灵芝蛋白质的分离及其免疫活性研究

利用凝胶层析法对灵芝子实体和破壁孢子粉的蛋白初提液进行了分离,通过体外免疫反应初步检测了各蛋白质成分的免疫调节活性。小鼠脾淋巴细胞转化试验表明其中有三种灵芝蛋白体外具有较强的促进淋巴细胞增殖的活性,分别命名为LZP-1,LZP-2和LZP-3,其中来自于灵芝孢子粉的LZP-2和LZP-3用量为50μg/ml时,它们体外促进淋巴细胞的增殖率可达（41.3±3.1）％和（38.7±4.8）％,并且呈现出一定的剂量依赖效应,而来自于灵芝子实体的LZP-1促进淋巴细胞的增殖率较低（18.2±3.9％,使用剂量为50μg/ml）。SDS-PAGE测得它们的相对分子质量分别为67,000,43,000和45,700。该蛋白有可能是灵芝中具有免疫调节活性的成分之一,具有潜在的临床应用价值。

LZ-8基因在大肠杆菌中的表达

根据Murasugi等人发表的LZ 8基因的DNA序列 ,设计了两条引物 ,从灵芝孢子粉的基因组DNA中扩增到LZ 8基因 (3 5 6bp)。利用此基因及pET 3d质粒 ,构建了该基因的原核表达载体质粒 ,进一步将其转化进大肠杆菌HB10 1菌株中获得了表达该基因的基因工程菌株 ,并对IPTG诱导后的LZ 8蛋白进行了初步的SDS

鲨肝刺激物质类似物cDNA片段的克隆及序列分析

目的 :从鲨鱼肝脏中分离纯化肝刺激物质 ,测定N 端氨基酸残基序列 ,根据序列分析结果 ,合成简并引物 ,获得鲨鱼肝刺激物质的cDNA序列 ,并对其进行序列分析 ,比较其与已报道序列的同源性。方法与结果 :通过离子交换和凝胶过滤层析方法 ,从鲨鱼再生肝组织中分离到一种可刺激肝癌细胞株SMMC 772 1增殖活性的多肽 ,命名为鲨鱼肝刺激物质 (sHSS)。进一步通过FPLCMonoQ柱纯化后 ,纯度可达 95 %以上 ,其得率为 4 0mg/kg肝脏 ,SDS PAGE分析表明 :sHSS的分子量约为 1 6 0 0 0Da。对sHSS的氨基酸组分及N 端氨基酸序列进行了分析 ,并根据其N 端氨基酸残基序列设计了一套简并引物 ,利用RT PCR方法从再生肝组织的总RNA中扩增到一大小为 5 0 4bp的cDNA片段 ,序列分析表明其与我们分离到的天然鲨肝刺激物质有一定的差异 ,而与已报道的肝再生增强因子 (ALR)差异较大 ,而与人、鼠以及果蝇中的一种未知功能的蛋白质在氨基酸水平上的同源性较高 ,分别为 84 % ,83%和 5 7% ,这类物质可能在生物机体中发挥重要的生理功能。结论 :通过RT PCR扩增 。

不同性别表型黄瓜基因组中雌性系特异的ACC合酶基因

利用一对引物 (引物 1和引物 2 )分别从雌性系黄瓜 (CucumissativusL .)品种“CORONA”、“DALEVE”和强雌性黄瓜品种“中农五号”、“欧洲八号”的基因组DNA中扩增到一长约 10 2 5bp的ACC合酶基因片段。序列分析表明 :该基因片段与Trebitsh等 1997年发表的ACC合酶基因片段的同源性大于 99% ,认为这两个基因片段应该是同一个基因 ,不同品种来源的该基因的相同性说明了其高度的保守性 ,并暗示了该基因在黄瓜性别决定中的重要作用。此基因片段与其他在不同诱导条件下表达的ACC合酶基因的同源性较低 (小于 70 % )。Southern分析表明此基因片段与黄瓜的性别表型有关 ,是雌性系黄瓜特有的。此基因的存在与黄瓜的雌性表达为“有”和“无”的关系 ,其拷贝数的多少与雌性表达强弱并无直接相关性 ,暗示在黄瓜中另有与雌性表达强弱有关的基因。

