oppCDF基因缺失对鼠伤寒沙门菌致病性的影响

[目的]沙门菌是常见的人畜共患病原菌,可引发多种食源性疾病,鼠伤寒沙门菌是沙门菌的重要血清型之一,具有重要的公共卫生研究意义。本试验旨在研究转运蛋白相关基因oppCDF对鼠伤寒沙门菌生物特性的影响,为新型沙门菌减毒疫苗的制备提供理论基础。[方法]本试验通过比较鼠伤寒沙门菌野生株及已成功构建的oppCDF基因缺失株的生化特性、遗传稳定性、耐药性、黏附性、侵袭力、半数致死量(LD_(50))及小鼠肝脏、脾脏载菌量,分析oppCDF基因与鼠伤寒沙门菌生物特性之间的关系。[结果]oppC、oppD和oppF基因分别缺失后鼠伤寒沙门菌生化特性未发生明显改变且能稳定遗传,表明oppCDF基因表型未发生变化;与野生株STM LT2相比,基因缺失株STM LT2ΔoppC对红霉素变为敏感、氯霉素敏感性降低,STM LT2ΔoppD对头孢氨苄敏感性降低,STM LT2ΔoppF对复方新诺明敏感性增强,3株基因缺失株均对氨苄西林不敏感。3株基因缺失株LD_(50)检测结果显示,与野生株STM LT2相比,STM LT2ΔoppC毒力下降,但STM LT2ΔoppD、STM LT2ΔoppF毒力分别上升1.6和8.6倍;STM LT2ΔoppC的黏附性显著降低(P<0.05),侵袭力降低,定植力极显著下降(P<0.01);STM LT2ΔoppD的黏附性、侵袭力降低,但定植力极显著上升(P<0.01);STM LT2ΔoppF的黏附性显著降低(P<0.05),但侵袭力显著增强(P<0.05),定植力极显著上升(P<0.01)。[结论]oppC基因缺失可降低鼠伤寒沙门菌的致病性,但oppD、oppF基因缺失可增强鼠伤寒沙门菌的致病性,以上结果为沙门菌的致病机制研究提供了理论基础。

点按法的力学参数及作用机理研究概述

通过查阅知网、万方等学术平台数据库,以推拿手法&点按、力学参数、起效机理等关键词为条件组合检索,梳理推拿点按手法的相关文献,对近年与点按法的力学参数和作用机理相关的研究进行归纳、分析,探讨现代手法实验研究存在的局限,进一步为点按等推拿手法的量化、标准化引出新思路。

抗性淀粉用于微胶囊制备的研究进展

抗性淀粉是一种新型的膳食纤维资源,具备多种保健功能,由于其功能特性而日益受到人们的关注,且许多研究表明,抗性淀粉能降低糖尿病、结肠癌等疾病的发病风险。目前全球大约有1/3人口处于"三高"、超重、肥胖等营养不良的状况,亟需引导人们养成健康的生活习惯。前人研究表明抗性淀粉在胃和小肠中不被消化吸收,而在结肠中被微生物菌群发酵产生多种短链脂肪酸和气体,继而发挥益生作用。该文综述用于制备微胶囊的抗性淀粉种类(RS2、RS3、RS4)及其理化性质,其可有效保护益生菌的生长、可作为缓释载体、具有良好的挤出和膜成型质量,初步分析抗性淀粉基微胶囊的制备方法。此外,还归纳其在营养补充剂,缓释载体体系,以及作为益生元促进益生菌的增殖中的应用,以期为我国抗性淀粉产业提供参考。

不同经口留置胃管方法在气管插管患者中的应用比较

目的比较空肠营养管导丝辅助和可视喉镜下经空肠营养管导丝辅助两种改良技术与传统技术留置胃管置管成功率、置管时间和不良事件发生率方面的差异。方法选择2020年1月至2021年12月嘉兴市第一医院收治的60例重型颅脑损伤伴颅底骨折或鼻骨骨折、鼻出血的气管插管患者作为研究对象,将患者按随机原则分为空肠营养管导丝辅助组(在空肠营养管导丝辅助下经口留置胃管)、可视喉镜下导丝辅助组(可视喉镜下,在空肠营养管导丝辅助下经口留置胃管)和传统手法组(采用传统方法经口留置胃管),每组20例。观察3组置管成功率、置管时间和不良事件的发生情况。结果与传统手法组比较,可视喉镜下导丝辅助组第1次置管成功率明显升高〔90.0%(18/20)比40.0%(8/20),P<0.05〕,置管时间明显缩短(s:20.85±2.58比35.91±5.07,P<0.05),导管在口腔内盘绕率明显降低〔10.0%(2/20)比55.0%(11/20),P<0.05〕。空肠营养管导丝辅助组与可视喉镜下导丝辅助组、传统手法组置管成功率、牙齿松动和误入气道发生率比较差异均无统计学意义〔第1次置管成功率:70.0%(14/20)比90%(18/20)、40%(8/20),第2次置管成功率:25.0%(5/20)比10.0%(2/20)、15.0%(3/20),牙齿松动发生率:0%(0/20)比10.0%(2/20)、0%(0/20),误入气道发生率:0%(0/20)比0%(0/20)、5.0%(1/20),均P>0.05〕。3组置管过程中均未发生出血现象。结论在气管插管的患者中,为了快速、可靠、成功地插入口胃管,使用导丝和可视喉镜辅助技术均是很好的替代方法。

