TPO模拟肽与人IgG1Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达及活性鉴定

构建TPO模拟肽与人IgG1Fc融合蛋白的酵母表达体系。利用PCR技术 ,从重组质粒pET2 8a TMPFc中 ,扩增TPO模拟肽与人IgG1Fc的DNA片段 ,连入pPICZαA酵母表达载体 ,电激法转化毕赤酵母。用MDH和MMH筛选具有正确表型的重组转化子 ,PCR、蛋白质印迹鉴定融合基因。MTT法鉴定TMPFc对Ba F3 mpl细胞生长的促进作用。构建的重组毕赤酵母实现了TMPFc的分泌表达 ,表达量占外分泌蛋白质的 6 5 %。表达蛋白质的相对分子量约6 4kD ,对Ba F3 mpl生长具有促进作用。TMPFc酵母表达体系表达出可观的二价模拟肽 ,为二价TMP活性的定量研究奠定基础。

碎屑岩成岩过程中各种造岩矿物溶解特征的热力学模型

不同温压条件下,与碎屑岩在成岩过程中各种造岩矿物溶解相关的7个反应吉布斯自由能增量(ΔG)和平衡常数(K)的计算结果说明:各种造岩矿物(钾长石、钠长石、钙长石以及铁镁暗色矿物中的辉石、角闪石等)在成岩过程中的稳定性都较弱、抗溶蚀能力不高;铁镁暗色矿物和中-基性斜长石在碎屑岩的成岩条件酸性介质中,比酸性斜长石和碱性长石更易发生溶解形成次生溶蚀孔隙,为油气的储集和运移提供空间和通道.

集美大学2002级福建籍新生肝炎感染现状

目的 了解集美大学 2 0 0 2级福建籍新生甲、乙、戊 3型肝炎感染情况。方法 采用血清流行病学调查方法。结果 学生中抗HAV -IgG ,HBsAg和抗HEV -IgG阳性率分别为 77.0 8% ,1 5 .2 3 % ,1 7.1 5 % ,地区差异明显 ;HAV ,HEV无性别差异 ,而HBV以男性为高 ;农村HAV和HBV感染率均高于城镇 ,而HEV感染率无城乡差别。结论 应该加强对本地区大学生的甲、乙肝预防 。

前寒武纪——早古生代沉积岩显微组分分类、成因及演化

前寒武纪—早古生代沉积岩时代古老、生源简单,但有机显微组分面貌却很复杂。通过对大量国内外自然演化和人工熟化系列样品的观察和分析,基于生源、成因、沉积转化及热成熟作用4个主控因素,提出将古老沉积岩的显微组分划分为类镜质组、腐泥组、固体沥青组、动物有机碎屑组和惰质组。低成熟的古老海相烃源岩的显微组分组成以层状藻类体、沥青质体和矿物沥青基质为主;高-过成熟的古老海相烃源岩的显微组分组成以源内固体沥青为主;笔石表皮体常见于五峰组-龙马溪组页岩,是其中有机质的重要组成部分。进一步分析了其中最具特征且以往易被忽视的显微组分的成因,前寒武纪样品中类镜质组颗粒的成因可能为早期成岩过程低等水生生物遭受微生物降解所形成;源内固体沥青为经一次运移残留在烃源岩内的可溶有机质裂解后的固体残留物或者腐泥组残余干酪根吸收同化可溶有机质后的热演化固相产物。通过自然演化系列样品和热模拟样品的综合研究,明确了中国高-过成熟的前寒武纪、寒武纪和奥陶纪—志留纪含笔石页岩有机质的“前世”分别类似于中元古代下马岭组、寒武纪Alum页岩和奥陶纪含笔石Alum页岩有机质的“今生”,提出笔石表皮体、类镜质组颗粒和源内固体沥青反射率都可以用于表征前寒武纪—早古生代海相烃源岩有机质热演化程度。

戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位间的构象诱导

重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394～606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,8H3对8C11和13D8均不能阻断,而8C11非但不能阻断8H3,反而显著增强了8H3与抗原的结合。用生物传感器进行的抗体与抗原结合的动力学分析也证实了这一现象。这些结果提示,在NE2上8H3表位区域受到抗原上某些结构的掩盖,而8C11与NE2的结合引起了抗原空间结构的改变,导致了掩盖8H3表位的结构的去除和8H3表位的充分暴露。免疫捕获RT PCR发现,8C11同样可以显著增强8H3对天然HEV病毒的捕获能力,提示这种结合诱导的衣壳蛋白空间构象改变在天然HEV病毒颗粒上同样存在。

血小板生成素研究进展

血小板生成素(TPO),即C-Mpl配体,是巨核细胞增殖、成熟,也是血小板产生的主要调节因子。TPO纯化后,TPO各个领域的研究发展迅速。本文综述TPO在基因、蛋白结构,信号转导、表达调控和临床应用等领域的研究进展。

