犬细小病毒VP2基因的克隆与生物信息学分析

本研究旨在克隆犬细小病毒VP2(Canine parvovirus VP2,CPV-VP2)基因,构建克隆载体pMD18-T-VP2,分析其生物信息学特征。以犬细小病毒(CPV)阳性病犬血液基因组病毒DNA为模板,PCR扩增CPV-VP2基因,通过TA克隆获得pMD18-T-VP2重组质粒,测序后对其进行生物信息学分析。结果表明:(1)CPV-VP2完整的开放阅读框由1755个核苷酸组成,共编码585个氨基酸残基,其序列同源性与浣熊最高,达97.6%;(2)信号肽在线预测认为,CPV-VP2基因无信号肽;(3)CPV-VP2大多数氨基酸偏好以T、A结尾的密码子;(4)CPV-VP2蛋白可能存在7个糖基化位点,其丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸分别存在8个、10个和7个磷酸化位点;(5)CPV-VP2可能存在76个B细胞抗原表位;(6)CPV-VP2蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构;(7)CPV-VP2蛋白二级结构的α-螺旋区域占9.93%、β-折叠区域占24.49%、无规则卷曲区域占65.58%;(8)CPV-VP2蛋白三级结构存在多个螺旋和折叠区域,主要以无规则卷曲为主。本研究为制定CPV-VP2基因原核或真核高效表达策略提供了参考资料,并为进一步制备CPV胶体金快速诊断试纸条和基因工程疫苗奠定了基础。

粪菌液来源及添加量对断奶仔猪生长性能与下痢率的影响

为研究粪菌液来源及添加量对断奶仔猪生长性能与下痢率的影响,试验选用360头杜×长×大断奶健康仔猪,随机分为12组,每组3个重复,每个重复10头仔猪,其中1~3组为对照组,饲喂基础饲粮;4~12组为试验组,在饲喂基础饲粮的基础上,分别灌喂由健康怀孕母猪、哺乳母猪、断奶仔猪粪便制成的粪菌液。每种粪菌液添加量设10、30、50 mL 3个梯度。从断奶第1天起,每天上、下午各灌喂1次,连续灌喂4 d,4 d后仅喂基础饲料。结果表明:不同来源的粪菌液对仔猪的生长性能与下痢率均无显著影响(P>0.05),粪菌来源与添加量对仔猪的生长性能与下痢率的影响均无显著交互作用(P>0.05);随着粪菌添加量的增加,对各组仔猪的生长性能和下痢率作用效果显著增加(P<0.05)。在本试验条件下,健康怀孕母猪、哺乳母猪和断奶仔猪均可作为粪菌供体,最适粪菌液添加量为50 mL。

山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化

旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a-Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的cDNA亚克隆至pET-30a载体,构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测确认,镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4融合蛋白。结果表明:(1)从山羊生殖脊中克隆了Klf4基因,其开放阅读框由1 434个核苷酸组成,编码478个氨基酸,而且该序列与绵羊的同源性最高,达到98.5%;(2)经过SignalP 4.0在线分析,Klf4的编码蛋白不存在信号肽;(3)经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,重组质粒pET30a-Klf4在大肠杆菌中得以表达;在变性条件下纯化,获得了His-Klf4融合蛋白。

兽医外科学教学方法改革与实践

兽医外科手术学是联系基础兽医学和临床兽医学的纽带和桥梁,也是培养兽医专业本科生的重要学习环节。笔者对兽医外科学理论与实验进行了一系列教学改革,建立了一套行之有效的教学模式,取得了良好的教学效果。

浅谈犬难产的手术疗法

【目的】犬难产是临床常见疾病,也是复杂棘手疾病。为了让宠物畜主对犬难产有正确判断及宠物医生实施犬难产手术有较好的参考。【方法】通过阐述犬难产知识,浅谈犬难产如何能及早发现和就诊;通过介绍成功救治尿潴留并发难产贵宾犬的案例,浅谈犬难产如何开展诊断和治疗。【结果】一旦确诊为犬难产,在药物催产或人工助产治疗无效时,应尽快进行剖腹产手术。【建议】对子犬难产应果断诊治;手术前或手术过程中给予强心补液;术后注意预防、治疗尿潴留和粘连。

广西宠物诊疗行业人才需求调研分析

【目的】了解广西宠物诊疗行业对人才需求状况,为广西高校制定专业发展规划提供参考依据。【方法】以区内85家宠物诊疗企业作为调研对象,采用问卷调查法等对企业现有基本情况、企业员工学历结构、未来五年内计划招聘农林牧渔类毕业生数量、对员工关键能力的需求等进行调研。【结果】广西诊疗企业现阶段和未来5年对大专学历需求量较大,超过50%,其次是本科层次人才;对宠物养护与疾病防治类专业员工需求数量最多,其次是畜牧兽医专业和动物医学专业;企业最看重的是员工的吃苦耐劳精神、较强的身心素质、对应的专业知识和独立解决问题的能力。【结论】今后几年广西高职院校可适当扩大宠物医疗类专业招生规模,以解决该行业人才需求问题。

农牧类高职院校微课开发与应用

课题组以“宠物临床诊疗技术”课程微课建设为个案,总结了高职院校课程微课的开发与应用情况,以建立优质高效的微课教学资源为目标。教改实践证明,微课以其短小精悍、生动有趣的特点,深受学生与教师的喜爱,学生学习兴趣浓厚,课堂教学气氛活跃,教学质量明显提升。

变异型鸡传染性支气管炎病毒对肉鸽的致病性试验

本研究选用与鸽源冠状病毒S1基因高变区氨基酸序列同源性很高的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西分离株GX-YL2和对鸡致死率较高的广西分离株GX-YL5对非免疫幼鸽进行人工感染试验,并同时设参考毒株M41组和空白对照组。结果显示,感染后4 d M41、GX-YL5组试验鸽出现呼吸道症状。感染后7 d GX-YL2组试验鸽子出现呼吸道症状。与空白组相比,感染后8 d GX-YL2组鸽子气管内有大量黏液,胰脏充血肿大,肺脏和肾脏充血;GX-YL5组鸽子气管有大量黏液,肺充血,胰脏充血肿大;M41组鸽子气管粘膜肿胀并有黏液,肾脏充血。感染后8 d组织病理学观察见到鸽子气管纤毛上皮细胞肿胀但纤毛完整不脱落,轻微胰腺炎,肺脏充血和出血。感染后28 d未观察到明显的临床、解剖和组织病理学变化。对感染后1、3、7、10、14、21和28 d的泄殖腔棉拭子进行反转录套式PCR扩增,结果表明除了GX-YL2组的一个样品在感染后10d检测结果为阳性外,其余泄殖腔棉拭子检测结果全为阴性。对感染后8和28 d鸽子气管、肺、肾脏、胰脏病毒分离物进行反转录套式PCR扩增,结果表明感染后8 d,M41组的气管、肺、肾脏、胰脏全部阳性,GX-YL2和GX-YL5组的气管、肺、肾脏、胰脏部分阳性;感染后28 d,3个组鸽的气管、肺、肾脏、胰脏病毒检出率均降低,尤其GX-YL2和GX-YL5组更低。整个试验过程未见到致鸽子死亡。研究表明了对鸡具有较强致病能力的鸡源IBV可以感染肉鸽,能在肉鸽体内进行增殖,但对鸽子致病力不强。