黑地黄丸通过调控IGF-1表达对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的抑制作用

目的 探讨黑地黄丸对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的影响及其作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为空白组(正常饲养)和造模组,造模组大鼠采用5/6肾切除手术构建CRF大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、黑地黄丸组(10.43 g/kg)及黑地黄丸+IGF-1R阻断剂(JB1)组(连续7 d皮下注射18μg/kg JB1后灌胃10.43 g/kg黑地黄丸)。给药8周后,检测大鼠血清Scr、BUN水平,HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β、HIF-1α、α-SMA蛋白表达,Western blot法检测肾组织IGF-1R、TGF-β蛋白表达,RT-qPCR法检测肾组织IGF-1R、TGF-β mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组血清Scr、BUN水平升高(P<0.05),肾组织纤维化程度加重,纤维化面积增加(P<0.05),肾组织TGF-β、HIF-1α、α-SMA蛋白表达和TGF-β mRNA表达升高(P<0.05),IGF-1R mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,黑地黄丸组大鼠血清Scr、BUN水平降低(P<0.05),肾间质炎性细胞减少,纤维化程度减轻(P<0.05),肾组织TGF-β、HIF-1α、α-SMA蛋白表达和TGF-β mRNA表达降低(P<0.05),IGF-1R mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);而给予JB1可减弱黑地黄丸对CRF大鼠肾纤维化的改善作用(P<0.05)。结论 黑地黄丸能够抑制CRF大鼠肾纤维化,且该抑制过程与上调IGF-1表达,促进IGF-1与IGF-1R结合有关。

基于IGF-1/SDF-1/CXCR4轴研究黑地黄丸含药血清对骨髓间充质干细胞增殖迁移的影响

目的探索黑地黄丸对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、迁移的影响及机制。方法全骨髓细胞贴壁法分离BMSCs并鉴定。MTT检测黑地黄丸对BMSCs增殖的影响并确定最佳干预浓度。将BMSCs分为对照组、黑地黄丸含药血清组、黑地黄丸含药血清+胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)抑制剂组、黄芪甲苷含药血清组,采用细胞划痕实验检测各组BMSCs的划痕愈合率,采用Transwell实验检测BMSCs的迁移数量。ELISA法检测培养上清中胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)-1的含量,Western blot检测BMSCs中IGF-1、趋化因子受体(C-X-C chemokine receptor type,CXCR)4、基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor,SDF)-1的表达。结果成功提取大鼠BMSCs,1%~10%的黑地黄丸含药血清可促进BMSCs增殖,且5%黑地黄丸含药血清促增殖作用最佳。与对照组比较,5%黑地黄丸含药血清促进BMSCs的迁移(P<0.05),并可显著增加BMSCs培养上清中IGF-1的水平(P<0.05),上调BMSCs内IGF-1、CXCR4的表达(P<0.05),下调SDF-1的表达(P<0.05)。与5%黑地黄丸含药血清组比较,IGF-1R抑制剂可抑制BMSCs的迁移(P<0.05),显著下调CXCR4的表达(P<0.05),上调SDF-1的表达(P<0.05)。结论黑地黄丸可促进BMSCs增殖,并可通过上调BMSCs内IGF-1的表达,促进IGF-1与IGF-1R的结合,增加表面趋化因子CXCR4的表达,进而调控SDF-1/CXCR4轴,促进BMSCs迁移。

张法荣教授运用分消走泄法治疗IgA肾病经验

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)作为临床常见的原发性肾小球肾炎具有病情反复、迁延难愈的特点[1,2]。迄今西医主要采取对症治疗,尚缺乏有效的控制方法[3]。近年来中医药治疗IgA肾病优势显著。IgA肾病可归属于中医学“尿血”“肾风”“腰痛”等范畴。各学家对IgA肾病有不同的认识如以脾肾亏虚为发病根本采用补脾益肾法[4];以毒聚咽喉为发病的关键采用解毒利咽法[5];以风为百病之长采用祛风法[6]等等。张法荣教授为山东省名中医药专家,博士生导师,从事肾脏病临床、科研、教学工作30多年。临床上运用分消走泄法治疗IgA肾病疗效显著。笔者有幸师从张教授,现将临证思路介绍如下。