鼠伤寒沙门菌小RNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpD的表达调控

【目的】探究小RNA(small RNA,sRNA)RybB和伴侣蛋白Hfq对沙门氏菌孔蛋白OmpD表达的调控作用。【方法】以鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium,STM)为研究对象,将含有编码β-半乳糖苷酶的lacZ报告基因的pCE40质粒转入ompD基因单缺失菌株中以获得lacZ报告菌株;在此基础上,利用P22噬菌体转导技术分在lacZ报告菌株中构建rybB全序列缺失、hfq全序列缺失、hfq点序列敲除和hfq序列截短以获得双突变实验菌株,以及rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株。通过β-半乳糖苷酶活性试验和RT-qPCR探究sRNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpD表达的调控作用。【结果】成功在lacZ报告菌中构建rybB全序列缺失、hfq全序列缺失、hfq点序列敲除和hfq序列截短等双缺失实验菌株,以及rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株。与野生型(wild type,WT)菌株相比,在lacZ报告菌株中,hfq基因截短为87个氨基酸序列的突变株中的OmpD蛋白活性下调了2.16%,其余实验株OmpD蛋白的β-半乳糖苷酶活性均呈上升趋势。与WT菌株相比,实验菌株ompD基因转录水平除了STM LT2ΔompD::lacZΔhfq65的上调不具有显著性外,其余实验菌株均显著(P<0.05)上调,其中lacZ报告菌株、rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株ompD基因转录水平上调最明显,为1.83倍。【结论】ompD基因的转录及蛋白表达主要受hfq基因和sRNA RybB的负反馈调节;Hfq的远端面在对ompD基因的转录抑制中起关键作用。通过多个基因突变菌株的构建,阐述了sRNA伴侣蛋白Hfq与孔蛋白OmpD的相互作用关系,探索了Hfq对ompD的调控关键区域,丰富了sRNA的调控理论。

鼠伤寒沙门菌oppCDF基因缺失株的构建及生物学特性分析

利用λ-Red同源重组技术构建鼠伤寒沙门菌oppCDF基因缺失株,并检测其生长特性、运动性、生物被膜形成能力、胞内存活能力及LD50毒力。结果显示,与野生型菌株相比,oppCDF基因缺失株的生长特性无明显变化;oppCDF基因缺失株可降低鼠伤寒沙门菌的运动性;oppC与oppF基因缺失后可提高鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力;同时,oppC基因缺失可降低在RAW267.4细胞内的存活能力和其在小鼠体内的毒力,oppF基因缺失可显著增强在RAW267.4内的存活能力和对小鼠毒力的影响,而oppD基因缺失后其在小鼠体内的毒力和RAW267.4内的存活率均无显著变化。研究表明,oppCDF基因与鼠伤寒沙门菌的运动性、生物被膜形成和毒力密切相关,为进一步揭示鼠伤寒沙门菌致病作用中的复杂调控和机制提供了理论基础。

鼠伤寒沙门菌孔蛋白ompW、ompS、ompD基因突变株的构建及生物学特性分析

为探究孔蛋白基因ompW、ompS、ompD对鼠伤寒沙门菌的生物学特性及毒力的影响,本研究利用λ-Red同源重组系统构建相应突变株,通过检测生长曲线、泳动性、生化特性、体外遗传稳定性、生物被膜形成能力、耐药性、以及半数致死量(LD_(50))来比较鼠伤寒沙门菌标准菌株与各突变株之间的区别。结果显示,相比标准株,ompD和ompW基因突变株对细菌生长速率和运动能力影响较小,而ompS基因突变株的生长速率和运动能力则明显降低;3个突变株均不影响鼠伤寒沙门菌的生化特性,也不影响遗传稳定性,但能不同程度影响其对多种常用抗生素的敏感性,且均导致成膜能力极显著下降(P<0.01);LD_(50)毒力测定中,3个突变株毒力均导致鼠伤寒沙门菌的毒力下降,其中ompS基因突变株毒力下降最明显,LD_(50)为标准菌株的25倍。综上所述,孔蛋白ompW、ompS、ompD基因突变能影响鼠伤寒沙门菌的部分生物学特性。本研究结果为进一步研究孔蛋白ompW、ompS、ompD基因的生物学功能及沙门菌致病性奠定了试验基础。