谷固醇血症患儿临床诊疗及基因检测分析

目的:分析谷固醇血症患儿的临床表现、实验室检查、基因检测及血清植物固醇谱结果,以提高对该罕见病的诊疗水平。方法:回顾性分析2021年4月至2023年4月在无锡市儿童医院皮肤科首诊并诊断为谷固醇血症的患儿临床特征,常规生化检验结果。行全外显子测序,Sanger测序和植物固醇谱检测分析,随访1年余观察患儿临床症状变化及实验室检查指标变化。结果:3例患儿中2例以首发皮肤黄色瘤就诊。3例患儿共检测出4种基因突变,其中发现1个新突变位点为本文首报。患者1、2的ABCG8外显子发生复合杂合突变(ABCG8 NM_022437:c.1724G>A,p.G575D,ABCG8 NM_022437:c.788G>A,p.R263Q)。患者3的ABCG5外显子发生复合杂合突变(ABCG5 NM_022436.2:c.751C>T,p.Gln251*,ABCG5 NM_022436.2:c.-76C>T)。治疗前患儿1、2植物固醇谱检测高于正常水平。3例患儿均低固醇饮食,其中患儿1联合口服依哲麦布。治疗并随访1年余3例患儿的血脂水平均恢复正常;患儿1和2的植物固醇谱水平较治疗前显著降低;2例首发皮肤黄瘤患儿的黄瘤明显变平甚至消失。结论:谷固醇血症患儿常表现为关节附近的皮肤黄瘤,胆固醇升高。诊断需要基因检测及血清植物固醇谱分析证据。低植物固醇饮食、依折麦布对其治疗至关重要。

点阵CO_(2)激光联合外用药物治疗稳定期白癜风临床疗效及相关影响因素分析

目的:观察点阵二氧化碳激光联合得宝松及多药物治疗稳定期白癜风的临床疗效。方法:将51例稳定期白癜风患者随机分为两组,治疗组:25例,予点阵二氧化碳激光术后即刻涂抹得宝松溶液,联合吡美莫司、他卡西醇、卤米松乳膏外用;对照组:26例,仅外用吡美莫司、他卡西醇及卤米松乳膏。患者每月随访,6个月后观察两组疗效。对比两组患者治疗后色素积分。结果:6个月治疗结束后观察两组白斑治疗情况,治疗组有效率80.00%,对照组53.85%,治疗组疗效优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组色素积分(2.23±0.69)分,较对照组色素积分(1.64±0.48)分显著增高(P<0.05)。治疗过程中均未出现严重不良反应。结论:点阵CO_(2)激光联合得宝松及外用吡美莫司、他卡西醇、卤米松乳膏治疗稳定期白癜风患者疗效好,不良反应少。

中波紫外线诱导的提前衰老成纤维细胞中环状RNA的表达及分析

目的:对于中波紫外线诱导的提前衰老的人类真皮成纤维细胞(UVB stress induced premature senescence,UVB-SIPS),笔者使用基因芯片筛选了其中环状RNA的表达谱。方法:构建UVB-SIPS模型;采用β-gal染色、细胞周期、CCK8(cell counting kit)检测衰老成纤维细胞;基因芯片技术筛选差异表达的环状RNA;聚合酶链式反应验证相关环状RNA;利用Clusterprofiler r package,对上下调基因分别进行KEGG和GO的富集分析。结果:与对照组比较(差异表达倍数≥1.5,P<0.05),共有472个差异表达的环状RNA,其中228个环状RNA上调,244个环状RNA下调。在472个差异表达的环状RNA中随机选择了8个环状RNA进行聚合酶链式反应。其中有5个环状RNA(hsa_circ RNA_100797,hsa_circ RNA_100686,hsa_circ RNA_400036,hsa_circ RNA_101755,hsa_circ RNA_003794)与基因芯片的结果一致。GO分析显示,UVB-SIPS组细胞中差异表达的环状RNA亲本基因与细胞对紫外线辐射的反应、DNA修复复合物、有丝分裂、微管蛋白结合等注释条目有关;KEGG分析显示,UVB-SIPS组细胞与未处理组细胞相比,差异表达的环状RNA的亲本基因可能参与与衰老相关的细胞周期、p53信号通路、PPAR信号通路等的调节。结论:本研究初步揭示了提前衰老的人类真皮成纤维细胞中环状RNA的表达,可为未来研究光老化发生机制奠定基础。