重组戊型肝炎氢氧化铝佐剂疫苗的磷含量与免疫效力关系研究

目的探索氢氧化铝佐剂戊肝疫苗的免疫原性与疫苗中PO_4^(3-)浓度的关系,并分析抗体滴度与抗原在羊淋巴液中吸附率有无相关性。方法用不同浓度PO_4^(3-)处理氢氧化铝佐剂制备试验疫苗,腹腔免疫Balb/c小鼠,ELISA法定量检测免疫后不同时间血清抗体滴度,同时采用钼酸铵还原法检测试验疫苗离心沉淀中的磷含量,根据兰格缪尔方程计算抗原在含不同浓度PO_4^(3-)的佐剂表面的最大吸附量(Γm)。试验疫苗在羊淋巴液中的抗原吸附率采用ELISA法检测。结果随疫苗中PO_4^(3-)浓度增加,抗原最大吸附量(Γm)减小,抗原在羊淋巴液中的吸附率下降,免疫血清抗体滴度渐次增加,直至达到平稳状态。结论在一定范围内增加疫苗磷酸根含量可减小抗原在羊淋巴液中吸附率,降低佐剂对抗原的吸附程度,提高疫苗免疫抗体滴度。

人类细小病毒B19核酸检测方法的建立及方法学验证

目的:建立人类细小病毒B19实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测方法,并对该方法进行方法学验证。方法:针对B19病毒三种基因型的高度保守区设计特异性引物和探针,建立B19 Q-PCR标准曲线。并分别从检测限和定量限、型别覆盖能力、特异性、定量范围及定量线性、精密度、回收率、不同机型、以及不同混样模式进行方法学验证。结果:当B19病毒定量参考品范围为2.0×10^(1)~1.0×10^(8) IU·mL^(-1)时,R^(2)>0.99,扩增效率>97.2%,线性范围相关性良好。定量下限为20 IU·mL^(-1),检测下限为10 IU·mL^(-1),针对B19病毒3种基因型样本均能检出,具有相同的定量下限和检测下限。特异性结果显示,本方法检测甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒1型、人巨细胞病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1型、梅毒螺旋体等核酸阳性血浆,均无非特异反应,且在上述病原体存在的情况下,B19病毒的定量下限和检测下限均能稳定检出,不受干扰。回收率结果显示,本方法回收率在50%-150%之间,RSD<30%。此外,本方法的精密性变异系数均小于3%,在ABI 7500和伯乐CFX-96机型上,相关技术指标均能达标。且采用48混合96混检测模式检测终浓度10^(4) IU·mL^(-1)和20 IU·mL^(-1)的样本,定量要求符合标准。结论:本方法线性范围广、灵敏度高、特异性和精密度好,回收率高,且可用于不同品牌的荧光定量PCR仪,适用范围广,检测模式灵活,可用于人血浆B19病毒核酸筛查,本研究将为血液制品质量标准提高提供技术储备。

水痘-带状疱疹病毒抗原的ELISA定量检测方法的建立

目的:建立水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于质控VZV灭活疫苗研发和生产中抗原含量。方法:以VZV中和单抗5F6C8为包被抗体、8H5D1为酶标抗体,构建定量检测VZV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对本方法的特异性、灵敏度、准确性、线性和稳定性等性能进行分析。结果:建立的双抗体夹心定量检测VZV抗原的ELISA方法,线性范围为0.4μg～13μg/ml,相关系数为R2=0.994,定量限度为0.4μg/ml;变异系数CV<15%、准确性回收率介于87.5%～111.6%之间,稳定性37℃6天的回收率>80%。与VZV以外的相关病毒样本没有交叉反应。结论:构建的VZV抗原ELISA定量检测方法的各项性能符合定量检测需要,可用于VZV灭活疫苗的研发和生产过程的抗原含量检测。

柯萨奇病毒A组16型抗原的ELISA定量检测方法建立

目的:建立柯萨奇病毒A组16型(CA16)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于CA16灭活疫苗的研发和生产过程的抗原定量检测。方法:以CA16中和单抗T26H12为包被抗体、NA14B9为标酶抗体,构建定量检测CA16抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对方法的特异性、灵敏度、精密度、准确性、线性和稳定性进行分析。结果:建立了双抗体夹心定量检测CA16抗原的ELISA方法。方法的线性相关系数R2=0.998,线性范围为8～128 ng/ml,定量限度为8 ng/ml;变异系数CV<15%;回收率介于87.0%～113.8%之间;37℃6天的回收率>80%;与CA16以外的其他样本没有交叉反应。结论:构建的CA16抗原ELISA定量检测方法的各项性能符合定量检测需要,可用于CA16疫苗的研发和生产过程的抗原活性的定量检测。

