问题导向学习教学法在儿科住院医师规范化培训临床带教中的应用效果

探讨问题导向学习教学法运用于儿科住院医师规范化培训临床带教之中的教学效果。方法 以院内2020年9月-2022年10月间的儿科轮转的规培医生56名进行研究,将56名学生分为对照组与观察组,两组各28例,其中问题导向学习教学法实施前,实施传统模式教学的为对照组,问题导向学习教学法实施后的为观察组,观察两组学生在学习成绩等方面的差异。结果 观察组学生与对照组学生在理论成绩方面相比并无明显差异(P>0.05),观察组学生的实践操作能力、典型病例分析能力以及总分均高于对照组(P<0.05)。观察组学生对于本次教学培养了文献阅读能力、提升了学习兴趣、提升了临床思维能力等方面的评价高于对照组(P<0.05)。结论 通过在儿科住院医师规范化培训临床带教之中实施问题导向学习教学法,能够显著提升学生的学习成绩,培养学生主动学习能力,可广泛推广应用。

CBL联合翻转课堂教学模式在感染科临床带教中的应用研究

目的探究案例教学法(Case-Based Learning,CBL)联合翻转课堂教学模式在感染科本科生临床实习教学中的应用效果。方法选取2021年12月—2022年12月于徐州医科大学附属医院感染科实习的116名医学生作为研究对象,以随机数表法分为两组,每组58名。研究组采用CBL联合翻转课堂教学,对照组实施传统临床带教模式。对比两组教学效果。结果研究组理论考核、临床技能操作考核评分均优于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05);研究组病历书写、疾病诊断、临床常规操作评分高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05);研究组的在学习兴趣、知识掌握、师生互动、案例分析能力和实操能力等临床带教的满意度评分均高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论CBL与翻转课堂联合应用于感染科临床实习教学,能够有效提高感染科临床实习教学质量,增强学生的理论基础和实践操作能力。

施保利通对巨细胞病毒感染小鼠唾液腺病毒滴度的影响

目的:探讨施保利通对巨细胞病毒(CMV)感染小鼠唾液腺中CMV滴度的影响。方法:建立全身播散性鼠巨细胞病毒(MCMV)感染小鼠模型,随机分为模型对照组、施保利通组、更昔洛韦组及联合治疗组,另设正常对照组,每组25只。应用细胞病变效应(CPE)法检测各组小鼠唾液腺MCMV感染性病毒滴度并比较其变化。结果:感染病毒后模型对照组小鼠唾液腺MCMV感染性病毒滴度逐渐升高,第14天达高峰;其他各组先迅速升高,第7天后,施保利通组未再有明显变化,更昔洛韦组及联合治疗组均降低。第14天时施保利通组病毒滴度明显低于模型对照组,但较更昔洛韦组高,两组比较差异有统计学意义(F=117.54,P<0.05),联合治疗组未检测到MCMV。各组峰值比较,施保利通组和更昔洛韦组低于模型对照组,高于联合治疗组,差异均有统计学意义(F=45.06,P<0.01)。结论:施保利通可降低小鼠唾液腺中MCMV感染性病毒滴度,与更昔洛韦联合用药可增加抗病毒疗效,具有协同作用。

巨细胞病毒感染小鼠结肠中肠三叶因子的表达及更昔洛韦的干预作用

目的观察肠三叶因子(ITF/TFF3)在鼠巨细胞病毒(MCMV)感染小鼠结肠中的表达及更昔洛韦的干预作用。方法将48只4周龄BALB/c小鼠,随机分为空白组、病毒组及更昔洛韦(GCV)组,每组8只。病毒组和GCV组分别腹腔接种致半数细胞感染量(TCID50=105.31/mL)的MCMV病毒悬液100μL,GCV组在接种MCMV 24h后GCV 50mg/kg,每天1次,腹腔注射,连续14d,同时病毒组和空白组分别给予同等剂量的生理盐水作为对照。定量PCR检测肝脏、结肠MCMV-DNA;采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ITF mRNA表达水平。结果病毒组小鼠明显出现食欲差、活动少;皮毛稀松、对刺激反应迟钝、生长迟缓、体质量不增等表现。病毒组肝脏、结肠组织有MCMV-DNA表达,GCV组亦有表达,但弱于病毒组。GCV组与病毒组相比ITF mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);病毒组与空白组相比ITF mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ITF是一类较新的肠黏膜保护因子,在MCMV感染后所导致的急性肠道炎症损伤过程中发挥着重要的保护作用。

