乙型肝炎病毒X蛋白对肝细胞癌生长因子激活作用的研究

目的研究乙型肝炎病毒Ｘ（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ，ＨＢｘ）蛋白对生长因子激活作用，探讨ＨＢｘ蛋白对肝细胞癌生长的影响。方法构建Ｘ基因真核表达载体，转染入ＨｅｐＧ_２细胞后，细胞组织化学和免疫印迹法检测胰岛素样生长因子－Ⅰ受体（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ⅰ ｒｅｃｅｐｔｏｒ， ＩＧＦ－ ＩＲ）和血管内皮生长因于（ａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔ－ｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）表达。结果转染ＨＢｘ基ＨｅｐＧ_２细胞（Ｘ细胞）ＩＧＦ－ＩＲ表达阳性率为８４％±３％，转染空载体对照细胞（Ｘ_ｏ细胞）为２６％±４％；免疫印迹法检测Ｘ细胞有明显条带。 ＶＥＧＦ表达Ｘ细胞阳性率为８３％±５％， Ｘ_０细胞为２８％±６％、差异有非常显著意义；Ｘ细胞ＩＧＦ－ＩＲ表达增高近１．５倍。结论 ＨＢｘ蛋白可同时激活ＩＧＦ－ＩＲ和ＶＥＧＦ，在肿瘤恶性生长、转移中起有重要作用。

乙肝病毒X 基因真核表达载体的构建及其表达

目的 为探讨 Ｈ Ｂ Ｖ Ｘ 基因在肝细胞癌（ Ｈ Ｃ Ｃ） 中的致瘤机理提供实验模型。方法 用限制性内切酶从ｐ Ｅｃｏｂ６ 上切下 Ｘ 基因读码框，克隆到ｐ Ｂ Ｋ Ｓ＋ 上，再将 Ｘ 片段插入ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４ 的 Ｈｉｎｄ Ⅲ和 ＮｏｔⅠ位点间。将重组载体（ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４ Ｘ） 和空载体（ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４） 导入肝癌细胞株 Ｈｅｐ Ｇ２ 中，潮霉素选择培养， Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 鉴定其稳定表达。结果 构建的ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４ Ｘ 质粒在 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞中有稳定表达。结论 本实验为进一步探讨 Ｈ Ｂ Ｖ Ｘ 基因在 Ｈ Ｃ Ｃ 中的致瘤机理提供了理想的实验细胞株。

乙肝病毒x基因致肝细胞癌机理探讨

构建ＨＢｘ基因真核表达载体，导入ＨｅｐＧ２细胞中，无血清培养同步化后，Ｗｗｓｔｅｒｎ杂交检测ＨｅｐＧ２－Ｘ细胞ＩＧＦ－Ｉ Ｒ，ＰＣＮＡ和ＶＥＧＦ表达增强，但无ｐ２１＾ＣＩＰ１／ＷＡＦ１表达，流式细胞检测细胞周期，ＨｅｐＧ－Ｘ０细胞７０％进入Ｇ０～Ｇ１期，而ＨｅｐＧ２－Ｘ细胞仅５０％进入Ｇ０～Ｇ１期，与血清增减亲本ＨｅｐＧ２细胞几乎相同，ＨＢｘ基因增加ＩＧＦ－Ｉ Ｒ表达，通过信号通路到细胞核。

乙型肝炎病毒x蛋白对细胞周期的影响

目的 研究乙型肝炎病毒ｘ（ Ｈ Ｂｘ） 蛋白对细胞周期影响，探讨 Ｈ Ｂｘ 蛋白致细胞周期紊乱的分子机理。方法 构建 Ｈ Ｂｘ 基因真核表达载体ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４ Ｘ，电转染入 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞（ Ｘ 细胞） ，以ｐ Ｃ Ｅ Ｐ４空载体为对照（ Ｘ０ 细胞） ，潮霉素选择培养，克隆扩增转染细胞，经无血清培养同步化后，流式细胞仪检测细胞周期变化；细胞组化和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测增殖细胞核抗原（ Ｐ Ｃ Ｎ Ａ） 和ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ 表达变化。结果 流式细胞仪检测示对照 Ｘ０ 细胞７０ ％ 进入 Ｇ０ Ｇ１ 期，而转 Ｘ 细胞仅５６ ％ 进入 Ｇ０ Ｇ１ 期，与含血清培养的亲本细胞 Ｈｅｐ Ｇ２ 几乎相同。ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ Ｄ 表达在 Ｘ０ 细胞阳性率为（８６ ±８） ％ ， Ｘ 细胞为（１６ ±６） ％ 。 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达在 Ｘ０ 细胞阳性率为（９ ±５） ％ ， Ｘ 细胞为（８６ ±３） ％ 。结论 Ｈ Ｂｘ 有推进细胞周期作用，并使细胞生长对血清依赖减少。 Ｈ Ｂｘ 可抑制细胞周期抑制蛋白ｐ２１ Ｃ Ｉ Ｐ１／ Ｗ Ａ Ｆ１ 表达，同时增强细胞 Ｄ Ｎ Ａ 合成。

The role of hepatitis B virus x gene in development of primary hepatocellular carcinoma

Primary hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common cancers occurring in human, and there is strong epidemiological evidence suggesting that persistent hepatitis B virus (HBV) infection is the most important risk factor for its development. HBx gene was found to be a transactivator recently. Its continuous expression in hepatocytes may transactivate cellular genes which can play a certain role in development of HCC. The HBx gene fragment was used to construct a recombinant eukaryotic expression vector pCEP4 and introduced into HepG2 cells. The effect of HBx gene on HCC cells growth and its molecular mechanism in HCC cells regulation were investigated.