柯萨奇病毒A组16型疫苗免疫后中和抗体检测方法的比较

目的采用3种方法检测灭活的柯萨奇病毒A组16型(CA16)疫苗的免疫保护性抗体水平,旨在构建评价疫苗免疫保护的检测平台。方法 CA16候选株疫苗(3726,4430和4432)按0、4、6、8周,经腹腔接种小鼠、大鼠和豚鼠,采集0、4、6、8周和10周血样。通过竞争抑制ELISA、细胞微孔病变实验和乳鼠攻毒保护实验评估免疫血清中和抗体水平,利用SPSS16.0软件分析3种检测方法相关性。结果血清中和抗体在首次加强免疫2周后达到峰值;竞争抑制ELISA和细胞微孔病变实验测得中和效价的相关系数为0.861;竞争抑制ELISA和乳鼠攻毒保护的相关系数为0.8;细胞微孔病变实验和乳鼠攻毒保护的相关系数为0.89。结论竞争抑制ELISA检测中和抗体与"金标准"相比具有灵敏、快速、大量、低廉等特点,具有广阔的应用前景。

人丙氨酸氨基转移酶(ALT2)的表达、单克隆抗体制备及鉴定

目的:克隆、表达、纯化重组人丙氨酸氨基转移酶(ALT2),以此作为抗原免疫动物获得针对ALT2的单克隆抗体(mAb)株,用于ALT的免疫诊断。方法:通过RT-PCR从肝癌细胞中扩增丙氨酸氨基转移酶(ALT2)基因,并将其克隆至pET-28a表达载体中,带有组氨酸标签的ALT2蛋白经镍亲和层析纯化,纯化的ALT2作为抗原免疫小鼠制备mAb,通过Western blot和ELISA方法测定mAb的亲和力和特异性。结果:利用大肠杆菌成功表达ALT2蛋白,以镍亲和层析纯化获得ALT活性超过10 000 U/L的ALT2目的蛋白,以此蛋白免疫小鼠后得到5株mAb。结论:经过初步筛选获得2株高特异性的mAb,为研制ALT2蛋白定量检测试剂提供了重要工具。

血小板生成素模拟物研究现状

通过亲和筛选获得的TPO模拟肽和功能筛选获得的非肽类模拟物均具有刺激巨核细胞增殖、成熟和增加血小板数目的功能 ,而且两者体外的生物活性均与TPO相当。这些结果可能为化疗引发的血小板减少症的药物治疗增加新的选择。

带状疱疹减毒活疫苗免疫大鼠体外IFN-γ释放检测平台的建立

目的探索并建立带状疱疹减毒活疫苗免疫大鼠脾细胞的体外IFN-γ释放检测方法 ,并建立评价带状疱疹疫苗免疫应答的检测平台。方法取雌性SD大鼠免疫后4、6、8、12周的血清及脾细胞,分别用gp-ELISA法定量检测血清IgG水平,用双抗体夹心ELISA法定量检测脾细胞体外IFN-γ释放水平,用SPSS 16.0软件分析检测数据。结果大鼠IFN-γ释放受到脾细胞数、培养时间、刺激物种类的影响,脾细胞数为1×107个/ml、用带状疱疹疫苗刺激6 d的IFN-γ释放量[(6 617±1.33)pg/ml]达到峰值,协同刺激因子可加速脾细胞体外IFN-γ释放速度,刺激2 d后IFN-γ释放量[(6 016±1.46)pg/ml]达到峰值,与疫苗单独刺激组6 d的峰值水平一致。大鼠免疫后血清IgG水平与脾细胞释放的IFN-γ水平随带状疱疹疫苗免疫次数增加的变化趋势一致,皆于第2次免疫后达到峰值期。结论通过对影响带状疱疹疫苗免疫大鼠脾细胞体外IFN-γ释放因素的研究,建立了大鼠脾细胞体外IFN-γ释放检测平台,且发现协同刺激因子可加速而不额外增加脾细胞体外IFN-γ释放量,为快速检测大鼠脾细胞体外IFN-γ释放量提供了方法;同时验证了gp-ELISA检测的IgG与双抗体夹心检测的IFN-γ具有一致性。

