人蛋白质组芯片筛选宿主中与结核分枝杆菌Rv1705c相互作用的蛋白质

目的探究人体中与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv1705c蛋白相互作用的蛋白质。方法原核表达Rv1705c蛋白基因,收集包涵体,裂解后透析纯化Rv1705c并测定其浓度,ELISA法检测细菌Rv1705c刺激巨噬细胞后细胞因子IFN-γ的分泌量,使用纯化并带有生物素标记的Rv1705c孵育人蛋白质组芯片HuProt^(TM),筛选与Rv1705c相互作用的人类蛋白质,使用GenePix Pro 6.0软件对蛋白质芯片的信号图像进行数据提取,使用GO、KEGG等多个数据库进行生物信息学分析,GST pulldown验证Rv1705c与PSMA3、RSAD2的相互作用。结果纯化结果显示,Rv1705c在包涵体中表达,Rv1705c刺激巨噬细胞后IFN-γ分泌量显著上升。芯片结果显示共筛选出了29个与Rv1705c相互作用的潜在阳性蛋白质,其中PSMA3、NLN、THOP1、UPF3A、RSAD2、OMG、PNKD、STEAP3、MED8共9个蛋白质的信噪比(signal-to-noise ratio,SNR)>1.6。进一步的生物信息学分析发现候选蛋白PSMA3、RSAD2、C1QBP参与固有免疫应答激活信号转导,并且PSMA3、RSAD2与干扰素存在交互作用,GST pulldown验证PSMA3、RSAD2与Rv1705c确有相互作用。结论发现并验证PSMA3、RSAD2与Rv1705c存在相互作用,为Mtb感染机制的研究提供参考。

2017年深圳市龙华区手足口病病原学特征分析

目的 分析2017年深圳市龙华区手足口病（hand,foot,and mouth disease,HFMD）病原学特点.方法 采用实时荧光PCR方法对哨点医院送检的242份HFMD临床诊断病例的肛拭子样品进行肠道病毒（enteroviurs,EV）、肠道病毒A组71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CV A16）核酸检测,并对非EV71非CV A16的其他肠道病毒和EV71的VP1区序列进行测定,亚型鉴定和系统进化分析.结果 实验室确诊病例有190例,阳性率为78.51％（190/242）,其中,EV71感染32例（16.84％,32/190）、CV A16感染11例（5.79％,11/190）、CV A6感染126例（66.32％,126/190）.实验室确诊病例中,男性占57.9％ （110/190）,女性占42.1％（80/190）;3岁以下儿童占78.95％（50/190）.系统进化树分析结果显示,2017年深圳市龙华区流行的EV71属于C4a进化分支,CV A6属于D3进化分支,CV A10属于C进化分支.结论 深圳市龙华区应进一步加强辖区HFMD监测,重点关注3岁以下儿童及病原谱构成和重要病原体进化情况.