早产儿血小板减少症与支气管肺发育不良的相关性

目的分析胎龄≤32周早产儿血小板减少症的特点,并探讨其与支气管肺发育不良(broncho-pulmonary dysplalsia,BPD)的相关性。方法选取2018年9月~2022年2月徐州医科大学附属医院新生儿重症监护室收治的胎龄≤32周的早产儿作为研究对象,回顾性收集并分析研究对象生后4周内的临床资料,根据生后4周内最低血小板计数(platelet count,PLT)进行分组,采用单因素及二元Logistic回归分析方法,分析各组间临床资料的差异及血小板减少症与BPD的关系,并比较BPD组早产儿与非BPD组早产儿在不同胎龄时血小板减少症构成比及生后4周内PLT水平。结果共纳入197例早产儿,发生血小板减少症134例,发生率为68.0%,轻度、中度及重度血小板减少症分别占52.2%(70/134)、36.6%(49/134)、11.2%(15/134),生后第1周PLT达最低值(180×109/L)。单因素分析结果显示,PLT水平与出生体重、胎膜早破、孕母子痫、坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)、败血症、BPD、红细胞增多症、红细胞输注量、有创呼吸机使用天数等临床因素相关,不同程度血小板减少症患儿BPD发生率及严重程度差异有统计学意义(P<0.05)。应用Logistic逐步回归方法(前进法)筛选自变量,以是否发生BPD作为因变量,构建Logistic回归模型,结果显示,中重度血小板减少症是BPD发生的危险因素(OR=2.983,95%CI:1.027~8.662,P=0.044)。结论早产儿血小板减少症发生率高,PLT在生后第1周最低,中度、重度血小板减少症可能与BPD发生相关,在临床实践中应加以关注。

布地奈德吸入联合枸橼酸咖啡因对早产儿支气管肺发育不良的防治效果分析

目的:分析布地奈德吸入联合枸橼酸咖啡因对早产儿支气管肺发育不良(BPD)的防治效果。方法:选择徐州医科大学附属医院儿科收治的早产儿开展回顾性分析,总病例数140例,取样时间2020年1月至2022年6月。按照治疗方式的不同将其分为观察组(60例)和对照组(80例)。对照组采用枸橼酸咖啡因治疗,观察组在对照组的基础上加用吸入用布地奈德治疗。比较两组的血气指标、临床指标、治疗结局及安全性。结果:治疗72 h后,两组的动脉血氧分压(PaO_(2))均较治疗前升高,且观察组较对照组更高,差异有统计学意义(P<0.05);两组的吸气峰压(PIP)、吸入氧浓度(FiO_(2))均较治疗前降低,且观察组均较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的氧疗时间、呼吸支持时间均较对照组短,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的BPD发生率较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组皮疹、呼吸机相关性肺炎、脑损伤的发生率相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:布地奈德吸入联合枸橼酸咖啡因方案通过改善早产儿的血气指标,缩短其氧疗时间,可有效防治早产儿BPD,且不会引起严重的不良反应,安全有效。

情景模拟教学法在对医学实习生进行新生儿复苏教学中的应用效果

目的:探讨情景模拟教学法在对医学实习生进行新生儿复苏教学中的应用效果。方法:从2016年9月至2017年9月期间在徐州医科大学附属医院实习的学员中随机抽选46名学员作为研究对象。采用奇偶数分组法将其分为观察组(23名)和对照组(23名)。对对照组学员进行常规的新生儿复苏教学,采用情景模拟教学法对观察组学员进行新生儿复苏教学。然后对比两组学员进行综合技能考核的成绩及对教学的满意率。结果:教学结束后,观察组学员进行理论知识、操作技能、应变能力、沟通能力、素质修养等考核所得的分数、对带教老师教学态度、教学方法的满意率均高于对照组学员,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论:应用情景模拟教学法对医学实习生进行新生儿复苏教学能够提高其分析问题和解决问题的能力,加深其对有关新生儿复苏知识的理解,提高其对教学的满意率。

