BMP15对藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

为探究骨形态发生蛋白15(Bone Morphogenic Protein 15,BMP15)对体外培养的藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响,研究体外分离、培养并鉴定藏鸡等级卵泡F1颗粒细胞后,用0、25、50、100 ng/mL四种不同浓度的BMP15蛋白单独处理或者联合25 ng/mL促卵泡素(FSH)处理细胞,72 h后采用ELISA法检测不同处理组细胞培养液中的孕酮含量。同时,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测不同处理组细胞中孕酮合成关键基因StAR、CYP11A1和HSD3B1 mRNA相对表达量。结果显示:免疫组化法鉴定体外分离培养的藏鸡F1卵泡颗粒细胞卵泡刺激素受体(FSHR)抗体阳性率95%以上;BMP15单独处理细胞后,随着BMP15浓度的升高,孕酮分泌量呈下降的趋势,且100 ng/mL处理组的孕酮分泌量极显著低于其他组(P<0.01);BMP15联合FSH处理细胞后,随着BMP15浓度的升高,孕酮分泌量呈现上升的趋势,其中100 ng/mL处理组的孕酮分泌量极显著高于其他组(P<0.01);不同处理组细胞中孕酮合成关键基因StAR、CYP11A1和HSD3B1 mRNA相对表达量与孕酮分泌量趋势基本一致。结果表明,体外BMP15蛋白单独处理抑制藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮的分泌,但是联合FSH处理促进孕酮的分泌。

藏猪和大约克猪FABP3基因多态性及差异表达分析

【目的】脂肪酸结合蛋白3(FABP3)参与长链脂肪酸的摄取及利用,在脂肪沉积中发挥重要作用。探究FABP3基因在藏猪和大约克猪间的基因多态性和表达差异可为藏猪品质改良提供分子机制参考。【方法】选取180日龄藏猪和大约克猪为研究对象,对两猪种FABP3基因5'侧翼区和CDS区进行单核苷酸多态性(SNPs)筛选,使用实时荧光定量检测FABP3基因在肝脏、背最长肌和背脂3个组织中的表达量。【结果】在FABP3基因5'侧翼区筛选到T-114C和C-635A等2个SNPs位点,且SNPs位点基因型频率在藏猪与大约克猪群体间均呈极显著差异(P<0.01);经转录因子预测发现这2个SNPs位点与前脂肪细胞的更新、分化以及脂肪沉积相关,推测这两个多态性位点是参与调控FABP3基因表达的重要功能位点。FABP3基因在藏猪肝脏、背最长肌中的表达量极显著高于大约克猪(P<0.01),在背脂中的表达量显著高于大约克猪(P<0.05)。【结论】推测FABP3基因可能为调控藏猪脂肪代谢的重要候选基因,在藏猪脂肪沉积中呈正向调控作用。

猪PFN1基因在骨骼肌组织中的表达模式及多态性研究

为探究猪前纤维蛋白1(Profilin-1,PFN1)基因多态性及其在猪骨骼肌组织中的mRNA表达规律,以藏猪(Tibet pigs, TP)和大约克猪(Yorkshire pigs, YP)作为试验动物,采用Sanger测序技术对PFN1基因CDS区、5’UTR启动子区进行单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism, SNP)的筛选与基因分型,预测分析了PFN1基因的SNPs位点突变前后转录因子的功能特性;采用RT-qPCR技术检测PFN1基因在30、90、180日龄三个时期TP和YP的腿肌与背最长肌中的mRNA表达量。结果表明:PFN1基因启动子区域存在三个SNPs,且TP与YP基因频率差异显著;产生了8个新增转录因子结合位点,这些位点调控骨骼肌生长发育、细胞形态建成和保持等过程;PFN1基因表达水平于30日龄时最高,随日龄的增加而下降,90、180日龄时TP的PFN1基因表达量均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于YP。综上表明,猪PFN1基因SNPs位点多态性与骨骼肌mRNA的差异表达相关,推测PFN1基因对猪早期骨骼肌生长发育与肌纤维细胞形态保持起重要的调控作用,本研究结果为后续进一步探索其分子作用机制奠定基础。

