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GS介导RNase P对人巨细胞病毒ul54基因mRNA的切割作用
被引量:
1
1
作者
李弘剑
黎景光
+5 位作者
苏运贞
陈浩军
李月琴
叶飞舟
张欣
周天鸿
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期275-281,共7页
引导序列(Guide Sequences,GSs)是与mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus,HCMV)ul54基因D片段mRNA序列互补的GS,将其共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA,构建成T7-M1G...
引导序列(Guide Sequences,GSs)是与mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus,HCMV)ul54基因D片段mRNA序列互补的GS,将其共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA,构建成T7-M1GS核酶。通过对ul54基因D片段转录产物体外切割实验和将T7-M1GS构建在含有U6启动子的逆转录病毒载体,与构建在真核载体pEGFP-N1的ul54基因D片段共转染人宫颈癌细胞系HeLa的体内切割实验,证实该核酶具备对ul54基因D片段mRNA的特异切割能力,为利用核酶治疗HCMV感染提供实验基础。
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关键词
人巨细胞病毒HCMV
μ/54基因
RNASE
P
引导序列(GSs)
荧光定量PCR
下载PDF
职称材料
BMPR-Ⅱ基因mRNA荧光定量PCR检测标准品的构建
2
作者
叶飞舟
何震宇
+4 位作者
李月琴
李弘剑
张欣
黄晓峰
周天鸿
《广东药学院学报》
CAS
2006年第3期309-311,共3页
目的构建检测BMPR-Ⅱ基因mRNA表达水平差异的标准品。方法以人胚肺成纤维细胞的总RNA为模板、O ligo(dT)18为引物逆转录产生cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人BMPR-Ⅱ基因相应的cDNA片断,构建pMD-18-BMPR-Ⅱ重组质粒,经鉴定测序,用荧光定量...
目的构建检测BMPR-Ⅱ基因mRNA表达水平差异的标准品。方法以人胚肺成纤维细胞的总RNA为模板、O ligo(dT)18为引物逆转录产生cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人BMPR-Ⅱ基因相应的cDNA片断,构建pMD-18-BMPR-Ⅱ重组质粒,经鉴定测序,用荧光定量PCR制作标准曲线。结果成功克隆了人BMPR-ⅡcDNA,并以其为标准制作出荧光定量PCR标准曲线。结论成功构建了BMPR-Ⅱ基因荧光定量PCR标准质粒,为今后BMPR-ⅡmRNA的荧光定量PCR检测打下了基础。
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关键词
人骨形成蛋白受体Ⅱ
T—A克隆
荧光定量PCR
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职称材料
题名
GS介导RNase P对人巨细胞病毒ul54基因mRNA的切割作用
被引量:
1
1
作者
李弘剑
黎景光
苏运贞
陈浩军
李月琴
叶飞舟
张欣
周天鸿
机构
暨南大学生命科学技术学院
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期275-281,共7页
基金
国家自然科学基金(编号:30370776)
广东省自然科学基金重大项目(编号:36703)
+1 种基金
广东省自然科学基金(编号:021162
000718)
文摘
引导序列(Guide Sequences,GSs)是与mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus,HCMV)ul54基因D片段mRNA序列互补的GS,将其共价结合到大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA,构建成T7-M1GS核酶。通过对ul54基因D片段转录产物体外切割实验和将T7-M1GS构建在含有U6启动子的逆转录病毒载体,与构建在真核载体pEGFP-N1的ul54基因D片段共转染人宫颈癌细胞系HeLa的体内切割实验,证实该核酶具备对ul54基因D片段mRNA的特异切割能力,为利用核酶治疗HCMV感染提供实验基础。
关键词
人巨细胞病毒HCMV
μ/54基因
RNASE
P
引导序列(GSs)
荧光定量PCR
Keywords
human cytomegalovirus(HCMV)
μ/54 gene
RNase P
guide sequence
Real-time quantitation PCR
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
BMPR-Ⅱ基因mRNA荧光定量PCR检测标准品的构建
2
作者
叶飞舟
何震宇
李月琴
李弘剑
张欣
黄晓峰
周天鸿
机构
暨南大学生命科学技术学院
出处
《广东药学院学报》
CAS
2006年第3期309-311,共3页
文摘
目的构建检测BMPR-Ⅱ基因mRNA表达水平差异的标准品。方法以人胚肺成纤维细胞的总RNA为模板、O ligo(dT)18为引物逆转录产生cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增人BMPR-Ⅱ基因相应的cDNA片断,构建pMD-18-BMPR-Ⅱ重组质粒,经鉴定测序,用荧光定量PCR制作标准曲线。结果成功克隆了人BMPR-ⅡcDNA,并以其为标准制作出荧光定量PCR标准曲线。结论成功构建了BMPR-Ⅱ基因荧光定量PCR标准质粒,为今后BMPR-ⅡmRNA的荧光定量PCR检测打下了基础。
关键词
人骨形成蛋白受体Ⅱ
T—A克隆
荧光定量PCR
Keywords
BMPR-Ⅱ gene
T-A cloning
real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GS介导RNase P对人巨细胞病毒ul54基因mRNA的切割作用
李弘剑
黎景光
苏运贞
陈浩军
李月琴
叶飞舟
张欣
周天鸿
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
下载PDF
职称材料
2
BMPR-Ⅱ基因mRNA荧光定量PCR检测标准品的构建
叶飞舟
何震宇
李月琴
李弘剑
张欣
黄晓峰
周天鸿
《广东药学院学报》
CAS
2006
0
下载PDF
职称材料
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