早产儿生后早期胱抑素C水平变化及其临床意义

目的探讨早产儿外周血胱抑素C(cystatin C,Cys C)水平变化及其临床意义。方法选取2018年1月—2018年6月于徐州医科大学附属医院新生儿科住院治疗的早产儿89例,男47例,女42例,平均胎龄(32.78±2.26)周,平均体重(1.94±0.48)kg,采用颗粒增强透射免疫比浊法检测其生后第3天外周血Cys C水平,采用SPSS 18.0软件进行统计学处理,比较不同胎龄、性别、出生体重、生产方式、Apgar评分及母亲有无合并妊娠期高血压、胎膜早破时Cys C水平差异,分析Cys C和胎龄、出生体重、Apgar评分、肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清总胆红素(total bilirubin,TBIL)水平的相关性。结果早期早产儿Cys C水平明显高于中、晚期早产儿,差异有统计学意义(P<0.05),中、晚期早产儿比较差异无统计学意义(P>0.05);极低出生体重早产儿CysC水平高于低出生体重及正常出生体重早产儿,差异有统计学意义(P<0.05),而低出生体重早产儿与正常出生体重早产儿比较差异无统计学意义(P>0.05);3、5分钟Apgar评分<8分的早产儿Cys C水平明显高于>8分早产儿,差异有统计学意义(P<0.05);母亲合并胎膜早破的早产儿Cys C水平高于无胎膜早破早产儿,差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、生产方式、TBIL水平及母亲有无合并妊娠期高血压早产儿Cys C差异无统计学意义(P>0.05)。相关分析显示:Cys C水平与Cr、BUN呈明显正相关(P<0.05),与胎龄、出生体重、Apgar评分呈负相关(P<0.05),但相关关系不密切(r<0.5),与TBIL水平无相关性(P>0.05)。结论胎龄、出生体重、5分钟Apgar评分、母亲合并胎膜早破均为早产儿Cys C水平的影响因素,胎龄越小、出生体重及5分钟Apgar评分越低早产儿Cys C水平越高,且呈负相关,此类早产儿应高度警惕肾脏损害存在,而性别、生产方式、TBIL水平及母亲合并妊娠高血压对Cys C水平无明显影响。

巨细胞病毒肝损伤患儿外周血IL-17、IL-35与Th17/Treg的检测及其临床意义

目的:探讨巨细胞病毒性肝损伤患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells,Treg)、辅助性T细胞17(Th17)、IL-17及IL-35水平及其临床意义。方法:选取20例巨细胞病毒感染肝损伤患儿为肝损伤组,18例巨细胞病毒感染无肝损伤患儿为非肝损组,同期20例体检健康婴儿为对照组;采用荧光免疫PCR(FQ-PCR)法检测尿HCMV-DNA载量,流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞比例,ELISA法检测血浆IL-17、IL-35浓度,同时测定血清丙氨酸转移酶(ALT)含量,分析细胞比例与细胞因子之间的关联。结果:①与对照组比较,肝损伤组婴儿外周血Th17细胞比例、IL-17浓度明显升高,且两者呈显著正相关(P均<0. 05);②肝损伤组Treg比例及IL-35浓度显著低于非肝损组和正常对照组,且Treg与IL-35间呈显著正相关(P <0. 05);肝损伤组Th17/Treg比值明显高于非肝损组和对照组(P均<0. 05)。③肝损伤组外周血ALT显著高于非肝损组和对照组(P均<0. 05),非肝损组和对照组间ALT无明显差异(P> 0. 05)。结论:IL-17、IL-35与巨细胞病毒感染引起的肝损伤密切相关,Th17/Treg的平衡在维持巨细胞病毒感染患儿机体免疫内环境稳定中起着重要作用。

