色荧光蛋白（GFP）的表达率为5％～10％，以此为供体，通过显微注射方法把20—50个LJES1细胞移植到花鲈囊胚中，共移植囊胚478枚，获得了20枚表达GFP的嵌合体胚胎，其中的15枚胚胎发育成鱼苗。荧光显微观察和PCR检测显示了LJES1细胞可在宿主胚胎内片状嵌合和单细胞分散嵌合，嵌合部位可分布于胚体的三个胚层；同时也证明GFP是一种优良的遗传标记。本实验结果为证实LJES1细胞的发育全能性提供了有力证据。

Golph2蛋白质的原核表达及多克隆抗体制备

目的:新近发现Golph2蛋白与肝癌关系密切,制备Golph2重组蛋白质和多克隆抗体,建立Western blot检测技术,为后续研究提供基础。方法:RT-PCR从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列,PCR回复突变制备全长完整基因(1206bp),将其插入至原核表达载体pET-21、转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE鉴定。将纯化蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗血清。建立Western blot鉴定重组蛋白和抗血清特异性,测定临床血清标本中Golph2蛋白水平。结果:从肝癌细胞中钓取的基因,出现2个碱基置换突变和1个碱基缺失突变,经回复突变,获得与NM177937完全一致序列。SDS-PAGE和Western blot证实,重组Golph2蛋白质与预期结果一致。抗血清能够特异地识别52kD重组蛋白质和73kD血清蛋白质。结论:Golph2蛋白质表达和抗血清制备完全成功。

浙江记者奋战在灾区

临危抢拍——浙江日报记者叶寒青在都江堰市蒲江路采访抢救被埋群众的现场回望'封城'——在灾区连续采访12天的钱江晚报女记者王颖。

血清Ⅱ型高尔基体膜蛋白与人类肝细胞癌的关系

目的探讨血清Ⅱ型高尔基体膜蛋白（Golph2）在肝癌诊断中的价值。方法应用逆转录聚合酶链反应技术，从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列，聚合酶链反应回复突变制备全长完整基因（1206bp），将其插入原核表达载体pET21、转化大肠杆菌DH5α，应用异丙基硫代β-D-半乳糖苷诱导其表达，镍柱亲和层析纯化，并经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。用纯化的蛋白质免疫家兔，制备多克隆抗血清。建立Western blot鉴定重组蛋白和抗血清特异性，建立双抗体夹心酶联免疫吸附法测定150例肝癌、120例其他肝病、200名健康体检者血清Golph2水平。均值比较采用ONO-WAY ANOVA法。结果从肝癌细胞中凋取的基因，出现2个基因置换突变和1个碱基缺失突变，经回复突变，获得与NM 177937完全一致的序列。经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot证实，重组Golph2与预期结果一致。抗血清能够特异地识别相对分子质量为5．2×10^4的重组蛋白质和7.3×10^4的血清蛋白质，与预期结果一致。建立的酶联免疫吸附试验方法检测肝癌、其他肝病患者、对照组血清Golph2，其吸光度值均数相差显著。以吸光度值≥0．40为阈值，其敏感度和特异性分别为44．5％和82．0％。结论Golph2在各组人群中均有表达，在肝癌组最高，在肝癌诊断中有一定价值，但特异性和敏感度不高。