蛋鸡子宫内膜细胞的分离培养与鉴定及性腺激素对其增殖的影响

为探讨蛋鸡子宫内膜细胞的形态学特点、生长规律,本试验采用Ⅰ型胶原酶消化的方法获取蛋鸡子宫内膜上皮细胞和基质细胞,采用免疫组织化学法进行细胞鉴定,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色(MTT)法测得细胞生长曲线,并研究不同浓度水平的性腺激素对子宫内膜上皮细胞和基质细胞体外增殖的影响。结果显示,该方法培养的上皮细胞和基质细胞分别对角蛋白质ck18单克隆抗体和波形蛋白质抗体呈阳性;蛋鸡子宫内膜上皮细胞和基质细胞在接种后第2 d开始进入对数生长期,第7 d进入平台期;孕酮(100 nmol/L)能显著促进子宫内膜上皮细胞和基质细胞体外增殖;孕酮(100 nmol/L)和10 nmol/L、100 nmol/L雌激素组合对子宫内膜上皮细胞和基质细胞体外增殖均有显著促进作用。表明本研究成功培养了蛋鸡子宫内膜上皮细胞和基质细胞,并证实这2种细胞的细胞周期均为7 d,一定浓度的孕酮和雌激素及其组合对子宫内膜上皮细胞和基质细胞的体外增殖均有促进作用。

猪MYL2基因多态性及其在肌肉组织中的差异表达

肌球蛋白轻链-2(myosin light chain 2,MYL2)是哺乳动物横纹肌中的一种主要肌小节蛋白,对动物正常生长发育起重要调控作用,为探究猪MYL2基因的多态性及其在横纹肌中mRNA表达规律,以藏猪(TP)和大约克猪(YY)作为试验动物,采用Sanger测序法对MYL2基因5′非翻译区(5′UTR)进行单核苷酸多态性(SNP)的筛选与基因分型,并预测分析MYL2基因SNPs位点突变前后转录因子功能特性;同时,采用RT-qPCR技术检测MYL2基因在30、90、180日龄时TP和YY的心肌和背最长肌组织中的mRNA相对表达量。结果显示,MYL2基因启动子区域存在2个SNPs且2个品种间基因频率差异极显著(P<0.01),产生4个新增转录因子结合位点,这些位点调控横纹肌的收缩、肌纤维类型的维持、肌肉细胞的增殖分化等过程;MYL2基因的mRNA水平随日龄增长而升高,且3个日龄TP心肌和背最长肌组织中的表达量均极显著高于YY(P<0.01)。综上表明,猪MYL2基因SNPs位点与心肌和背最长肌mRNA的差异表达相关,研究结果可为研究藏猪生长发育的分子调控机制提供一定的理论依据。

西藏高校《家禽生产学》实践教学改革探索

《家禽生产学》是动科专业一门实践性较强的专业核心课程,通过分析西藏高校当前该课程在教学过程中存在的各种问题,探寻出了针对教学内容、教学方式和考核制度等多方面的改革措施,重视实践教学的开展,旨在培养学生扎实的理论功底,更要培养学生较强的动手能力和创新能力,培育出符合西藏地区需求的高素质畜牧专业技能人才。

基于iTRAQ技术挖掘猪肾组织高原低氧适应性关键蛋白

旨在探究高原低氧环境下藏猪与大约克猪肾组织中低氧适应的差异表达蛋白(differentially expressed protein,DEPs)。本试验选择藏猪与大约克猪两个品种无亲缘关系的去势公猪,饲养于海拔3000 m的高原,按自由采食方式饲养至180日龄,每个品种随机选择生长情况相近的9头猪采集肾组织。利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术对藏猪和大约克猪肾组织中蛋白差异表达情况进行分析,并对差异表达蛋白进行GO(Gene Ontology)功能注释及KEGG通路分析。结果发现,在两猪种肾脏组织中共获得4370个蛋白质,以FC>1.2或<0.833,P<0.05为筛选条件共筛选出181个DEPs,其中在藏猪中上调的蛋白质有138个,下调的有43个。这些DEPs主要功能富集在HIF-1信号通路、PPAR信号通路、补体和凝血级联信号通路、氧化还原酶活性、碳代谢、血压调节、线粒体等与低氧适应相关的条目和通路上,进一步综合分析后共筛选出5个与低氧适应相关的重要DEPs(CD59、A2M、eNOS、CDKN1B和PGK1)。这些DEPs分别在维持血液动力学、调节能量代谢与生理环境稳态等方面的调节中起到重要作用,为进一步研究猪的高原低氧适应性提供一定理论依据。

《牛生产学》精品课程建设的探索与实践

针对西藏实际及该课程的课程特点,通过组建教学团队、进一步优化教学内容、改革教学方法、教材建设及课程资源上网等方面对《牛生产学》精品课程建设进行了探索与实践。通过实践,发现《牛生产学》精品课程建设切实推动了相关教学改革,提高了教学质量,使《牛生产学》教学为学生以后走上工作岗位奠定了扎实的理论基础。提供了有力的技术支撑。