容量保证机械通气在呼吸窘迫综合征早产儿中应用

目的 比较容量保证(VG)与压力控制(PC)两种机械通气模式在呼吸窘迫综合征(RDS)早产儿中的应用效果。方法 前瞻性选择2017年03月至2021年04月NICU收治的胎龄<32周或出生体质量<1 500g,需要有创机械通气的RDS早产儿作为研究对象,按简单随机法分为VG组和PC组。比较两组拔管前的呼吸机参数及动脉血气,有创机械通气时间、总呼吸支持时间及平均住院时间,并发症发生率及病死率。结果 最终RDS早产儿79例完成研究,男46例、女33例,平均胎龄(30.1±1.2)周,平均出生体质量(1 239.0±158.0)g,VG组36例、PC组43例。与PC组比较,VG组在拔管前的平均气道压较低,有创机械通气时间、总呼吸支持时间以及平均住院时间均缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在RDS早产儿的机械通气治疗中,VG通气可能是一种更加安全有效的通气方式,但仍需要大样本、多中心的临床试验证实。

巨细胞病毒肝炎婴儿外周血IL-33、sST2表达及意义

目的 探讨白细胞介素-33(IL-33)、可溶性致癌抑制因子2(sST2)在婴儿巨细胞病毒(HCMV)肝炎中的表达及意义。方法 选取HCMV感染婴儿40例,其中肝炎组20例,其他疾病组20例;另选择同期健康婴儿20例作为对照组。采用ELISA法检测三组婴儿血浆IL-33、sST2、IFN-γ、IL-4浓度,采用流式细胞术检测外周血Th1、Th2细胞比例。结果HCMV阳性肝炎组和HCMV阳性其他疾病组患儿的血浆IL-33、sST2、IFN-γ、IL-4浓度及Th1、Th2细胞比例均高于对照组,肝炎组高于其他疾病组。肝炎组和其他疾病组患儿IFN-γ/IL-4及Th1/Th2均低于对照组,肝炎组低于其他疾病组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HCMV肝炎组血浆IL-33浓度与sST2、IL-4浓度及Th2细胞比例呈显著正相关(P<0.05),与IFN-γ/IL-4、Th1/Th2呈显著负相关(P<0.05)。结论 HCMV肝炎婴儿存在Th1/Th2失衡,IL-33可能参与HCMV感染所致Th2优势应答和Th1/Th2失衡。

血清24S-HC及其联合S100-β、NSE在早产儿脑损伤及预后评估中的预测价值

目的探讨血清24S羟基胆固醇(24S-HC)及其联合S100-β、NSE在预测早产儿脑损伤及评估近期预后中的临床价值。方法选取2019年9月至2021年3月收治的存在脑损伤高危因素的74例早产儿为研究对象,酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组患儿生后1 d的血清24S-HC、S100-β、NSE水平;振幅整合脑电图(aEEG)监测脑功能,Gesell发育量表评估神经发育情况。根据早产儿脑损伤诊断标准分为脑损伤组(34例)及非脑损伤组(40例)。比较24S-HC及其联合S100-β、NSE诊断早产儿脑损伤的敏感度、特异度,绘制ROC曲线;并分析脑损伤组24S-HC、S100-β、NSE水平与aEEG评分、Gesell发育量表发育商(DQ)的相关性。结果①脑损伤组早产儿血清24S-HC、S100-β、NSE水平均高于非脑损伤组,差异有统计学意义(P<0.001)。②24S-HC、S100-β、NSE及三者联合诊断早产儿脑损伤的敏感度依次为85.3%、79.4%、88.2%、94.1%,特异度依次为82.5%、82.5%、85.0%、92.5%,AUC值依次为0.888、0.838、0.907、0.975。③24S-HC、S100-β、NSE水平与矫正胎龄足月时aEEG评分及矫正胎龄3个月Gesell各能区的DQ值均呈负相关(P<0.01),且24S-HC同近期预后的相关性更强。结论血清24S-HC在早期预测早产儿脑损伤中有较高的敏感度、特异度,且与近期预后密切相关,有一定临床应用价值;进一步联合S100-β、NSE可明显提高诊断效能。