现代生物技术在海洋药物研究中的应用

人类进入20世纪80年代以来,世界各国,特别是沿海国家的科研人员在全球范围展开了对海洋生物资源的开发工作,其中海洋生物活性物质扣海洋药物的研究是开发中的热点。随着现代生物技术的发展,包括细胞培养、生物活性物质的分离纯化、高通量筛选、基因工程以及药物的修饰等在内的各种生物技术在其中发挥着重要作用。本文将结合我们在海洋药物研究中的工作,就现代生物技术在海洋天然产物和海洋药物研究领域中的应用作一综述。

木榄幼苗叶片cDNA文库的构建及其表达序列标签分析

应用SMART技术构建了25‰盐度下生长4个月的木榄叶片的cDNA文库,文库滴度为106cfu mL-1,重组率为94.4%,插入片断长度为1～2 kb。从cDNA文库中随机挑选了96个重组克隆进行序列分析,共获得94个表达序列标签(ESTs),经质量控制和聚类拼接后得到81个unigenes,包括5个片断聚合群和76个单一序列。Blastx分析结果表明这些unigenes与GenBank的Nr数据库中已报道的基因具有较高的同源性(E<10-5),它们参与呼吸代谢、光合作用、糖代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢以及不饱和脂肪酸生物合成等重要的生理过程,并与机体的损伤修复、胞吞作用以及PPAR信号途径等相关。

ACC合酶基因(ACSG)可能是黄瓜雌性系的分子标记(英文)

利用本实验室根据已知序列分离得到的ACC合酶基因 (ACSG)为探针对不同黄瓜 (CucumissativusL .)品种(系 )的基因组DNA进行Southern杂交 ,初步分析了该基因与黄瓜性别表型之间的相关性。发现在所检测的 10个不同品系中 ,ACSG与雌性系表型之间存在明显的相关关系 ,而且这种相关关系在不同的实验中具有良好的重复性。ACSG基因可能是鉴定黄瓜雌性系的一个分子标记。

现代生物技术在海洋药用生物资源开发中的应用

以生物技术(BT)为核心的现代高技术在海洋药用生物资源的研究开发领域内发挥着越来越重要的作用,各种“组学”研究技术、基因工程以及生物转化等技术已被广泛应用于海洋药用生物资源的鉴定、天然活性成分的分离纯化和筛选以及海洋药物研究的各个领域中。本文就各种现代生物技术在海洋药用生物资源开发以及海洋天然活性产物研究中的应用情况,结合相关实验室的工作进行介绍,并就其研究前景进行了初步的分析和预测。

干细胞因子的研究与应用

干细胞因子 (SCF)是近 10年来发现的一种重要细胞因子。它在临床上可降低放、化疗的毒副作用 ,还可用于脐带血的培养过程 ,在今后的器官移植和基因治疗方面起重要作用 ;另外 ,利用SCF处理造血干 /祖细胞 ,还可以提高逆转录病毒介导的基因转移效率。本文主要介绍SCF及其受体的结构、细胞分布、表达调控和生物学功能 。

陈化发酵期间烤烟叶面微生物活性及其应用研究

对未发酵、自然陈化及人工发酵期间的烤烟叶面微生物进行了分离、鉴定，并对不同发酵过程中微生物动态变化作了比较，结果表明：未发酵烤烟叶面微生物数量最多，随着自然陈化及人工发酵的进行，叶面微生物数量均逐渐减少，且均以能产生芽孢的芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｕｓ）和梭状芽孢杆菌属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）为优势种群，没有酵母菌的存在。在自然陈化过程中，霉菌数量逐渐减少，至陈化后期，基本上未能检出；而人工发酵过程中霉菌数量有所增加。将分离筛选到的几株优势菌混合配制成生物制剂（ＴＦＡ）用于烟草发酵，结果表明：ＴＦＡ可加速烤烟发酵，提高发酵烟叶品质，同时具有抑制烟叶霉变的作用。

