‘无子瓯柑’E3泛素连接酶基因CsRNF217对转基因烟草育性的影响

【目的】为了验证‘无子瓯柑’Citrus suavissima‘Seedless’E3泛素连接酶基因CsRNF217对雄蕊育性的影响,采用异源转化获得过表达CsRNF217的转基因烟草Nicotiana tabacum,分析其对烟草育性的影响。【方法】采用亚历山大染色法、花粉离体培养法、杂交授粉后的结实率分析野生型烟草及转基因烟草自交1代(T1)阳性株系的花粉活力及胚囊育性,利用半定量RT-PCR分析基因CsRNF217在转基因烟草T1阳性株系花药中的表达强弱。【结果】‘无子瓯柑’CsRNF217在转基因烟草自交T1株系中高效表达,转基因株系的花粉染色活力和离体萌发率、自交结实率、以及与野生型的正反交结实率均显著低于野生型(P<0.05)。【结论】过表达CsRNF217的烟草植株花粉育性显著下降,同时伴随胚囊育性下降的现象,推测CsRNF217基因对‘无子瓯柑’雌雄育性存在负向调控的作用。

香榧新品种磐月榧的选育

磐月榧是从磐安县香榧古树中选育出的新品种。磐月榧种实、种核、种仁形状均为长倒卵形,部分为弯长形。磐月榧平均单种质量8.0 g,种子纵径3.78 cm,横径1.85 cm,种形指数2.05,假种皮厚0.37 cm,鲜出核率32.87%,干出核率63.56%。种核、种仁长倒卵状椭圆形,部分为弯长形,平均单核鲜质量2.7 g,纵径3.55 cm,横径1.14 cm,核形指数3.11,骨质中种皮厚0.07 cm,干出仁率70.12%。平均单仁干质量1.2 g,含油率55.4%,可溶性糖含量(w,后同)6.16%,蛋白质含量8.92%,炒制后脱衣方便,质地松脆。磐月榧在种子外观上与当前主栽种细榧明显不同,与磐安长榧很相似,但通过SSR分子标记进行遗传鉴定表明,磐月榧与磐安长榧在DNA水平上存在明显的差别,是两个不同的品种。磐月榧在浙江省会稽山脉海拔200~800 m的山地中栽培生长良好,其栽培技术要求与细榧相同。

无子瓯柑E3泛素连接酶基因CsRNF217的克隆与功能分析

【目的】无子瓯柑是其野生型的雄性不育突变体。基于转录组-代谢组关联分析,克隆无子瓯柑E3泛素连接酶基因CsRNF217,分析其序列特征、表达模式、亚细胞定位及基因功能。【方法】采用生物信息学方法分析无子瓯柑CsRNF217基因序列特征;利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析时空表达模式;根据转基因烟草表型特征分析基因功能,采用烟草瞬时表达分析其亚细胞定位。【结果】无子瓯柑CsRNF217基因cDNA全长768 bp,编码255个氨基酸,具有RING型E3家族典型结构域。qRT-PCR结果显示,无子瓯柑CsRNF217基因在雄蕊中表达量最高,在小孢子发育后期上调表达。过表达转基因烟草的种子数量和花粉活力显著下降。烟草叶片瞬时表达的荧光信号特异位于细胞核。【结论】无子瓯柑CsRNF217基因编码RING型E3,定位于细胞核,在雄蕊中表达量最高,在花粉发育晚期上调表达,推测对无子瓯柑和过表达转基因烟草的花粉发育过程可能起到负向调控作用。