血浆脂氧素A4和基质金属蛋白酶9在早产儿支气管肺发育不良中的预测价值

目的探讨血浆中脂氧素A4(LXA4)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的动态变化及对早产儿支气管肺发育不良(BPD)的预测价值。方法选择2018年1—7月入住徐州医科大学附属医院新生儿科32周以下的早产儿50例,根据BPD的诊断标准为BPD组(20例)和非BPD组(30例),采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测病儿第1、7、14天血浆中LXA4、MMP9的表达水平。结果生后第1天BPD组和非BPD组血浆LXA4表达水平[(330.4±21.6)比(321.1±35.9)pg/mL],差异无统计学意义(P>0.05);BPD组第7天LXA4水平为(281.8±7.0)pg/mL,第14天LXA4水平为(188.4±5.7)pg/mL,随着时间推移逐渐下降,各时间点均低于非BPD组,不同时间点之间两两比较均差异有统计学意义,非BPD组LXA4水平逐渐上升,于第7天达到峰值(348.6±4.4)pg/mL,后又逐渐下降至第14天的(270.3±5.4)pg/mL,不同时间点之间两两比较均差异有统计学意义(P<0.05);第1天BPD组和非BPD组血浆MMP9表达水平(23.9±3.9)ng/mL比(25.3±2.6)ng/mL,差异无统计学意义(P>0.05),BPD组血浆MMP9水平逐渐上升,且生后第7、14天BPD组血浆MMP9水平[(32.6±3.9)ng/mL、(39.0±2.1)ng/mL]均高于非BPD组[(28.8±2.9)ng/mL、(32.2±3.4)ng/mL],不同时间点之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。依据BPD组和非BPD组LXA4浓度绘制ROC曲线下面积为0.670(95%可信区间为0.580~0.759),依据BPD组和非BPD组MMP9浓度绘制ROC曲线下面积为0.749(95%可信区间为0.667~0.830)。结论生后7 d检测血浆LXA4和MMP9的表达水平对早产儿支气管肺发育不良有早期预测价值。

早期液体负荷与极低/超低出生体重早产儿严重并发症的相关性

目的探讨极低和超低出生体重早产儿生后早期液体负荷与支气管肺发育不良(BPD)、新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)、早产儿脑损伤(BIPI)、有血流动力学意义的动脉导管未闭(hsPDA)等严重并发症的关系。方法选取2018年8月—2021年8月于徐州医科大学附属医院新生儿重症监护室住院治疗的出生体重小于1500 g、胎龄小于32周的147例早产儿作为研究对象,按不同疾病发生情况分为试验组(包括BPD组、NEC组、BIPI组、hsPDA组)和相应的对照组,采用病例对照研究回顾性分析并比较试验组与相应对照组患儿生后第1、2、3、4天液体入量及前4 d总液体入量的差异;通过受试者工作特征曲线(ROC)推测极低和超低出生体重早产儿生后前4 d最佳单日液体入量及总入量。结果BPD组、NEC组、BIPI组及hsPDA组患儿出生后第1、2、3、4天及前4 d总液体入量均高于相应的对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。NEC组患儿第1、2、3、4天及前4 d液体入量截断值分别为98.9、123.5、131.3、147.8、492.1 ml/kg,BPD组分别为95.3、112.1、123.4、141.4、476.2 ml/kg,BIPI组分别为88.6、95.4、120.0、128.6、430.9 ml/kg,hsPDA组分别为98.7、102.7、124.0、140.8、496.5 ml/kg。ROC曲线显示BPD组第2、4天液体入量曲线下面积分别为0.87、0.86,截断值参考意义最佳。结论极低和超低出生体重早产儿早期液体负荷高可增加BPD、NEC、BIPI及hsPDA等疾病发生的风险。