鲨肝活性肽对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 探讨鲨肝活性肽 (sHSS)对对乙酰氨基酚 (AAP)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 用AAP( 2 0 0mg·kg- 1 ,ip)诱导小鼠急性肝损伤 ,用改良赖氏法测血清ALT和AST ,通过光镜和电镜观察肝细胞显微和亚显微结构的变化 ,用流式细胞仪分析肝细胞凋亡 ,同时用RT PCR方法分析FasmRNA表达水平。结果 sHSS 3 0和 1 5mg·kg- 1 可显著降低肝损伤小鼠血清ALT和AST的水平 ;改善模型鼠肝组织细胞坏死及炎症反应 ;高剂量sHSS( 3mg·kg- 1 )对肝线粒体具有保护作用 ,下调FasmRNA的表达水平 ,并具有抗凋亡作用。结论 sHSS对AAP诱导的肝损伤具有明显的保护作用 ,其机制可能与保护肝线粒体、抑制Fas基因表达及肝细胞凋亡有关。

灰树花多糖的研究进展

灰树花多糖是从贝叶多孔菌的子实体或菌丝体中分离到的一种真菌多糖 ,近 2 0年的研究表明其具有显著的抗肿瘤、降血糖、抗肝炎、抗HIV病毒以及改善免疫系统功能等功效 ,现已被开发成多种保健品。文章综述了国内外有关灰树花多糖分离纯化以及相关生物活性的研究工作。

盐胁迫下木榄幼苗叶片的解剖学变化

对梯度盐度下木榄（Bruguiera gymnorrhiza）幼苗叶解剖特征进行观察，并分析木榄适应盐胁迫的形态学变化特点以及盐胁迫对植物生长的影响。在0‰～50‰盐度范围内，木榄胚轴均能正常萌发，但幼苗高度、鲜重以及叶面积与培养盐度之间存在着明显的负相关。随着盐度的增加，木榄叶的上（下）角质层和上（下）表皮层增厚，单宁细胞密度增大，上（下）内皮层变薄，叶肉细胞的胞间隙缩小；栅栏组织厚度因细胞的长度和宽度减小而变薄，而海绵组织厚度与培养盐度之间无明显的相关性，栅栏组织／海绵组织的比率下降。扫描电镜下栅栏组织细胞中的叶绿体数量和形态未见明显的变化，但叶绿体在细胞中的位置发生了改变。因此，盐胁迫下叶片栅栏组织厚度的下降、海绵组织中胞间隙的减少以及叶肉细胞中叶绿体的分布变化可能是导致植株光合效率下降和幼苗生长受阻的重要原因。

条纹斑竹鲨鱼再生肝组织cDNA质粒文库的构建和鉴定

建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生24h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA,纯化了mRNA,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT)16为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3'末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT)16和含HindIII酶切位点的Oligo(dG)10为引物,通过LD-PCR (long- distance-PCR)方法合成双链cDNA,将双链cDNA经BamHI和HindIII双酶切,通过T4DNA连接酶连接到经相同酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库.对文库质量的分析结果表明,通过本方法构建的鲨鱼再生肝组织cDNA文库容量至少为4.92×105个/μg dscDNA,重组率达96.7%.对随机提取30个克隆的质粒进行分析,获得了其中25个插入片段的序列,未见重复序列,经与GenBank和dbEST数据库比对分析发现新基因在其中占较大的比例(76%).鲨鱼再生肝组织cDNA文库的成功构建为进一步通过差异显示技术筛选、克隆肝再生过程中差异表达的相关功能基因奠定了一个良好的基础.

海洋青霉属真菌菌株XGH2321抑菌活性代谢产物的分离与鉴定

目的从青霉属真菌XGH2321的发酵液中分离抑菌活性次级代谢产物。方法发酵液经乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱层析、C18柱制备色谱分离获得单体,并对化合物进行结构鉴定及活性测试。结果从菌株XGH2321的乙酸乙酯提取物中分离得到3个己酮烯类化合物及1个酯类化合物,根据化合物的光谱特征(ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR)和理化性质分别鉴定为sorbicillin(1),2',3'-dihydrosorbicillin(2),2,3-Dihydro-7-hydroxy-6,8-dimethyl-2-[(E)-prop-l-enyl]chromen-4-one(3)和dibutylphthalate(4),其中化合物3和4对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的生长具有明显的抑菌活性,化合物1、2、3对白色念珠菌(Candida albicans)的生长具有明显的抑菌活性,化合物1和2对烟曲霉(Aspergillus fumigatus)对的生长具有明显的抑菌活性。结论化合物2和3的抗MRSA作用,化合物1和3的抗白色念珠菌作用及化合物1、2和3的抗烟曲霉作用属首次报道。

