黄参多糖提取工艺参数优化

以水提醇沉法提取黄参多糖,用硫酸-苯酚比色法测定黄参多糖含量。通过单因素试验和Box-Behnken试验,对黄参多糖提取工艺参数进行优化。结果表明:黄参多糖的最佳提取工艺为料液比1:26.7(g/mL)、浸提温度90℃、浸提时间67min、浸提2次,在此条件下,多糖得率为3.41%。

仙茅根繁殖育苗试验研究

为了完善仙茅人工栽培和仙茅根繁殖体系,以四川、湖南、贵州、广西、云南收集的仙茅为实验材料,研究了不同地区,不同根部位、根年龄、根直径和根切割长度的仙茅根繁殖成活难易情况,并对四川仙茅成活率的条件（生根剂种类、浓度、侵根时间、根茎繁殖部位）进行优化。结果表明,不同地区仙茅根繁殖成活情况存在差异,四川仙茅成活率最高为47.3%,根上段繁殖成活率高达76%。选择栽培3~5 a、直径为1.0~1.2 cm、切割长度为3 cm的仙茅主根上段,浓度为200 mg/ml的NAA处理30 min的组合能较大程度地提高仙茅成活率。

林下仙茅栽培技术研究

[目的]探索林下仙茅栽培模式,实现高效利用林地资源,解决林地、仙茅栽培的突出问题。[方法]采用自然生长模式,只用接近自然化的人工栽培模式,实现最大成活率以及收益效果。[结果]广州从化仙茅种植基地的土壤质量评价为污染程度为安全,污染水平为清洁,到2016年林下仙茅集约化栽培的成活率为74.7%±1.43%,而林下非集约化栽培成活率为40.70%±1.04%,非林下集约化栽培成活率为45.60%±2.18%,非林下非集约化栽培成活率为38.40%±1.41%。[结论]林下仙茅生长周期长,成活率逐年降低,试验地内生长在林下仙茅成活率明显好于非林下地段,说明林下仙茅成活率与生长环境密切相关;林下集约化栽培可增强与林下其他物种之间的竞争还可以抵抗暴雨的冲刷,从而减少仙茅的死亡率。

Aβ_(1-42)对大鼠小胶质细胞酸敏感离子通道的表达和电生理特性的影响

Aβ_(1-42)与小胶质细胞之间相互作用诱发的神经炎症反应已被视为阿尔茨海默病(AD)的重要病理指征,酸敏感离子通道(ASIC)参与了小胶质细胞的炎症应答和神经炎症免疫调节。为了探究Aβ_(1-42)对小胶质细胞ASIC的表达和电生理特性的影响,本研究利用Aβ_(1-42)孵育原代培养的SD大鼠大脑皮层小胶质细胞,免疫印迹技术和免疫荧光技术检测小胶质细胞ASIC1、ASIC2a、ASIC3的蛋白表达和分布情况,全细胞膜片钳记录Aβ_(1-42)对ASIC电流特性的影响,钙离子成像技术分析ASIC钙离子通透性的变化。结果显示:Aβ_(1-42)处理小胶质细胞后,能够诱导ASIC1的蛋白表达量增加,且其在细胞浆和细胞核中均有明显增加;胞外pH值快速降低诱发的ASIC电流,小胶质细胞胞内钙离子浓度明显增强,这种增强效应可被ASIC非特异性抑制剂阿米洛利和ASIC1特异性抑制剂PcTx1抑制。本研究结果表明,Aβ_(1-42)诱导小胶质细胞ASIC1蛋白功能性表达增加,使得ASIC1易于被胞外快速酸化激活而表现出明显增强的电生理特性,进而影响小胶质细胞的炎症应答和免疫调节作用,为后续探究小胶质细胞感应通路和应答调节及神经退行性疾病发生提供了思路和参考。