未足月胎膜早破早产儿早发败血症肠道菌群的特征及临床意义

目的探讨未足月胎膜早破(PPROM)早产儿生后肠道菌群的特征及其与早发败血症(EOS)的关系,为EOS的早期诊断和治疗提供依据。方法选择2019年3月—2020年9月徐州医科大学附属医院新生儿科收治的38例PPROM早产儿,根据EOS诊断标准将其分为EOS组(20例)及非EOS组(18例),另外选择10例正常早产儿作为对照组。利用高通量测序技术检测并分析各组早产儿生后1 d内粪便样本菌群的差异。结果在多样性分析中,3组粪便菌群的Chao1指数差异无统计学意义,EOS组的Shannon指数显著低于非EOS组及对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。在门水平上,3组之间厚壁菌门、变形菌门和拟杆菌门的相对丰度差异无统计学意义(P> 0.05);EOS组的放线菌门相对丰度低于对照组(P <0.05)。在属水平上,EOS组的克雷伯菌属相对丰度高于非EOS组及对照组,EOS组的肠球菌属低于非EOS组及对照组,EOS组的梭菌属、乳杆菌属、双歧杆菌属低于对照组,非EOS组的脲原体属及链球菌属高于对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。5例血培养阳性患儿所鉴定出的病原菌均为肠道菌群中相对丰度最高的菌属。结论 PPROM早产儿肠道菌群的多样性降低,克雷伯菌属、葡萄球菌属等条件致病菌的相对丰度升高,有益菌的相对丰度降低可能与EOS的发生有关。

巨细胞病毒感染新生小鼠辅助性T细胞1/2类细胞因子及其转录因子表达变化及胸腺五肽的干预作用

目的 观察巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）感染新生小鼠辅助性T细胞（help T cell,Th）1/2类细胞因子及其转录因子表达水平变化,并探讨胸腺五肽对其产生的干预作用. 方法 120只新生BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组和胸腺五肽组（每组40只）.对照组仅腹腔注射等容积生理盐水;模型组和胸腺五肽组于生后4～6 h内腹腔注射组织半数细胞感染量（tissue culture infections dose,TCID50）为10 4.31U/0.1 ml的鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）病毒悬液20μl,建立全身播散性感染MCMV模型.胸腺五肽组腹腔注射胸腺五肽0.3 mg/kg,每天1次.生后第3、5、7、10和14天无菌分离脾组织,酶联免疫吸附试验法检测脾淋巴细胞培养上清液中的干扰素（interferon,IFN）-γ和白细胞介素（interleukin,IL）-10表达;逆转录-聚合酶链反应技术检测脾组织转录因子T-bet（T-box expressed in T cells,T-bet）mRNA和转录因子Gata3（Gata-binding protein-3,GATA-3）mRNA表达.采用单因素方差分析（包括LSD法和Dunnett T3法）进行统计学分析. 结果 （1）IFN-γ表达：模型组和胸腺五肽组于第3天达高峰,均明显高于对照组[分别为（280.73±14.88）、（286.03±15.44）和（149.42±5.43） pg/ml,F=183.532,P=0.000].胸腺五肽组第3天后迅速降低,第7天起回升,至第14天高于对照组和模型组[分别为（252.33±8.33）、（149.07±7.05）和（148.57±4.53）pg/ml,F=385.487,P=0.000].（2）IL-10表达：模型组感染MCMV后IL-10表达水平逐渐升高,第14天明显高于对照组和胸腺五肽组[分别为（71.19±1.50）、（36.67±2.55）和（40.01±1.28） pg/ml,F=523.670,P=0.000];胸腺血肽组IL-10表达水平先升高,第7天后下降,至第14天明显低于模型组,但仍高于对照组.（3） T-bet mRNA表达：模型组和胸腺五肽组感染后T-bet mRNA表达迅速增强,第3天达高峰,均明显高于对照组（相对吸光度值分别为0.74±0.02、0.71±0.04和0.30±0.01,F=741.630,P=0.000）.胸腺五肽组第3天后表达水平迅速降低,第5天起逐渐回升,至第14天高于对照组和模型组（分别为0.45±0.01、0.30±0.01和0.30±0.01,F=257.571,P=0.000）.（4）GATA 3mRNA表达：模型组和胸腺五肽组第3天GATA-3 mRNA表达强度均增强,且均强于对照组（相对吸光度值分别为0.48±0.02、0.53±0.01和0.33±0.01,F=345.167,P=0.000）.第14天时模型组表达强于胸腺五肽组,胸腺五肽组又强于对照组（分别为0.99±0.02、0.55±0.02和0.34±0.01,F=1 767.505,P=0.000）. 结论 MCMV感染可诱导新生鼠出现Th1/Th2漂移,表现为Th2细胞的优势应答状态,胸腺五肽可改善这一免疫失衡现象.