Ⅰ型单纯疱疹病毒单克隆抗体的制备及其应用

目的：制备并筛选HSV-1单抗,建立定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的双抗体夹心ELISA方法,用于HSV-1病毒颗粒的质控。方法：以HSV-1免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,以筛选的中和单克隆抗体1F6为捕捉抗体,HRP标记的2B1为检测抗体,构建定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对本方法的特异性、灵敏度、精密度、准确性和线性等性能进行验证。用本方法定量检测的病毒量与病毒滴度作回归分析。结果：构建的双抗体夹心定量检测HSV-1病毒颗粒抗原的ELISA方法,线性范围为0.125~2μg/ml,相关系数为R2=0.995 5,定量限度为0.125μg/ml,试剂的变异系数CV〈10%,抗原回收率介于85.6%~107.1%之间。与HSV-1以外的其他样本无交叉反应。本方法检测与病毒感染滴度具有很好的相关性。结论：成功构建了定量检测HSV-1含量的ELISA方法,为HSV-1病毒颗粒抗原定量检测提供快速手段。

重庆石柱-丰都Ⅵ号铁矿勘察及找矿标识

本文介绍了重庆石柱-丰都铁矿矿床地质特征,结合笔者多年的工作经验,分析了矿床成因以及找矿标识和方向等方面知识。

蛋白酶K单抗研制及其双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

目的研制蛋白酶K单克隆抗体并构建定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法 ,用于生物制品中蛋白酶K的检测。方法用杂交瘤技术制备抗蛋白酶K的单抗,用棋盘法优化ELISA条件,建立定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法,分析其特异性、精密性和准确性。结果经免疫、融合、克隆、筛选到稳定分泌蛋白酶K单抗的杂交瘤细胞。获得1株阻断蛋白酶K活性的单抗5G6,以5G6为包被抗体、4D3为酶标抗体,构建蛋白酶K定量检测的ELISA方法。本方法线性相关系数R=0.99,线性范围为293.4-2 500 pg/ml;定量限度为293.4 pg/ml;变异系数为CV〈15%;回收率介于89.3%-129.2%之间,37℃6 d的回收率〉80%;与蛋白酶K以外的其他蛋白无交叉反应。结论获得阻断蛋白酶K活性的单抗,构建出灵敏、特异的蛋白酶K定量检测方法。

氢氧化铝佐剂对重组大肠杆菌表达的戊型肝炎239抗原的吸附研究

目的:探索氢氧化铝佐剂对重组大肠杆菌表达的戊型肝炎239抗原(HEV239)的吸附力种类以及在戊肝疫苗制备研究中的应用。方法:用兰格缪尔吸附方程计算在不同浓度氯化钠(NaCl)或乙二烯乙二醇(EG)条件下,HEV239在氢氧化铝佐剂表面的最大吸附量(Γm),根据Γm随NaCl或EG浓度变化趋势判断吸附作用力的种类。配制添加多羟基化合物且含不同浓度磷酸盐的试验疫苗,计算Γm并绘制其随磷浓度变化的曲线。ELISA法定量检测并计算含不同浓度磷的试验疫苗与羊淋巴液作用12h后抗原的吸附率。结果:HEV239的Γm随离子强度(NaCl浓度)或疏水物质浓度(EG体积)增加而降低,也随磷酸盐浓度增加而降低。疫苗在羊淋巴液中的抗原吸附率随磷酸盐浓度增加而降低,最终达到稳定水平。结论:HEV239在氢氧化铝佐剂表面的吸附受到静电引力和疏水作用力的双重影响。利用此机理向疫苗中添加磷酸盐和多羟基化合物可降低疫苗抗原在制剂中的吸附量和在羊淋巴液中的吸附率。

浅谈渝东南铝土矿床成因与古地理环境的关系

重庆地区铝土矿资源丰富。目前已探明储量超过亿吨,主要分布在渝东南武隆——南川一带。主要赋矿层位为中二叠纪梁山组。而渝东南地区中二叠世早期,继承了中志留和晚泥盆、晚石炭期古地理格局,隶属上扬子古陆部份,古陆北靠南秦岭海槽;东为下扬子滨浅海;南西和南分别为华南海与东南滨浅海。通过对重庆地区已有铝土矿地质资料的分析,总结了该地区铝土矿产出的地质特征,成因与古地理环境的关系,初步建立铝土矿成矿模式。为今后铝土矿的找矿工作提供了重要依据。

戊型肝炎病毒核酸阳性血浆经输血传播感染恒河猴的研究

目的 了解戊型肝炎病毒(HEV)核酸阳性血浆对灵长类动物的感染性和致病性。 方法 对抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆进行HEV RNA检测,并将存在病毒血症献血员的10ml血浆静脉输入健康恒河猴,观察其对恒河猴的感染性和致病性。 结果 从1份抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆中分离出HEV基因IV型RNA片段。该份血浆输入恒河猴后,恒河猴出现典型急性肝炎生物化学和病理表现,病毒血症,血清抗-HEV IgM和IgG抗体阳转。 结论 HEV病毒血症献血员血浆输入可以引起灵长类动物的HEV感染以及急性肝炎,提示HEV经输血传播的可能性。