环状RNA在皮肤肿瘤中的研究进展

环状RNA(circRNA)是mRNA在剪接过程中5'端与3'端剪接到一起而形成的非编码RNA。circRNA的高度稳定性、高丰度和组织特异性赋予circRNA的许多潜在功能,近年来研究发现circRNA对基因转录及转录后水平有重要意义,此外已发现circRNA与多种癌症的发生有关。皮肤基底细胞癌中,显著异常表达的circRNA潜在靶向与癌症相关的miRNA,如hsa-miR-19b-1。皮肤鳞癌中circRNA的miRNA响应元件已有23个与之对应的且与皮肤鳞癌相关的miRNAs。目前发现肿瘤中存在许多异常表达的circRNA,对于circRNA-miRNA的研究,可以为癌症的基因靶向治疗提供新思路。

miR-4655-3p在中波紫外线旁观者效应中的作用研究

目的:探讨miR-4655-3p在中波紫外线旁观者效应中的作用。方法:使用miR-4655-3p抑制剂(inhibitor)或其对应的阴性对照(negative control,NC)转染人皮肤成纤维细胞(HSFs)后,对不同组HSFs进行UVB(60mJ/cm^2)单次照射,照光后24h取细胞培养上清液与正常HSFs共孵育48h,分别测定细胞增值率、氧化损伤水平及凋亡率。结果:inhibitor转染组细胞中miR-4655-3p相对表达量较NC转染组明显降低(P<0.05);照光后,inhibitor转染组细胞、细胞培养上清液及该上清液孵育的HSFs中miR-4655-3p的相对表达量较NC转染组显著降低(P<0.05);与NC组旁观者细胞相比,Inhibitor组旁观者细胞的增殖率增加,氧化损伤水平及凋亡率减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-4655-3p在中波紫外线旁观者效应中发挥作用,抑制其表达可在一定程度上减弱紫外线旁观者效应。

低危型HPV-11E6在小鼠骨髓源树突细胞中的定位表达及其诱发凋亡的研究

目的采用绿色荧光蛋白表达系统追踪低危型HPV-11E6蛋白在树突细胞(dentritic cell,DC)内的表达,探讨低危型HPV-11E6在树突细胞中的定位,观察低危型HPV-11E6蛋白诱导的树突细胞凋亡。方法构建真核表达载体pGFP-11E6,转染小鼠骨髓源树突细胞,荧光显微镜动态观察E6蛋白的定位和表达水平。采用流式细胞术检测转染后24 h低危型HPV-11E6蛋白的凋亡。结果树突细胞在分别转染pGFP-11E6和p EGFP-C1质粒后,GFP-11E6主要定位于细胞质内;而对照组的只表达GFP的蛋白则均匀分布于树突细胞。蛋白表达水平的检测表明,在转染树突细胞12 h,GFP-11E6和GFP蛋白开始表达(荧光强度分别为73.22,84.34),转染24 h蛋白表达均到达高峰(荧光强度分别为98.25,126.77),转染48 h蛋白表达荧光强度分别为87.46和103.56,转染72 h蛋白表达荧光强度分别为72.11和97.45。Annexin-Ⅴ/PI流式细胞仪检测可见,GFP-11E6转染的细胞发生了凋亡。结论低危型HPV-11E6主要定位于树突细胞质内,并且可以诱导树突细胞凋亡。

激光治疗甲真菌病疗效的系统评价

目的:评价激光治疗甲真菌病的疗效。方法:对电子数据库Pub Med,Web of science、中国知网、万方数据库、维普数据库系统检索至2018年1月相关文献并下载。纳入符合标准的激光治疗甲真菌病的随机对照试验及临床自身对照试验,采用R软件进行Meta分析。结果:共纳入36篇文献,患者1 783例,病甲4 501个。单个率的Meta分析显示:真菌学治愈率达62%,95%CI(0.52-0.72)。其中,1 064nm Nd:YAG激光治疗甲真菌病的真菌学治愈率为62%,95%CI(0.51-0.73);CO2激光真菌学治愈率为67%,95%CI(0.37-0.91)。结论:1 064nm Nd:YAG激光和CO2激光治疗甲真菌病有一定的疗效且安全性较高。受纳入研究质量所限,上述结论可能需要开展进一步的随机对照试验加以验证。