新生小鼠巨细胞病毒感染早期脾淋巴细胞Toll样受体2和9与髓样分化因子88及Th1／Th2类细胞因子的表达变化

目的探讨新生小鼠巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染后脾淋巴细胞Toll样受体（Toll—like receptor，TLR）2、9，髓样分化因子88（myeloid cell differentiation 88，MyD88），白细胞介素（interleukin，IL）-2，干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）和IL-10的表达变化及其在小鼠CMV感染中的作用。方法64只新生小鼠随机分为对照组（32只）和模型组（32只）。生后4～6h，模型组小鼠腹腔接种病毒致半数细胞感染量为104．31U／0．1 ml的CMV悬液20μl，建立新生小鼠CMV全身播散型感染模型。2组小鼠于3、5、7、10日龄时各随机处死8只。采用聚合酶链反应技术检测7日龄小鼠肝脏、脾脏、心脏、肺脏、肾脏和唾液腺中的CMV—DNA；采用Western印迹技术检测3、5、7、10日龄小鼠脾淋巴细胞TLR2、TLR9及MyD88蛋白的表达水平；采用酶联免疫吸附试验检测脾淋巴细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ和IL-10水平。统计分析采用两独立样本t检验及Pearson相关分析。结果模型组脾淋巴细胞TLR2、TLR9和MyD88蛋白表达量在7日龄时达高峰（分别为1．06±0．09、1．19±0．03和0．89±0．07），均高于对照组（分别为0．47±0．04，0．71±0．02和0．43±0．03），差异均有统计学意义（t分别为21．69、50．40和42．06，P均〈0．01）。模型组脾淋巴细胞培养上清液IL-2水平7日龄时降至最低[（16．9±7．3）pg／ml]，IFN-γ5日龄达高峰[（242．9±8．4）pg／ml]，而IL-10在5日龄时才开始升高[（62．4±11．1）pg／ml]，与正常组相应日龄时[分别为（51．9±10．8）pg／ml、（135．3±10．5）pg／ml和（36．3±5．1）pg／ml]比较，差异均有统计学意义（t分别为-15．74、19．00和9．60，P均〈0．05）。7日龄时，TILR2、TLR9和MyD88蛋白水平与IL-2水平呈负相关（r分别为-0．978、-0．960和0．979，P均〈0．01）；与IL-10水平呈正相关（r分别为0．954、0．914和0．892，P均〈0．01）。结论在小鼠CMV感染早期（7d内），机体可通过TLR／MyD88信号通路，激活免疫应答，在感染早期起到一定抗病毒作用。但7d后则表现为Th1／Th2细胞免疫平衡失调。使病毒易于进一步复制并导致炎症扩散。