不同陈化时期烤烟几种酶活性及相关化学成分的分析

对不同陈化时期烤烟中的α－淀粉酶、蛋白酶、脂氧合酶、多酚氧化酶和琥珀酸脱氢酶活性进行了测定，结果表明：α－淀粉酶、蛋白酶和脂氧合酶活性在陈化过程中均表现为前期升高，而后期下降的单峰曲线。烤烟细胞内的多酚氧化酶和琥珀酸脱氢酶活性在陈化前较高，在陈化过程中逐渐下降。不同陈化时期的五种酶活性及有关成分表明。

红海榄内生真菌AGR12及其抑菌活性代谢产物

目的鉴定一株分离自海南文昌红海榄茎的内生真菌菌株AGR12,分离和鉴定其抑菌活性代谢产物。方法根据菌株的形态学特征和ITS序列鉴定菌株AGR12。通过硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、制备薄层层析及重结晶等方法分离纯化代谢产物,并根据它们的紫外、质谱、氢谱和碳谱等光谱数据确定化合物结构。结果菌株AGR12被鉴定为镰孢霉属木贼镰刀菌(Fusarium equiseti),其在优化后的GMPY培养基中28℃、160r/min振荡培养7d后获得的发酵液具有明显的抑菌活性。从发酵液及菌体中共分离到3个化合物,鉴定为equisetin、epi-equisetin和麦角甾醇(ergosterol),其中equisetin对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制活性,最低抑菌浓度(MIC)均为32μg/mL;epi-equisetin对枯草芽孢杆菌的生长也具有明显的抑制作用,MIC为32μg/mL。结论木贼镰刀菌菌株AGR12为首次从红树植物中分离到的内生真菌,其分泌的代谢产物equisetin和epi-equisetin具有明显的抑菌活性。

聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用

目的 :探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT PCR中的应用。方法 :提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA ,逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板进行PCR扩增 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系。结果 :PCR扩增反应在第 2 0～ 2 5个循环 ,起始模板量为 0 8～ 2 4 μg时 ,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系。 结论 :通过控制起始模板量 ,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术 。

浙贝母根际土壤总DNA提取和纯化方法的比较

本研究通过对6种土壤总DNA提取方法(CTAB-SDS-冻融法、玻璃珠-SDS-酚氯仿抽提法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-SDS法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-溶菌酶法、玻璃珠-聚乙烯聚吡咯烷酮-冻融法和UltraClean试剂盒法)和4种纯化方法(改进琼脂糖凝胶电泳法、2%聚乙烯吡咯烷酮-琼脂糖凝胶电泳法、PVPP层析柱法和低熔点琼脂糖电泳法)的比较,证明利用20 mmol/L EDTA(pH 7.5)预处理土壤后,利用CTAB-SDS-冻融法提取土壤总DNA并经改进琼脂糖凝胶电泳法纯化获得的浙贝母根际土壤总DNA的得率和纯度相对较高,达44.00μg/g±2.65μg/g土壤,可用于后续基于16S rDNA分析基础上的土壤微生物分子生态学的分析工作。

红树植物秋茄根提取物的体外抑菌与抗肿瘤活性

目的红树植物秋茄(Kandelia candel)根提取物的体外抑菌和抗肿瘤活性筛选。方法采用微量稀释法和MTT法测定各提取部位的体外抑菌和抗肿瘤活性。结果秋茄根的石油醚提取物体外对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽胞杆菌和藤黄八叠球菌的最低抑菌浓度(MIC)分别是3.13、1.56、0.78和3.13mg.mL-1,而乙酸乙酯和乙醇提取物体外对表皮葡萄球菌的MIC分别为3.13和6.25 mg.mL-1;此外,石油醚提取物体外对人肝癌细胞SMMC-7721、小鼠黑色素瘤细胞B16、人胃癌细胞BGC803和肝癌细胞株HepG2的半数抑制浓度(IC50)分别为355.2、378.6、275.6和411.6μg.mL-1,而其它提取物则对肿瘤细胞的增殖具有明显的刺激作用。结论秋茄根的各有机溶剂提取成分分别具有不同的生物活性,具有潜在的药用开发价值。