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内含埃博拉病毒GP基因序列假病毒粒子的构建及应用
1
作者
龙云凤
陈金霞
+5 位作者
祝贺
陆冠亚
赵晓燕
叶银波
白吉山
姜焱
《临床医学进展》
2024年第2期4706-4713,共8页
目的:构建内含埃博拉病毒(EBOV) GP基因序列的假病毒粒子,针对EBOV GP基因建立实时荧光定量PCR检测方法。方法:人工合成GP基因序列,克隆至慢病毒包装载体pGWLV-pseudovirus中,转化DH5α感受态细胞,筛选得到阳性克隆pGWLV-GP质粒。将重...
目的:构建内含埃博拉病毒(EBOV) GP基因序列的假病毒粒子,针对EBOV GP基因建立实时荧光定量PCR检测方法。方法:人工合成GP基因序列,克隆至慢病毒包装载体pGWLV-pseudovirus中,转化DH5α感受态细胞,筛选得到阳性克隆pGWLV-GP质粒。将重组质粒转染293T细胞,培养48 h后进行除菌,纯化后获得高纯度假病毒,通过RT-PCR鉴定该假病毒粒子含有EBOV GP基因。通过荧光定量qPCR对假病毒颗粒进行计数后,利用本研究所获得的假病毒颗粒制备用于EBOV核酸检测的标准品。结果:建立了基于EBOV GP基因的Taqman荧光定量PCR检测方法。结论:该方法所用标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为EBOV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。
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关键词
埃博拉假病毒
GP基因
荧光定量PCR
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职称材料
内含埃博拉病毒NP基因序列假病毒粒子的构建及应用
2
作者
赵晓燕
陈金霞
+5 位作者
陆冠亚
祝贺
龙云凤
叶银波
白吉山
姜焱
《生物医学》
CAS
2023年第2期211-218,共8页
目的:构建内含埃博拉病毒(EBOV) NP基因序列的假病毒粒子,建立EBOV Taqman实时荧光定量PCR检测方法。方法:对埃博拉病毒的NP基因序列进行分析,分析基因是否包含重复序列,复杂二级结构以及高GC含量等;根据序列分析结果,合成NP全基因序列...
目的:构建内含埃博拉病毒(EBOV) NP基因序列的假病毒粒子,建立EBOV Taqman实时荧光定量PCR检测方法。方法:对埃博拉病毒的NP基因序列进行分析,分析基因是否包含重复序列,复杂二级结构以及高GC含量等;根据序列分析结果,合成NP全基因序列,并将NP基因的序列克隆至慢病毒包装载体pGWLV-pseudovirus中,转化DH5α感受态细胞,筛选得到阳性克隆pGWLV-NP质粒。将重组质粒转染293T 细胞,培养48 h后进行除菌,纯化后获得高纯度假病毒,通过RT-PCR鉴定该假病毒粒子含有EBOV NP基因。通过荧光定量qPCR对假病毒颗粒进行计数后,利用本研究所获得的假病毒颗粒制备用于EBOV核酸检测的标准品。结果:建立了基于EBOV NP基因的Taqman荧光定量PCR检测方法。本研究建立的基于包含NP基因的EBOV假病毒核酸cDNA的Taqman荧光定量PCR检测方法的Ct值与核酸cDNA标准品1 × 109~1 × 101个/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数可达到0.99。结论:该方法所用标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为EBOV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。
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关键词
埃博拉假病毒
NP基因
荧光定量PCR
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职称材料
布鲁氏菌VirB12蛋白纯化及其抗体ELISA方法的初步建立
被引量:
5
3
作者
张婷婷
刘梦志
+5 位作者
冯生
杨江花
叶银波
陈泽良
沈国顺
刘宝山
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期154-160,共7页
为获得高纯度布鲁氏菌VirB12蛋白,对VirB12分泌表达蛋白先后进行亲和纯化和离子交换纯化。将其作为抗原包被ELISA板,优化反应条件后初步建立了布鲁氏菌抗体的ELISA检测方法。结果表明:蛋白纯化效果良好,重组蛋白纯度可达到98%以上。在...