藏猪与大约克猪EDN1基因多态性与表达差异分析

为探究EDN1基因在猪脂肪沉积机制中所发挥的作用,本实验利用RT-q PCR技术对藏猪及大约克猪心脏、背脂及背最长肌组织中EDN1基因的m RNA表达量进行检测,并采用Sanger测序法对藏猪和大约克猪EDN1基因3’UTR和5’UTR区域进行了单核苷酸多态性(SNPs)筛选与基因分型。结果表明:在不同品种猪中,藏猪心脏组织EDN1基因m RNA表达量显著高于大约克猪;背脂和背最长肌中m RNA表达量的趋势一致,均为藏猪极显著低于大约克猪;在EDN1基因的3’UTR和5’UTR区域,存在3’A15G、3’C56G、3’A348G和5’A-1793G、5’C-1757A共5个突变位点,且藏猪与大约克猪等位基因频率差异显著。经转录因子预测发现,这些SNPs位点与EDN1基因负向调控脂肪沉积性状相关。该实验结果为进一步探究猪EDN1基因在脂肪沉积性状方面的研究奠定了基础。

高原大约克猪胴体性能和肉质性状测定分析

为研究高原环境下大约克猪主要胴体性能、肉质性状相互关系,选择9头饲喂于西藏林芝的大约克猪进行屠宰测定,测定大约克猪9个主要胴体性能指标和7个肉质性状指标,采用相关性及通径分析方法,对各胴体性能指标以及各肉质性状指标间的相互关系进行剖析,并进行显著性检验。胴体性能指标结果显示:180d龄大约克猪平均胴体重为56.58±2.46 kg、屠宰率为71.82±3.01%、胴体长为65.56±6.44 cm、胴体背膘厚为20.63±5.25 mm、皮厚为2.84±0.91 nm、眼肌面积为32.61±8.03 cm2、腿臀率为29.50±1.74%、花板油率为2.89±0.58%以及瘦肉率为62.25±2.93%,且大约克猪的胴体性能具有很强的变异程度;相关性分析表明,瘦肉率与屠宰率、眼肌面积、腿臀率具有极显著正相关关系(P<0.01),与背膘厚具有极显著负相关关系(P<0.01),与花板油率有显著负相关关系(P<0.05),同时花板油率、背膘厚及皮厚对大约克猪屠宰性能具有负效应;通径分析得出,胴体重、花板油率及腿臀率对瘦肉率的直接影响较大,腿臀率和屠宰率对瘦肉率的间接影响较大。肉质指标分析结果显示:大约克猪屠宰后平均pH30min为6.56±0.24,pH24h为5.74±0.60,滴水损失率为1.91±0.76%,大理石纹评分为2.58±0.26,剪切力为20.49±4.21 N,肉色评分为3.33±0.20,熟肉率为60.60±2.37%;且滴水损失率和剪切力的变异系数较大,分别为39.79%和20.55%,而pH30min(3.66%)、pH24h(10.45%)、大理石纹评分(10.08)、肉色评分(6.01)、熟肉率(3.91%)变异程度较小;相关性分析表明,肉质指标间均呈正相关关系,且大多数具有极显著关系(P<0.01);通过通径分析可知,对肉色评分直接影响(正效应)较大的是pH30min和pH24h,负影响较大的是剪切力,而pH24h和剪切力对其间接影响也较大。本试验结果表明,高原环境下,大约克猪胴体重、花油率及腿臀率是影响其瘦肉率的主要因素,屠宰后pH值是影响其肉质的主要因素。

非洲猪瘟防控常态化下猪生产学教学实践改革初探

非洲猪瘟(ASF)防控常态化下猪生产学教学与实践改革是提高养猪专业人才技能的必经之路。以非洲猪瘟防控常态化为大背景,以猪生产学课程改革和实践改革事例进行探讨,总结模块化教学和新增实践内容的意义,分析取得的效果,旨在为农业院校猪生产学教学改革提供参考。

