单增李斯特菌单克隆抗体制备及免疫磁珠分离方法的建立

免疫磁珠技术操作简单、快速高效,目前已广泛应用于细菌的快速分离纯化等领域,本研究旨在建立一种捕获率高、特异性好的单增李斯特菌免疫磁珠分离方法。首先通过杂交瘤技术制备出8株抗单增李斯特菌单克隆抗体,效价均达到1∶1024000,且特异性较好。利用效价最高的腹水6-E6制备单增李斯特菌免疫磁珠,并对单增李斯特菌免疫磁珠最适条件进行优化,结果选择MEST(7.0)为偶联缓冲液、磁珠直径为750 nm、免疫磁珠添加量为0.4 mg、捕获时间45 min、单增李斯特菌含量在1×10^(4)CFU/mL时,免疫磁珠捕获率最高可达76.29%。在模拟牛奶样品中免疫磁珠特异性捕获率可达到67.71%。该分离方法可快速且特异地分离单增李斯特菌,操作简便,为快速分离食品中的单增李斯特菌并实现快速检测提供了技术支持。

政策工具对体育产业发展的影响路径研究——基于15省的QCA分析法

以我国 15 个省 2018 年体育产业 GDP 与 46 号文本政策工具数据为例,通过 Nvivo12 和定性比较分析方法(QCA)研究各省份体育产业发展能力和政策支持工具组合的逻辑关系。研究发现未出现政策工具的必要条件;体育产业信息服务、体育基础设施建设、体育市场主体、公共体育服务、策略性工具、目标规划、税收金融支持等为充分条件。并得出三种主要政策工具的使用路径。

阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及特性分析

本研究以灭活阪崎克罗诺杆菌(CS)为免疫原免疫BALB/c小鼠,5次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,制备抗CS特异性单克隆抗体。对单克隆抗体进行效价及特异性测定,确定其抗体亚型及单克隆抗体之间的抗原竞争性。结果表明:经4次亚克隆后得到2株稳定产生抗体的细胞株,分别命名为9D10、2H2,9D10抗体和2H2抗体效价较高,分别为2×10^(6)、6×10^(6);9D10抗体和2H2抗体与单增李斯特菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌等均不发生交叉反应,特异性良好;2株抗体重链均为IgG2a,轻链均为Kappa;2株抗体之间无抗原竞争性。抗CS单克隆抗体的制备可为其快速检测方法的建立提供基础。

女大学生创业差异的问题探析——以南京江北新区高校为例

如今女大学生创业者逐年增加,引起了社会的广泛关注。本研究组织8名南京江北新区高校的女大学生创业者进行访谈,研究分析发现创业者之间存在着创业差异和诸多问题。以此为基础,本文为女大学生创业者提出相关建议,同时倡导各方对这个群体提供多维度的创业指导和支持,营造良好的创业环境。

政策工具视角下国家体育产业政策探究——基于苏南地区政策文本的Nvivo质性分析

近几年,关于体育产业政策的研究从数量、内容、形式方 面不断推陈出新。以往的研究以定性为主,关注于体育产业政 策变迁、逻辑演进和发展改革、政策执行效果、政策环境等 方面。较少以定性和定量相结合的方法来分析国家、省政府以 及地方政府实施意见中的政策工具选择和关联性。尽管关于国 家体育产业政策的研究已取得较为丰硕的成果,但在地方性的 政策研究还有不足。

奶牛乳房炎三种主要链球菌多重PCR检测方法的建立

链球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌,其中无乳链球菌(S.agalactiae)、停乳链球菌(S.dysgalactiae)和乳房链球菌(S.uberis)是奶牛乳房炎主要的致病性链球菌。为同时、快速地检测牛奶样品中这3种重要链球菌,本研究根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌Mig基因及乳房链球菌pauA基因设计特异性引物,同时以细菌16S rRNA基因为内参,建立了多重PCR检测方法,并进行条件优化。结果显示,该方法最佳退火温度为58℃,最佳扩增循环数为25个循环,本方法同时检测无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌时,检测限分别为1×10^(3)CFU/m L、1×10^(3)CFU/m L及1×10^(4)CFU/m L,灵敏性高。该方法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、单核细胞增生李斯特菌等10种菌均无交叉反应,特异性好。模拟样品结果显示,当奶样中3种菌的初始浓度均为1 CFU/m L时,37℃增菌6 h即可检出乳房链球菌,增菌8 h以上3种菌可全部检出。结果表明,该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对同时快速检测牛奶中无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌具有重要意义,也为奶牛乳房炎的监管、诊治提供了技术支持。