为获得高纯度布鲁氏菌VirB12蛋白,对VirB12分泌表达蛋白先后进行亲和纯化和离子交换纯化。将其作为抗原包被ELISA板,优化反应条件后初步建立了布鲁氏菌抗体的ELISA检测方法。结果表明:蛋白纯化效果良好,重组蛋白纯度可达到98%以上。在建立的ELISA中,纯化重组蛋白的最佳包被浓度为1μg·mL-1,最适封闭剂为5%脱脂奶粉,血清最佳稀释浓度为1∶25,酶标二抗最佳工作浓度为1∶1500。对20份阳性血清及12份阴性血清的检测结果表明,其与SUANOVIR Brucella-Ab C-ELISA试剂盒的总体符合率达到90.6%,表明本试验建立的以VirB12重组蛋白为抗原的ELISA方法可以检测布氏杆菌感染抗体,有望研制成试剂盒用于养殖场布病的检测和净化。
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关键词
布鲁氏菌
VirB12蛋白
纯化
ELISA
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职称材料
题名
内含埃博拉病毒GP基因序列假病毒粒子的构建及应用
1
作者
龙云凤
陈金霞
祝贺
陆冠亚
赵晓燕
叶银波
白吉山
姜焱
机构
南京海关动植物与食品检测中心
南京农业大学动物医学院
出处
《临床医学进展》
2024年第2期4706-4713,共8页
文摘
目的:构建内含埃博拉病毒(EBOV) GP基因序列的假病毒粒子,针对EBOV GP基因建立实时荧光定量PCR检测方法。方法:人工合成GP基因序列,克隆至慢病毒包装载体pGWLV-pseudovirus中,转化DH5α感受态细胞,筛选得到阳性克隆pGWLV-GP质粒。将重组质粒转染293T细胞,培养48 h后进行除菌,纯化后获得高纯度假病毒,通过RT-PCR鉴定该假病毒粒子含有EBOV GP基因。通过荧光定量qPCR对假病毒颗粒进行计数后,利用本研究所获得的假病毒颗粒制备用于EBOV核酸检测的标准品。结果:建立了基于EBOV GP基因的Taqman荧光定量PCR检测方法。结论:该方法所用标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为EBOV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。
关键词
埃博拉假病毒
GP基因
荧光定量PCR
分类号
R37 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
内含埃博拉病毒NP基因序列假病毒粒子的构建及应用
2
作者
赵晓燕
陈金霞
陆冠亚
祝贺
龙云凤
叶银波
白吉山
姜焱
机构
南京海关动植物与食品检测中心
南京农业大学动物医学院
出处
《生物医学》
CAS
2023年第2期211-218,共8页
文摘
目的:构建内含埃博拉病毒(EBOV) NP基因序列的假病毒粒子,建立EBOV Taqman实时荧光定量PCR检测方法。方法:对埃博拉病毒的NP基因序列进行分析,分析基因是否包含重复序列,复杂二级结构以及高GC含量等;根据序列分析结果,合成NP全基因序列,并将NP基因的序列克隆至慢病毒包装载体pGWLV-pseudovirus中,转化DH5α感受态细胞,筛选得到阳性克隆pGWLV-NP质粒。将重组质粒转染293T 细胞,培养48 h后进行除菌,纯化后获得高纯度假病毒,通过RT-PCR鉴定该假病毒粒子含有EBOV NP基因。通过荧光定量qPCR对假病毒颗粒进行计数后,利用本研究所获得的假病毒颗粒制备用于EBOV核酸检测的标准品。结果:建立了基于EBOV NP基因的Taqman荧光定量PCR检测方法。本研究建立的基于包含NP基因的EBOV假病毒核酸cDNA的Taqman荧光定量PCR检测方法的Ct值与核酸cDNA标准品1 × 109~1 × 101个/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数可达到0.99。结论:该方法所用标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为EBOV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。
关键词
埃博拉假病毒
NP基因
荧光定量PCR
分类号
R28 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
布鲁氏菌VirB12蛋白纯化及其抗体ELISA方法的初步建立
被引量:
5
3
作者
张婷婷
刘梦志
冯生
杨江花
叶银波
陈泽良
沈国顺
刘宝山
机构
沈阳农业大学畜牧兽医学院
出处
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期154-160,共7页
基金
国家重点研发计划项目(2017YFD0500900)
文摘
为获得高纯度布鲁氏菌VirB12蛋白,对VirB12分泌表达蛋白先后进行亲和纯化和离子交换纯化。将其作为抗原包被ELISA板,优化反应条件后初步建立了布鲁氏菌抗体的ELISA检测方法。结果表明:蛋白纯化效果良好,重组蛋白纯度可达到98%以上。在建立的ELISA中,纯化重组蛋白的最佳包被浓度为1μg·mL-1,最适封闭剂为5%脱脂奶粉,血清最佳稀释浓度为1∶25,酶标二抗最佳工作浓度为1∶1500。对20份阳性血清及12份阴性血清的检测结果表明,其与SUANOVIR Brucella-Ab C-ELISA试剂盒的总体符合率达到90.6%,表明本试验建立的以VirB12重组蛋白为抗原的ELISA方法可以检测布氏杆菌感染抗体,有望研制成试剂盒用于养殖场布病的检测和净化。
关键词
布鲁氏菌
VirB12蛋白
纯化
ELISA
Keywords
Brucella
VirB12 protein
purification
ELISA
分类号
S858.23 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
内含埃博拉病毒GP基因序列假病毒粒子的构建及应用
龙云凤
陈金霞
祝贺
陆冠亚
赵晓燕
叶银波
白吉山
姜焱
《临床医学进展》
2024
0
下载PDF
职称材料
2
内含埃博拉病毒NP基因序列假病毒粒子的构建及应用
赵晓燕
陈金霞
陆冠亚
祝贺
龙云凤
叶银波
白吉山
姜焱
《生物医学》
CAS
2023
0
下载PDF
职称材料
3
布鲁氏菌VirB12蛋白纯化及其抗体ELISA方法的初步建立
张婷婷
刘梦志
冯生
杨江花
叶银波
陈泽良
沈国顺
刘宝山
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
5
下载PDF
职称材料
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