川芎嗪联合红景天对高原缺氧条件下肉鸡血清抗氧化性能的影响

本试验旨在研究盐酸川芎嗪和红景天组合对高原肉鸡血清抗氧化性的影响。试验选用180只1日龄肉鸡,随机分为3组(红景天组、空白对照组、红景天+川芎嗪组),分别在日粮中添加0.5%红景天粉、不添加和0.5%红景天粉+50 mg/kg∙d剂量饮水口服盐酸川芎嗪。分别于21日龄和42日龄采集血液,检测肉鸡血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD),以及丙二醛(MDA)等抗氧化指标的含量。结果表明:21日龄时,与对照组相比,两个试验组肉鸡血清中SOD、MDA、GSH和CAT差异不显著(P>0.05);42日龄时,川穹嗪+红景天组肉鸡血清中GSH和SOD的含量极显著高于空白对照组,且该组MDA含量最低,差异极显著(P<0.01)。结果表明:红景天联合川芎嗪能够显著提高高原肉鸡血清的抗氧化能力,为红景天联合川芎嗪应用于高原地区养禽业中提供一定的科学依据。

猪ANXA2基因多态性及组织表达差异分析

为了探究膜联蛋白A2(ANXA2)基因单核苷酸多态性(SNP)及其在组织中的表达差异,以180日龄的藏猪、大约克猪作为试验对象,检测ANXA2基因在肝脏、腹脂和背脂组织上mRNA表达差异,并对ANXA2基因的5′侧翼区进行多态性分析。结果显示,在ANXA2基因5′侧翼区筛选到4个SNP位点,g.111574291G>A、g.111574499C>T、g.111574522G>C和g.111574638A>G,且藏猪与大约克猪等位基因频率差异显著(P<0.05)。在肝脏中,藏猪和大约克猪ANXA2基因的mRNA表达趋势基本一致;在背脂和腹脂中,藏猪ANXA2基因的mRNA表达量极显著低于大约克猪(P<0.01)。综上,ANXA2基因可能是调控脂肪沉积和脂肪代谢的重要候选基因。

藏猪和大约克夏猪CXCL10基因多态性及表达差异分析

为探讨CXCL10基因在藏猪和大约克夏猪中的差异表达和多态性分析,本研究采用一代测序(Sanger测序)法对藏猪和大约克夏猪CXCL10基因起始密码子上游3 kb区域进行单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)筛选并进行基因分型;采用RT-qPCR检测CXCL10基因在180日龄藏猪和大约克夏猪背最长肌、腿肌、肝脏组织中的mRNA水平表达情况。结果显示:在CXCL10基因起始密码子上游3 kb区域,存在T-832G、A-808G和T-694C这3个品种间极显著差异的SNPs位点,且均符合哈迪-温伯格定律;转录因子预测结果显示,这些SNPs位点的突变导致了ARGFX、ARID3A/B的结合位点消失;CXCL10基因在藏猪背最长肌、腿肌和肝脏组织中的表达量均极显著高于大约克夏猪。由此推测,CXCL10基因可能参与肌肉生长发育的负向调控。本研究结果为进一步研究藏猪生长发育机制奠定了基础。

藏猪和大约克猪FBXO32基因多态性及表达差异分析

为明确FBXO32基因在高原藏猪与大约克猪肌肉中的表达差异性,选取这2个猪种作为试验动物,采用双脱氧测序技术对藏猪(33头)、大约克猪(32头)FBXO32基因的5′UTR启动子区进行单核苷酸多态性(SNPs)筛选,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测FBXO32基因在藏猪、大约克猪腿肌及背最长肌组织中mRNA的相对表达量。研究结果表明,在FBXO32基因的5′UTR启动子区筛选到了G-257A和A-556G这2个SNPs位点,且SNPs位点在2个猪种群体间的基因型频率有着显著性差异(P<0.05);通过转录因子预测,发现这2个SNPs位点与肌细胞的更新、分化和增殖相关,推测FBXO32基因的SNPs位点是调控肌肉生长的关键位点;藏猪腿肌、背最长肌组织中FBXO32基因的mRNA相对表达量都显著高于大约克猪(P<0.05),由此推测FBXO32基因可以负向调控肌肉生长,这可能是导致高原藏猪生长速度慢的主要原因之一。本研究结果为进一步探究FBXO32基因在猪肌肉生长相关的调控机制提供了必要的理论依据。

隆子县黑鸡产业发展现状及对策

隆子黑鸡因全身羽毛黑色而得名,具有耐寒、抗高反、觅食能力强、出肉率高、蛋品质佳及遗传性稳定等优势。近年来,通过政策和资金支持,隆子县黑鸡养殖规模不断扩大,但在饲养管理、品种改良、疫病防治等方面仍存在一些问题。