克隆、表达和纯化具有生物学活性的巴西诺卡菌P61蛋白

目的构建巴西诺卡菌P61基因原核重组表达载体,在大肠杆菌中表达具有生物活性的P61蛋白,为P61蛋白的进一步相关研究提供实验基础。方法通过基因合成的方法合成P61基因,将其插入到质粒pET30a(+)载体并导入BL21大肠杆菌,应用IPTG进行诱导表达。通过Western Blot对表达产物进行分析。应用过氧化氢酶检测试剂盒检测其过氧化氢酶活性。结果 P61蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,且具有较高的过氧化氢酶活性,能被感染巴西诺卡菌的小鼠血清识别。结论成功构建了巴西诺卡菌P61蛋白的原核表达质粒,并能在原核表达宿主E.coli BL21中进行高效表达,且表达产物具有过氧化氢酶活性。

secA1基因用于诺卡菌菌种鉴定分型的研究

目的研究secA1基因在诺卡菌菌种的鉴定分型能力。方法对59株诺卡菌的secA1基因进行聚合酶链反应扩增,扩增片段纯化后测序,并从Gen Bank数据库下载32株诺卡菌secA1基因序列进行补充,采用DNAStar软件对所有序列计算种内与种间相似度水平,并用Mega 6.06软件的邻接法构建诺卡菌菌种系统发育进化树。结果 91株受试诺卡菌secA1基因的种内相似度为97.2%-100.0%,平均相似度达98.6%;种间相似度为85.2%-98.4%,平均相似度达91.8%。以secA1基因构建的系统发育进化树中,16种诺卡菌被准确分离为16个独立的分支,诺卡菌近缘种新星诺卡菌复合体、少食/短链诺卡菌复合体均可有效分离。结论 secA1基因序列分析为诺卡菌菌种的鉴定分型提供了一种新方法,在诺卡菌近缘种的分型方面有独特的优势。

鼻疽诺卡菌感染小鼠足垫后组织病理变化以及细胞因子分泌情况的初步研究

目的了解鼻疽诺卡菌感染动物模型小鼠足垫后不同时间的组织病理进展变化以及细胞因子分泌情况,为鼻疽诺卡菌致病机制研究提供依据。方法应用对数生长期的鼻疽诺卡菌注射于小鼠足垫,建立感染模型。将感染1、3、7、14 d后小鼠分别脱臼处死,用手术刀片切取感染小鼠的足垫,制备切片,应用HE染色观察组织不同时间的病理变化,通过免疫组化研究感染过程中IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF表达分泌情况。结果通过HE染色观察到感染后第1天中性粒细胞浸润,炎症形成;感染后第3天中性粒细胞脓肿形成,进入急性感染时期;感染后第7天肌肉组织间大量肌纤维母细胞及血管内皮细胞增生,感染转入慢性感染时期;感染后第14天肌肉组织间大量肌纤维母细胞及血管内皮细胞增生,见局灶小脓肿,周围见片状增生的泡沫样巨噬细胞,进入感染修复期。组织免疫组化结果显示,在炎症形成时期,组织中的IL-6和TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在急性感染期,组织中仅可见TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在慢性感染期,组织中IL-6、IL-12、IFN-γ和TNF表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在感染修复期,组织中的IL-6、IFN-γ和TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论鼻疽诺卡菌感染小鼠足垫后出现明显的病理变化周期,在感染第3天开始进入急性感染时期,感染后第7天转入慢性感染时期,感染后第14天进入组织修复期,并且IL-6、IFN-γ、TNF参与了炎症反应,尤其是IL-6表达量最高,主要促进Th0向Th1和Th17亚群分化,激活巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞等,增强其吞噬和杀伤功能,以杀伤胞内鼻疽诺卡菌。