非病毒载体H1s-EGFc的构建及其功能的初步研究

目的 探讨和构建一种用于靶向性基因治疗的非病毒载体。方法 采用基因工程的方法构建H1s EGFc融合蛋白表达载体 ,在毕赤酵母表达系统中获得分泌表达的融合蛋白。使用阴离子交换柱及分子筛进行纯化。制备H1s EGFc融合蛋白与pKG杀伤基因表达重组体的复合物。选用表皮生长因子受体高表达的HeLa细胞及表皮生长因子受体不表达的Jurkat细胞进行复合物特异性杀伤活性测试。结果 构建并表达了H1s EGFc融合蛋白 ,所获融合蛋白纯度可达 90 %以上。该融合蛋白能够有效地包装杀伤基因表达载体 ,将其导入表皮生长因子受体特异性表达的肿瘤细胞中 ,达到靶向性杀伤作用 ,当融合蛋白 /杀伤基因复合物使用剂量分别是 3、6、9μg/ml时 ,杀伤率分别为30 6 %、36 2 %和 5 8 1% ;而对表皮生长因子受体不表达的细胞无杀伤作用。结论 融合蛋白H1s EGFc能够有效地用于功能基因的包装及转运 ,可以作为非病毒载体应用于恶性肿瘤的靶向性基因治疗。