SARS-CoV-2 NP和NP-FlaB融合蛋白的免疫原性研究

新型冠状病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染引发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情在全球持续流行,疫苗的研发和推广使用是阻止新冠疫情的关键手段。SARS-CoV-2核衣壳蛋白(NP)作为病毒的主要结构蛋白,是疫苗开发的潜在候选靶点。鞭毛素B(FlaB)可作为免疫佐剂,增强抗原的免疫原性。本研究对NP和NP-FlaB融合蛋白的免疫原性开展了研究,利用大肠杆菌表达系统分别表达纯化了NP、NP-FlaB融合蛋白,将抗原通过皮下或鼻内途径免疫BALB/c小鼠,分析血清中NP特异性免疫球蛋白G(IgG)、黏膜中NP特异性免疫球蛋白A(IgA)和NP特异性细胞因子分泌的T细胞应答。结果表明:一次皮下免疫NP或NP-FlaB融合蛋白足以引起抗NP的血清IgG抗体反应,能有效诱导分泌白细胞介素4(IL-4)的NP特异性效应T细胞,但NP和NP-FlaB融合蛋白组别之间无显著性差异;鼻内途径免疫下,NP-FlaB融合蛋白免疫组血清中NP特异性IgG抗体滴度和肺内黏膜IgA抗体滴度显著高于NP组。整体结果显示,SARS-CoV-2 NP和NP-FlaB融合蛋白具有很强的免疫原性,NP-FlaB融合蛋白能引起黏膜免疫应答,两者均可作为SARS-CoV-2疫苗的候选蛋白。SARS-CoV-2 NP及NP-FlaB融合蛋白的免疫原性的探究为后续新冠病毒NP疫苗开发提供了新的思路和参考。

葡萄籽原花青素抑制小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的影响

目的:研究葡萄籽原花青素对小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的抑制作用,并对其机理进行初步探究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测小鼠B16黑色素瘤细胞增值率;左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活;Na OH裂解法测定黑色素合成;分别采用RT-PCR法和Western-blotting法检测B16-F0细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达水平。结果:葡萄籽原花青素显著抑制B16黑色素瘤细胞的增殖,且与浓度和作用时间相关;12.5~200μg/ml浓度范围的葡萄籽原花青素显著抑制细胞酪氨酸酶活性及黑色素生成。当葡萄籽原花青素浓度为200μg/ml作用时间为48 h时,对B16-F0细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制效果最佳。此外,与对照组相比,经浓度为100μg/ml和200μg/ml,作用时间为48 h的葡萄籽原花青素处理,B16-F0细胞内TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论:葡萄籽原花青素抑制B16黑色素瘤细胞的增殖及黑色素的合成,其机制可能是通过抑制TYR、TRP-1、TRP-2的表达,进而抑制酪氨酸酶活性实现的。

仙茅种源试验研究

筛选优良的仙茅(Curculigo orchioides Gaertn.)种源,以提高仙茅的产量和质量。以来自广西、云南、四川、贵州、湖南的15个种源地的仙茅为研究材料,在广州从化进行种源比较试验。在种源试验当中不同种源间的仙茅叶数以及根茎长和根粗都没有显著的差异(P>0.05),根据综合评价值综合值排名第一的是SC-X-3,综合值为7.6638,排名第二的是SCX-1,综合值为7.309 2,排名第三的是HN-X-1,综合值为6.761 3。经过种源试验后表明大叶仙茅可以作为观赏植物,不可以当做优良药材的种源,整个试验在生长情况稳定、产量和质量最高的前提下编号为SC-X-1在栽培过程中仙茅含量更接近野生仙茅的仙茅苷含量,根据综合评价值SC-X-3、SC-X-1、HN-X-1 3个地理种源可作为优良种源。

仙茅愈伤组织诱导和细胞悬浮培养体系的建立

为初步建立仙茅(Curculigo orchiodes Gaertn)细胞悬浮培养体系。以仙茅幼叶为外植体,诱导产生愈伤组织后进行仙茅细胞悬浮培养研究。以MS为基本培养基,研究了植物生长调节剂对仙茅愈伤组织诱导和继代的影响,以及接种量,2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),蔗糖,水解酪蛋白,2-氮吗啉乙烷磺酸(MES),L-脯氨酸(L-Pro)对仙茅细胞悬浮培养的影响。结果表明:仙茅愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L,所得的愈伤组织颜色淡黄,质地疏松,诱导率达100%;最佳继代培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,平均增殖倍数达10.8。仙茅细胞悬浮培养最佳培养基和培养条件为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L,接种量75 g/L,水解酪蛋白300 mg/L,MES 2 g/L,L-Pro 700 mg/L,摇床转速120 r/min,25℃光照培养,光照时间12 h/d,光照强度1 200 lx。该条件下悬浮细胞生长良好,最大生长量为(9.68±0.2)×10^5个/mL。初步选择出仙茅愈伤组织细胞的悬浮培养条件,也为仙茅细胞扩大培养及有效成分的提取提供物质基础。