内质网应激介导的细胞凋亡在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用和机制研究

目的探讨内质网应激介导的细胞凋亡途径在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用和机制。方法将7日龄新生SD大鼠72只按随机数字表法随机分为对照组、缺氧缺血组及抑制剂组,每组各24只。缺氧缺血组模型的制备参照Rice法进行,抑制剂组在造模成功后侧脑室注射Caspase-12特异性抑制剂Z-ATAD-FMK,对照组不缺血不缺氧。72h后取脑组织标本,HE染色光镜下观察脑组织病理变化;RT-PCR和Western Blot法检测各组大脑皮质区Caspase-12 mRNA和活化蛋白的表达变化;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况。28日龄时采用Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力。结果HE染色提示,缺氧缺血组出现明显脑损伤,抑制剂组脑损伤病理改变较缺氧缺血组改善。RT-PCR结果表明,缺氧缺血组Caspase-12 mRNA相对表达量(0.567±0.063)高于对照组(0.318±0.046),抑制剂组Caspase-12 mRNA的相对表达量(0.455±0.030)低于缺氧缺血组(0.567±0.063),差异有统计学意义(F=53.482,P<0.05)。Western Blot结果表明,缺氧缺血组Cleaved Caspase-12蛋白的相对表达量(0.509±0.035)高于对照组(0.218±0.021),抑制剂组Cleaved Caspase-12蛋白的相对表达量(0.355±0.023)低于缺氧缺血组(0.509±0.035),差异有统计学意义(F=234.715,P<0.05)。TUNEL法检测结果提示,缺氧缺血组凋亡细胞率[(75.148±6.279)%]高于对照组[(3.468±0.994)%],抑制剂组凋亡细胞率[(47.680±8.786)%]低于缺氧缺血组[(75.148±6.279)%],差异有统计学意义(F=266.906,P<0.05)。缺氧缺血组大鼠穿越平台次数[(3.138±0.746)次]低于对照组[(6.225±0.962)次],抑制剂组大鼠穿越平台次数[(4.450±0.952)次]高于缺氧缺血组,差异有统计学意义(F=24.134,P<0.05)。结论内质网应激介导的细胞凋亡在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中起重要作用,抑制内质网应激介导的凋亡反应可以减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤,改善认知功能。

妊娠期宫内感染对胎龄<37周早产儿免疫指标的影响及相关机制研究

目的 探讨妊娠期宫内感染对胎龄<37周早产儿免疫指标的影响及相关机制,为临床诊治提供参考依据.方法 收集2016年10月-2018年4月在徐州医科大学附属医院娩出的早产儿189例为研究对象,其中宫内感染组86例,未感染组103例.比较出生后24 h、7d的外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)、白细胞介素(IL-6、IL-8、IL-1β)及肿瘤坏死因子(TNF-α)水平.收集脐带血,分离脐带血单个核细胞(UBMC),RT-PCR检测细胞中Tlr2、Tlr4、Socsl、Socs3 mRNA表达水平;使用细菌脂多糖LPS刺激未感染组UBMC,检测不同刺激时间(lh、3h、6h、12 h)的Tlr2、Tlr4、Socs1、Socs3 mRNA表达水平.结果 出生后24h、7d感染组早产儿血清CD3+、CD4+、CD8+水平明显高于未感染组,IgG、IgM、IgG水平明显低于未感染组,IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平明显高于未感染组(均P<0.05).感染组早产儿UBMC中Tlr2、Tlr4、Socs1、Socs3 mRNA表达水平明显高于未感染组(均P<0.05).LPS刺激各时间点Tlr2、Tlr4、Socs1、Socs3 mRNA表达水平均明显高于空白对照组(均P<0.05);其中Tlr2 mRNA表达在LPS刺激3h时达到峰值,Tlr4 mR-NA表达在LPS刺激1h时达到峰值,Socs1和Socs3 mRNA表达在LPS刺激3h时达到峰值.结论 宫内感染可引发早产儿体内免疫指标异常改变,其机制可能通过Toll样受体和Socs信号通路调节体内免疫反应.

人巨细胞病毒感染婴儿γδT、Treg细胞和相关细胞因子的表达及临床意义

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染婴儿外周血γδT细胞、调节性T细胞(Treg)的表达和相关细胞因子的含量及其临床意义。方法以22例HCMV感染婴儿(HCMV感染组)和22例门诊健康体检婴儿(对照组)为研究对象,流式细胞术检测两组外周血γδT细胞和Treg细胞的表达,ELISA法检测两组血浆IL-17、TGF-β1水平。结果 HCMV感染组的γδT细胞表达和IL-17水平高于对照组(P<0.01);Treg细胞表达和TGF-β1水平低于对照组(P<0.01)。HCMV组的γδT细胞表达与Treg细胞表达、TGF-β1水平呈负相关(P<0.05),而与IL-17水平呈正相关(P<0.05);Treg细胞表达与TGF-β1水平呈正相关而与IL-17水平呈负相关(P<0.05),IL-17水平与TGF-β1水平无相关性(P>0.05)。结论 HCMV感染婴儿存在γδT细胞和Treg细胞表达的失衡,γδT细胞可能参与了IL-17的分泌。