铝佐剂类型及吸附率对吸附无细胞百白破联合疫苗免疫原性的影响

目的研究铝佐剂类型及吸附能力对吸附无细胞百白破联合疫苗免疫原性的影响,筛选最佳佐剂。方法用磷酸铝(AP)、不同浓度磷酸盐处理的氢氧化铝(PTAH)以及氢氧化铝(AH)佐剂吸附百白破抗原,检测不同佐剂对各抗原的吸附率。制备不同佐剂类型和吸附率的制剂,腹腔免疫NIH小鼠,ELISA法测定免疫后各组小鼠血清抗体滴度。结果百日咳丝状血凝素(FHA)在所有佐剂中吸附率≥95%,百日咳类毒素(PT)、百日咳溶血素(PRN)、精制白喉类毒素(DT)和破伤风类毒素(TT)则随着铝佐剂中磷酸根增多吸附率降低。动物实验产生PT抗体水平大小关系:AP/AH>PTAH/无佐剂组;产生FHA抗体水平大小关系:AP/PTAH-3/AH>PTAH-2/PTAH-3>无佐剂组;产生PRN抗体水平大小关系:PTAH/AP/AH>无佐剂组;产生DT抗体水平大小关系:AP>PTAH>AH>无佐剂组;产生TT抗体水平大小关系:PTAH>AH/AP/无佐剂组。结论铝佐剂吸附力不影响抗原(DT除外)免疫原性,磷酸铝更适合作吸附无细胞百白破联合疫苗的佐剂。

百日咳毒素兔多克隆抗体的制备及其ELISA定量检测方法的建立和验证

目的制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)兔多克隆抗体(简称多抗),建立定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,并进行验证及应用。方法采用传统方法,用PT免疫青紫蓝兔制备PT兔多抗。优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并进行特异性、线性、准确性、精密性、灵敏度验证。采用建立的方法对脱毒过程样品及其他百日咳抗原纯化过程样品菌毛蛋白(fimbriae proteins,FIM)原液中PT抗原含量进行检测。结果PT抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的工作条件为PT兔多抗包被浓度为1μg/mL,酶标抗体稀释度为1∶8000。此检测系统能与PT纯化蛋白发生特异性反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉类毒素、破伤风类毒素均未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法线性检测范围在25~400 ng/mL之间;PT高、中、低浓度回收率分别为103.27%、91.48%、103.52%;酶标板内和板间的变异系数(CV)均小于10%;该方法的灵敏度为20.719 ng/mL,检测下限为41.438 ng/mL。检测5种不同脱毒工艺条件下、不同取样时间点的35批样品,其抗原含量变化均符合脱毒反应变化趋势。结论成功制备了PT兔多抗,并建立了精密性和准确性良好的定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,可用于组分百白破联合疫苗生产过程中化学脱毒样品的抗原含量检测。

氢氧化铝吸附重组肺炎蛋白疫苗解吸附方法

目的:建立氢氧化铝吸附重组肺炎蛋白疫苗原液及制剂的解吸附方法。方法:在各重组肺炎蛋白的氢氧化铝吸附原液或4组分疫苗制剂半成品中加入解吸附试剂[含0.4%(m/v)十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12),0.25 mo L·L-1的磷酸盐缓冲液,p H 6.5],37℃下静置4.5 h,通过Lowry蛋白检测、SDS-PAGE和HPLC对蛋白的解吸附率进行测定。结果:结果显示该方法可将重组肺炎蛋白疫苗的4种蛋白从氢氧化铝佐剂上解吸附下来,解吸附率达95%以上,且不影响蛋白的完整结构。结论:建立了重组肺炎蛋白疫苗4个组分蛋白的氢氧化铝吸附原液及制剂半成品的解吸附方法,可用于疫苗吸附原液和制剂半成品定量分析的前处理。