猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白纳米抗体的筛选及其对病毒复制的抑制效应

为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的特异性纳米抗体,并探究其对病毒复制的抑制效应。使用原核表达系统将PRRSV-GP5蛋白大量表达后经镍柱亲和层析法纯化,使用所获的重组GP5蛋白免疫羊驼,并于第0、14、28、42天时采血,检测羊驼体内抗体效价后分离全血淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录后使用巢式PCR扩增出重链抗体可变区(VHH)片段,并与pCANTAB-5E载体相连后转化入TG1感受态细胞,利用噬菌体展示技术构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库。经连续三轮特异性噬菌体的筛选与富集后,淘选出与PRRSV-GP5蛋白高结合力的纳米抗体,通过间接ELISA方法鉴定其反应原性,后将所获的纳米抗体基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,利用Lipofectamine3000转染至Marc^(-1)45细胞内,与PRRSV分别共孵育0、24、36、48、60、72 h,以探究所筛针对PRRSV-GP5蛋白的纳米抗体于胞内对病毒复制与转录产生的影响。结果表明,成功对PRRSV-GP5蛋白进行原核表达并纯化,得到浓度为2.16 mg·mL^(-1)的重组蛋白,对羊驼三次免疫14 d后,其体内抗体效价高达1∶819200,构建GP5-VHH噬菌体抗体展示文库,库容量达2.93×107 CFU·mL^(-1),插入率为98%。经对噬菌体抗体文库连续三轮淘选富集后,最终获得2株不同氨基酸序列的纳米抗体。间接ELISA结果显示,2株纳米抗体均与PRRSV-GP5蛋白具有良好的亲和力。将2株纳米抗体转染至Marc^(-1)45细胞内,它们分别于36与60 h时显著阻碍PRRSV的复制与转录,展现出了较好的阻碍病毒复制的能力。本研究首次筛选出针对PRRSV-GP5蛋白的特异性纳米抗体,且经验证所筛纳米抗体具备抑制PRRSV在细胞内复制的能力,研究结果为抗PRRSV新型药物的研发奠定了试验依据与物质基础。

乡村小学语文数字教材应用初探

随着新课改的不断深入推进,信息技术与学科教学的融合创新日渐成熟。传统的乡村小学语文课堂教学,存在优质资源获取困难、学生自主探究意识不强等问题,严重制约了小学语文课堂教学效果的提升。中教云数字课程教材云平台的引入,以其丰富的资源库、电子备课、交互式资源授课、组题卷资源作业等多种方式,更新教师教育理论,激发学生学习主动性,有力支持教学活动的开展,实现数字教材与语文课堂教学的深度融合。

促性腺激素释放激素在牦牛睾丸中的免疫组化定位

牦牛属于季节性繁殖牛科动物,且生长在海拔较高的寒冷地带。促性腺激素释放激素(GnRH)可通过下丘脑-垂体-性腺轴作用于性腺,调节性腺发育及生殖功能。为探讨GnRH在牦牛睾丸中的作用机理,本文对牦牛睾丸进行免疫组化SP法染色,研究GnRH在牦牛睾丸不同细胞中的表达特征。结果显示GnRH主要分布于睾丸组织的间质细胞与生精细胞的胞质中,且在生精细胞中呈强表达,间质细胞次之。说明GnRH对睾丸的生殖功能紧密相连,一方面通过性腺轴促进睾酮和精子的生成,另一方面通过旁分泌或自分泌的方式调节生殖激素。

低氧诱导因子HIF-1α在藏羊、绵羊卵巢皮质中表达的探究

选取健康成年的藏羊和绵羊,采其卵巢,并用4%多聚甲醛固定,进行免疫组织化学染色,观察染色结果并检测HIF-1α在藏羊绵羊卵巢皮质中的表达情况。结果发现,藏羊和绵羊卵巢皮质中均见HIF-1α表达,但藏羊组织中的表达明显强于绵羊。这表明在不同氧环境下生长的羊卵巢内,HIF-1α的表达也不同。由此可以得出结论:低氧环境促进了HIF-1α在藏羊卵巢皮质中的表达;进而可以推测:HIF-1α因子在高原环境下对藏羊低氧适应机制的形成起着重要的作用。

离退休人员创新创业意愿及影响因素分析

由于人口增长模式的转变以及供给侧改革的实施,离退休人员在有效的劳动力资源中占比越来越大,本研究以无锡市离退休人员为对象,探究影响离退休人员创新创业的因素。以年龄、性别、文化程度、经济压力等九个方面运用SPSS对问卷数据进行Logistic分析。实证分析发现文化程度、生活满意度、亲朋态度、经济压力程度以及对政策条件的了解程度对离退休人员创新创业意愿有显著的预测效果。

藏羊和绵羊卵巢皮质中VEGF抗体表达强弱初步探究

目的:研究血管内皮生长因子在藏羊和绵羊卵巢皮质中表达分布的不同。方法:选取成年健康的藏羊和绵羊,采集动物卵巢制成石蜡切片,免疫组织化学染色技术处理并检测VEGF在藏羊绵羊卵巢皮质中的表达分布。结果:藏羊和绵羊卵巢皮质中均有VEGF表达但在藏羊组织中的表达明显强于在绵羊组织中的表达。结论:根据VEGF抗体在藏羊和绵羊卵巢皮质中的表达强弱和分布情况,得出低氧可以促进VEGF在藏羊卵巢皮质中的表达,从而猜测VEGF对藏羊能够适应高原环境有着非常重要的作用。