蛋壳形成过程中部分生殖激素及其受体基因变化规律的研究

为了解蛋鸡产蛋过程中相关激素和受体基因的变化规律,试验采用放射免疫技术(RIA)和荧光定量PCR技术对蛋壳形成过程中血清孕酮(P4)、雌二醇(E2)2种激素含量的动态变化和孕酮受体(PR)、雌激素受体(ERα)在输卵管子宫部的表达进行测定。结果表明:蛋进入子宫前1小时孕酮含量最高,与其他时间点相比差异极显著(P<0.01),蛋进入子宫部后孕酮含量逐渐下降,直到产蛋后1小时孕酮含量开始上升;雌二醇含量在蛋进入输卵管子宫部15小时最高,蛋排出时最低,产蛋后1小时开始升高;蛋壳形成过程中PGRmRNA的变化趋势是下降-上升-下降,蛋进入输卵管子宫部15小时PGR表达量较蛋排出时有极显著提高(P<0.01),之后PGR表达量开始下降;在蛋壳形成过程中ERα表达量呈先上升后下降的趋势,在蛋进入输卵管子宫部45分钟时ERα表达量最高,与蛋排出时、产蛋后1小时相比差异极显著(P<0.01)。

蛋鸡不同产蛋期生殖器官中OC17,OC116和OCX32 mRNA相对定量研究

Ovocleidin-17(OC17),Ovocleidin-116(OC116)和Ovocalyxin-32(OCX32)是蛋壳中的特异性基质蛋白,对蛋壳的钙化有重要的调节作用。本试验采用RT-PCR、RT-QPCR分别检测了蛋鸡在产蛋初期、高峰期和后期的卵巢、输卵管的伞部、膨大部、峡部以及子宫部OC17、OC116和OCX32的表达量变化。结果显示:在不同产蛋期3个基因在输卵管峡部和子宫部的表达量均显著或极显著(P<0.05或P<0.01)高于其他组织;卵巢和输卵管中OC17、OC116和OCX32在产蛋高峰期,初期和后期的表达量变化存在显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01);3个产蛋期OCX32在5个组织中的表达量均极显著高于OC17和OC116(P<0.01)。研究结果揭示了蛋壳特异性基质蛋白基因OC17、OC116和OCX32在不同产蛋期蛋鸡生殖器官中的表达规律,为蛋壳形成的分子机理研究提供了理论依据。

镉对发育期小鼠肺细胞DNA损伤的影响

为研究镉对发育期小鼠肺细胞DNA损伤的影响,将72只断乳小鼠随机均分为3组,分别为10、20和30 d染镉组,每组雌雄各半,然后每组又分别分为对照组、低剂量组(1/100 LD50)、中剂量组(1/50 LD50)和高剂量组(1/25 LD50),每组6只小鼠。各剂量组自由饮水染镉10、20和30d时处死小鼠,收集肺细胞,进行单细胞凝胶电泳试验(彗星试验),对照组自由饮用去离子水。

藏猪与大约克夏猪GADD45A基因多态性与表达差异研究

为了探究GADD45A基因在猪肌肉生长中的作用,试验选择180日龄的藏猪和大约克夏猪各8头,采用实时荧光定量PCR法测定和分析两品种试验猪只背最长肌、腿肌和垂体组织中GADD45A基因的mRNA相对表达量;同时选择180日龄藏猪37头和大约克夏猪55头,PCR扩增两品种试验猪只GADD45A基因起始密码子上游3 000 bp左右的序列(5′侧翼区),通过混池测序分析序列的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)位点,同时分析SNPs对GADD45A基因转录的影响。结果表明:在背最长肌和腿肌组织中,藏猪GADD45A基因的mRNA表达量均极显著高于大约克夏猪(P<0.01);在垂体组织中,藏猪GADD45A基因的mRNA表达量显著高于大约克夏猪(P<0.05)。GADD45A基因5′侧翼区存在G1 952A、C1 689T、G1 614T 3个突变位点,并且这3个突变位点在藏猪和大约克夏猪中均差异极显著(P<0.01),且均符合哈迪-温伯格定律(P>0.05);经转录因子预测,在C1 689T位点中,当C碱基突变为T碱基后,出现了新的转录因子——叉头框转录因子D3(forkhead box D3, FOXD3);在G1 614T位点中,当G碱基突变为T碱基后,转录因子——同源框CUT样蛋白1(cut like homeobox 1,CUX1)消失。说明上述突变位点可能是导致180日龄藏猪和大约克夏猪GADD45A基因mRNA相对表达量差异极显著或显著的原因,并推测该位点是调控GADD45A基因表达的关键功能位点。