土人参Actin基因片段的克隆及序列分析

为土人参功能基因的表达与调控提供内参基因,根据已知植物Actin基因的保守区设计简并性引物,采用RT-PCR方法扩增得到土人参的Actin基因片段,将该片段连接于p GEM-T载体,测序获得一段大小为598 bp的基因片段,该片段编码198个氨基酸。通过生物信息学软件分析,该序列与其他植物Actin基因的cDNA序列同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性达到86%以上,表明试验克隆所得基因片段为土人参Actin基因片段。将该Actin基因片段命名为TpActin1,并登陆在Gena Bank,登录号为MH333039。

番杏TtASR基因的克隆及其抗逆功能分析

ASR(ABA, Stress and Ripening)蛋白是植物中特有的亲水性小分子蛋白,在植物细胞失水条件下对细胞器起保护性作用。本研究在构建番杏[Tetragonia tetragonioides (Pall.) Kuntze]全长cDNA文库中通过随机克隆测序分析基础上,获得了一个编码番杏ASR蛋白的全长cDNA序列,命名为TtASR(GenBank登录号:MH454101)。TtASR的cDNA全长序列包含一个为723 bp完整开放阅读框,编码蛋白TtASR含有240个氨基酸,等电点为5.26,分子量为25.29 ku。对TtASR与其他植物中同源蛋白的进化分析表明,与辽宁碱蓬SlASR和海蓬子SbASR-1亲缘关系较近。将TtASR的cDNA阅读框插入到原核表达载体pGEX6p-1中,通过转化大肠杆菌进行原核表达分析。结果表明,重组大肠杆菌菌株能表现出良好地抗逆性,特别是对NaCl、高渗透压和氧化胁迫的抗逆性增强。

番杏Actin基因片段的克隆及生物信息学分析

本实验为研究番杏（Tetragonia tetragonioides）功能基因表达模式提供内参基因,根据登录在NCBI上植物的Actin基因的保守区域设计简并性引物,通过RT-PCR克隆获得番杏的Actin基因片段,将该片段连接于载体pGEM-T后进行测序,并将该基因序列通过生物信息学软件进行分析。结果显示,克隆所得基因片段大小为598 bp,编码198个氨基酸;该序列与登录在NCBI上的其他植物的Actin基因的核苷酸序列的同源性最大可达86%以上,编码蛋白的氨基酸序列同源性在88%以上。结果表明,本研究克隆所得的基因序列为番杏Actin基因片段。该基因命名为TtActin1,在Gen Bank的登录号为MH33308。

香蕉cDNA文库构建及镉胁迫耐受基因的初步筛选

为分离香蕉镉胁迫耐受相关基因,以香蕉为材料,用100μmol/L氯化镉处理诱导香蕉根系3 d,利用gateway技术构建香蕉c DNA文库。经检测,文库滴度为2.0×106 CFU/m L,库容量为8.0×106 CFU/m L,插入平均片段大于1 kb,片段分布在500～2 000 bp,重组率为100%。将该文库质粒转入对Cd敏感的酵母突变株ycf1Δ,采用FOX技术(Full-length c DNA over-expression gene hunting system)进行筛选,同时进行酵母互补实验功能验证,获得1个能够恢复ycf1Δ对镉敏感表型的重组质粒,测序分析得到此重组质粒包含的cDNA全长序列是香蕉快速碱化因子(MaRALF)。结果认为此基因为香蕉体内编码Cd耐受的候选基因。本研究为香蕉MaRALF基因挖掘更多的功能及完善香蕉在逆境胁迫环境中的机理提供了理论依据。